HPLC法检测棉花中苯氧羧酸类农药残留的研究

2019-09-24徐东峰王清波孔清清

中国纤检 2019年8期

文/徐东峰王清波孔清清

苯氧羧酸类农药是应用非常广泛的除草剂，其在农产品中的残留一旦进入人体会对人的身体健康造成危害，各国都对其残留量制定了严格的限量[1]。目前对苯氧羧酸类残留的检测方法有GC-MS法、LC-MS法等，相对于其他方法，HPLC法对仪器要求较低且不需要繁琐的衍生化过程[2]。本试验采用HPLC作为分析仪器，考察了不同提取试剂及不同的提取条件对棉花中苯氧羧酸残留提取效果的影响。

1 试验部分

1.1 仪器

Agilent高效液相色谱仪，R-210旋转蒸发仪，KQ-500KDE超声清洗器。

1.2 药品及试剂

2-甲-4-氯乙酸，2-甲-4-氯丙酸，2，4-D丙酸标准品均购自美国Accustandard公司；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠、丙酮、二氯甲烷均为分析纯，水为经过Millipore系统处理的去离子水。

1.3 色谱条件

色谱柱：安捷伦 Eclipse X D B-C 1 8色谱柱（4.6×150mm）；流动相A：乙腈，流动相B：7.3g磷酸二氢钠溶于1000mL去离子水中，用磷酸将pH调到4；梯度洗脱：开始用10%的乙腈与90%的磷酸二氢钠缓冲盐溶液，然后在30min内线性转变为90%乙腈与10%的磷酸二氢钠缓冲盐溶液；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：230nm；进样量：20 μL。

1.4 试验方法

取2g棉花样品，置于200mL锥形瓶中，分别加入50mL丙酮、10mL水、0.1mL甲酸，混合均匀后用超声波提取器提取20分钟，收集提取溶液于旋蒸瓶中。将剩余的样品用同样的方法继续提取5分钟，将提取溶液收集到旋蒸瓶中。用旋转蒸发仪蒸发掉溶液中的有机部分，将剩余的溶液倒入150mL分液漏斗中，加入10mL饱和氯化钠溶液，分两次用30mL二氯甲烷萃取两次，将二氯甲烷溶液收集到旋蒸瓶内，用旋转蒸发仪蒸发至近干，再用氮气吹干后，加入2mL甲醇溶解，并用高效液相色谱仪分析。

2 讨论

2.1 提取用酸的选择

由于苯氧羧酸类农药属于酸性成分，在提取溶液中添加一定的酸可以保证其结构，抑制其解离。取3份棉花空白样品，分别置于3个200mL锥形瓶中，在其中分别滴加浓度为600mg/L的2-甲-4-氯丙酸标注品溶液，300mg/L的2-甲-4-氯乙酸标准品溶液，200mg/L的2，4-D丙酸标准品溶液各1mL。各加入50mL丙酮、10mL水之后分别加入甲酸、硫酸、盐酸各0.1mL，按照1.4的方法进行处理，用HPLC进行分析，比较3种酸对提取效果的影响（见图1）。

由试验结果可知，3种酸对苯氧羧酸类除草剂的提取效果影响差别不大，其中添加甲酸后提取效果较为均衡，因此选择甲酸作为提取过程中的酸化试剂。

2.2 提取试剂的选择

对2.1中的3份加标棉花样品，分别使用添加了0.1mL甲酸的50mL无水乙醚、50mL丙酮、50mL乙腈与10mL超纯水混合进行提取，按照1.4的提取及萃取方法进行处理，将处理后的样品溶液用高效液相色谱仪分析，得到不同试剂的提取效果（见图2），通过对比，相对于其他两种提取溶剂丙酮的综合提取效果更好。

2.3 甲酸添加量的考察

本试验考察了不同甲酸添加量对提取效果的影响，对2.1中的3份加标棉花样品，使用丙酮与水混合提取，在提取溶剂中分别加入0μL、50μL、100μL甲酸，按照1.4的方法进行提取与萃取，将处理后的样品溶液用高效液相色谱仪分析后比较提取效果。通过比较确定添加100 μL甲酸后的提取溶剂提取效果最好。

3 方法学研究

3.1 精密度与回收率

在3份空白棉花样品中分别加入浓度为0.6ppm、6ppm、30ppm的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸混标2mL，按照1.4的方法进行处理后，用高效液相色谱仪分析，重复3次，考察精密度。

另外取浓度为0.6ppm、6ppm、30ppm的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸单标用HPLC进行分析，将得到的峰面积与不同添加量的3份样品的平均峰面积进行对比得到方法回收率。

由试验结果可知低添加量样品的精密度及回收率较中、高添加量的样品相差较大（见表1～表3），可见本方法对中、高残留量样品检测效果更好。

表1 2-甲-4-氯乙酸精密度与回收率

表2 2-甲-4-氯丙酸精密度与回收率

表3 2,4-D丙酸精密度与回收率

3.2 线性范围

表4 3种物质方法曲线

分别取浓度为0.6μg/mL、3μg/mL、6μg/mL、18μg/mL、30μg/mL的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸混标2mL加入5份2g空白样品中，按照1.4的方法进行处理后，用高效液相色谱仪分析，得到3种物质的工作曲线（见表4），由试验数据可以得出3种物质在0.3μg/g～15μg/g浓度范围内线性良好。