冷沉淀凝血因子制备质量的影响因素分析

仇严妹

[摘要]目的 研究采血时间、制备时间、制备方法、速冻方法对冷沉淀凝血因子质量的影响。方法 随机选取2017年10月～2018年3月采集的200 ml全血，分别在6、8、13、18 h这四个时间段内制备成新鲜冰冻血浆，每段为25份新鲜冰冻血浆，相应做好标识，之后加工成冷沉淀凝血因子，对其中的Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量进行检测。结果 各个时间段下由新鲜冰冻血浆制备而成的冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量活性随着制备时间的延长明显下降（P<0.05），而各时间段的纤维蛋白原含量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与18 h的质量合格率比较，采血后6、8、13 h的质量合格率均显著增高，差异有统计学意义（P<0.05）。6、8、13 h这三个时间段的质量合格率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 为保证冷沉淀凝血因子制备质量，应对全血采集时间进行控制，200 ml要求在7 min以内采完，400 ml要求在13 min內采完，并在6～8 h内、最长不要超过13 h分离新鲜冰冻血浆作为原料浆，同时建议使用平板速冻机的制备方法，以满足临床输注应用的有效性和安全性。

[关键词]冷沉淀凝血因子;采血因素;制备因素;时间因素

[中图分类号] R331          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）7（b）-0199-03

[Abstract] Objective To study the influence of blood collecting time， preparation time， preparation method and quick freezing method on the quality of cryoprecipitated coagulation factor. Methods A total of 200 ml whole blood collected from October 2017 to March 2018 was randomly selected to prepare fresh frozen plasma within 6， 8， 13 and 18 hours， each of which contained 25 fresh frozen plasma samples， which were marked accordingly， and then processed into cryoprecipitated coagulation factors. The content of factor Ⅷ and fibrinogen were detected. Results The activity content of factor Ⅷ in cryoprecipitated coagulation factor prepared from fresh frozen plasma decreased significantly with the prolongation of preparation time （P<0.05）. There was no significant difference in fibrinogen content among different time periods （P>0.05）. Compared with the qualified rate of 18 hours， the qualified rate of 6， 8 and 13 hours after blood collection was significantly higher， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the quality qualification rate among the three periods of 6， 8 and 13 hours （P>0.05）. Conclusion In order to ensure the preparation quality of the cryoprecipitated coagulation factor， the collection time of whole blood should be controlled， of which 200 ml whole blood should be collected within 7 minutes， 400 ml within 13 minutes， and fresh frozen plasma should be separated into material plasma within 6-8 hours， no longer than 13 hours after blood collection. At the same time， it is also suggested to use the preparation method of plate freezer so as to satisfy the validity and safety of clinical transfusion and application.

[Key words] Cryoprecipitated coagulation factor; Blood collection factors; Preparation factors; Time factor

自1964年朱迪斯·普尔博士发现冷沉淀以来，冷沉淀作为一种血液制品，在临床中得到了越来越广泛的推广与使用[1]。冷沉淀即把新鲜冰冻的血浆解冻之后进行离心处理，血浆全部移除之后余下不溶的沉淀物这一过程[2]。冷沉淀中富含的凝血因子、纤维蛋白原是可以治疗血友病、纠正凝血功能障碍等的有效因子[3]。近年来，无偿献血得到了很好的推广，来自于街头、乡村的血液捐献越来越多，而随之出现的问题则是血液检测、分离的延迟，继而影响到新鲜冰冻血浆的制备[4]，在制备时间、制备温度以及制备方法等因素影响下，其产生较大的质量差异，从而影响到临床使用效果。为了能制备出高质量的冷沉淀制品，本研究就影响冷沉淀凝血因子制备质量的因素与对策进行分析，现报道如下。

1资料与方法

1.1标本来源

随机选取2017年10月～2018年3月采集的200 ml全血，分别在6、8、13、18 h这四个时间段内制备成新鲜冰冻血浆，每段为25份新鲜冰冻血浆，相应做好标识，之后加工成冷沉淀凝血因子。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。纳入标准：被采集全血者均符合《献血者健康检查要求》，排除不符合上述标准者全血。

1.2方法

1.2.1制备新鲜冰冻血浆的方法  应当对采血时间进行控制，200 ml全血采集时间>7 min，400 ml全血采集时间>13 min，所采集的全血不可用于制备新鲜冰冻血浆[5]。对这部分全血进行特殊标识，将血浆分离出来制备成冰冻血浆，这部分血浆不可用于制备冷沉淀。对在正常采血时间内的全血，采集后储存于冷藏環境中，采集之后按照6、8、13、18 h这四个时间段内做好标识并分离血浆，以每分钟3800转的速度持续进行15 min的离心处理，分理出新鲜冰冻血浆，采血时间超过18 h后分离的血浆，制备成冰冻血浆。把新鲜冰冻血浆用传统低温冰箱、平板速冻机速冻成固态，然后分成A组、B组，A组血浆平铺放到平板速冻机当中，进行30 min的速冻;B组血浆平铺放到低温保存箱中，速冻2 h，之后取出放置到温度为-18℃的低温冰箱中。

1.2.2制备冷沉淀凝血因子的方法  使用虹吸法[6]制备冷沉淀凝血因子，注意将容量控制在标示量（ml）±10%，热合之后第一时间放置到温度设定在-50℃以下的血浆速冻机中，1 h之后取出，转移放置到温度为-18℃以下的低温冰箱中存储。

1.2.3 Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量测定方法  把冷沉淀凝血因子放入到温度调控在37℃的恒温水浴箱当中，融化之后严格按照有关检测操作规程标准，采用凝固法测定Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量[7-8]。

1.3观察指标

对各个时间段以及不同速冻方法下冷沉淀凝血因子当中包含的Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量进行差异对比，另外对各时间段制备冷沉淀凝血因子的质量检测结果进行比较。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1各个时间段下冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子、纤维蛋白原含量的比较

各个时间段下由新鲜冰冻血浆制备而成的冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量活性随着制备时间的延长明显下降（P<0.05），而纤维蛋白原含量的比较差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

2.2各时间段制备冷沉淀凝血因子质量检测结果的比较

与18 h的质量合格率比较，6、8、13 h时间段的质量合格率均显著增高，差异有统计学意义（P<0.05）;6、8、13 h时间段的质量合格率比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。

3讨论

新鲜冰冻血浆是临床中广泛应用的一种血液成分，主要用来治疗凝血疾病，同时在手术和急性失血的治疗方面，也有显著的止血、促进组织修复作用[9-10]。冷沉淀凝血因子是新鲜冰冻血浆在保存期内基于1～6℃封闭状态下进行融化，同时将血浆中含有的冷不溶解物质进行分析，并在1 h内进行冻结而成的一种成分血。对在8～18 h这几个时间段内分离出来的新鲜冰冻血浆经不同速冻方法制备而成的冷沉淀凝血因子是否能够满足质量控制要求，目前临床有关研究报道较少，因此，研究影响到冷沉淀凝血因子制备质量的时间因素、速冻方法因素对临床更好地应用具有积极的指导意义。

冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子属于性质极不稳定的一种凝血因子，其半衰期很短，只有8～12 h，而且活性在很大程度上会受到献血者自身凝血因子水平、血液采集过程中的各项因素、制备时间和温度以及运输等诸多因素的影响，例如，血液应为EDTA抗凝血、运输期间不能出现剧烈震动、不能出现融血、采集至送至实验室的时间需要在4 h内完成、保存温度最低为2℃、最高不能超过24℃等[11-13]。本研究结果显示，各个时间段下由新鲜冰冻血浆制备而成的冷沉淀凝血因子，其中Ⅷ因子含量活性随着制备时间的延长明显下降（P<0.05），而纤维蛋白原含量的比较，差异无统计学意义（P>0.05），提示在最佳的制备时间段制备新鲜冰冻血浆，对冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子含量有着很大的影响。

本研究结果还显示，在采血后6 h内制备出的新鲜冰冻血浆所分离出来的冷沉淀凝血因子合格率为96.0%，8 h这一时间段内的合格率为92.0%，13 h这一时间段内的合格率也达到了84.0%，均符合质控要求的75%受控标准;但是在18 h这一时间段内所制备冷沉淀凝血因子的质量合格率仅为52.0%。与18 h这一时间段内所制备的冷沉淀凝血因子质量合格率相比，6、8、13 h这三个时间段的质量合格率均显著增高，差异有统计学意义（P<0.05）。用于制备冷沉淀凝血因子的血浆最佳选择在采集之后6～8 h内，最长不能超过13 h分离速冻的血浆作为原料浆，然后将研究结果用到制备血浆工作之中，这样制备冷沉淀凝血因子的血浆制备每年大大增加，不仅可以满足临床输注的安全性，同时还能满足不断增长的冷沉淀凝血因子需求量[14-15]。以往临床使用的低温冰箱制备法虽然在较短时间内制备的冷沉淀凝血因子活性较高，可满足冷沉淀质量要求，但随着制备时间的延长，其显著性也会有所下降。

综上所述，影响到冷沉淀凝血因子制备质量的因素主要是全血采集时间的控制和制备新鲜冰冻血浆操作时间的长短以及速冻方法的选择，为保证冷沉淀凝血因子制备质量，应对全血采集时间进行控制，200 ml要求在7 min以内采完，400 ml要求在13 min内采完，并在6～8 h内、最长不要超过13 h分离新鲜冰冻血浆作为原料浆，同时建议使用平板速冻机的制备方法，以满足临床输注应用的有效性和安全性。

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（收稿日期：2019-01-02  本文编辑：祁海文）