不同浓度6-BA对白芨丛芽诱导的影响

李云海　黑有兰　陈丽华

摘要    试验采用MS培养基为基础培养基，在添加0.5 mg/L NAA的情况下，分别添加不同浓度梯度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L），研究不同浓度6-BA对白芨丛芽诱导增殖的影响。结果表明，6-BA浓度变化对白芨丛芽的诱导增殖具有显著的影响，在试验浓度范围内，白芨试管苗丛芽增殖数与6-BA浓度成正相关，而增殖丛芽的平均株高和平均叶宽则与6-BA浓度成负相关;当6-BA浓度为2.0 mg/L时，对白芨试管苗丛芽诱导增殖的效果最好，具体表现为试管苗丛芽的增殖数量多且较健壮。

关键词    白芨;6-BA浓度;组织培养;丛芽诱导

中图分类号    S567.239        文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2019）15-0077-01

白芨（Bletilla striata（Thunb）Reichb. f.）是一种多年生兰科草本植物，又名明白芨、紫兰根、甘根、白给等[1]。我国白芨资源主要分布在陕西、河南、四川、云南等地，有研究认为，产于云南、四川的白芨质量最好[2]。白芨是一种传统的中药，其地下假鳞茎是白芨的主要药用部位，一般将白芨假鳞茎进行干燥后入药，主要药用功效是治疗各类外伤、肿瘤等，其含有的黏质多糖具有一定的抗癌作用[3]。另外，白芨假鳞茎具有很好的黏性，在工业上也可用作糊料[4]。

近年来，由于人们对野生白芨的过度采挖，导致野生白芨资源数量急剧下降。为了满足生产和市场需求，目前多采用组织培养的方法进行白芨种苗的快速繁育。鲁光耀等[5]对白芨组织培养快速繁殖体系进行了研究，采用MS液体悬浮培养的方式对白芨种苗进行快速繁殖。叶  静等[6]在白芨种子无菌萌发及组织培养试管快繁体系建立研究中认为，MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA培养基适合白芨丛芽的增殖。李慧敏等[7]则在试验研究后得出了MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L NAA+有机附加物适合白芨假鳞茎诱导的结论。

本试验在MS+0.5 mg/L NAA培养基的基础上，探究不同浓度6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）对白芨丛芽诱导增殖效果的影响，以期从中筛选出与该浓度NAA协同配合效果较好的6-BA浓度。

1    材料与方法

1.1    试验材料

供试材料为实验室保存的白芨基础苗。

1.2    试验设计

试验在MS+NAA 0.5 mg/L培养基的基础上，根据添加6-BA浓度的不同设4个处理，分别为添加6-BA 0.5 mg/L（B1）、1.0 mg/L（B2）、1.5 mg/L（B3）和2.0 mg/L（B4）。将实验室保存的白芨基础苗均匀切分成每丛5苗的小丛，接种至4个不同浓度6-BA处理的培养基中，每处理接种5瓶（即5次重复），每瓶接入5小丛。把接种好的培养瓶置于温度21～23 ℃、光照强度1 500～2 000 lx、光照时间12 h/d的培养室中培养。

1.3    调查统计

培养过程中，每周观察白芨丛芽生长情况。培养至第45天时，统计每个处理5瓶试管苗丛芽的增殖和生长情况（增殖芽数、平均株高、平均叶宽等），并进行生物统计学分析。

2    结果与分析

2.1    不同浓度6-BA对白芨丛芽增殖的影响

由表1可知，随着6-BA浓度的升高，白芨试管苗丛芽增殖倍数逐渐增大，当6-BA浓度为2.0 mg/L时，白芨试管苗丛芽增殖倍数达到最大，为7.12倍。经方差分析得出，处理B4与处理B1、B2、B3之間芽数差异达到极显著水平，处理B3与处理B2、B1之间芽数差异也达到极显著水平，处理B2和处理B1之间芽数差异不显著。说明在试验浓度范围内，白芨试管苗丛芽的增殖数与6-BA浓度成显著正相关。当6-BA浓度为2.0 mg/L时，白芨试管苗丛芽增殖最多，而且此时的试管苗丛芽仍较健壮。因此，就白芨丛芽增殖这一指标而言，与NAA 0.5 mg/L配合的适宜6-BA浓度为2.0 mg/L。

2.2    不同浓度6-BA对白芨丛芽株高的影响

由表2可知，随着6-BA浓度的升高，白芨试管苗丛芽的平均株高逐渐降低。经方差分析可知，不同浓度6-BA处理对白芨试管苗丛芽株高的影响差异显著。进行多重比较发现，处理B1与处理B3、B4之间差异极显著，与处理B2之间差异显著;处理B2与处理B4之间差异极显著，与处理B3之间差异不显著;处理B3与处理B4之间差异不显著。说明处理B4（6-BA浓度为2.0 mg/L）白芨试管苗丛芽较矮壮，没有出现徒长等现象。

2.3    不同浓度6-BA对白芨丛芽叶宽的影响

由表3可知，白芨试管苗丛芽平均叶宽与试验浓度范围内6-BA的浓度成负相关，即随着6-BA浓度的升高，白芨试管苗的平均叶宽逐渐变窄。经过方差分析可得出，各处理间白芨试管苗平均叶宽差异显著。经多重比较后可得出，处理B1与处理B2、B3、B4之间有极显著差异;处理B2与（下转第80页）

处理B4、处理B3与处理B4之间有极显著差异;处理B2与处理B3之间差异不显著。说明当6-BA浓度为2.0 mg/L时，试管苗的叶片会变得较窄，但观察发现，其叶片仍较嫩绿，未出现弱化或玻璃化等现象。

3    结论与讨论

在植物组织培养快速繁殖过程中，细胞分裂素6-BA的作用主要是促进芽的形成和生长，生长素NAA的作用则主要是促进试管苗的生长、壮苗和生根等。本试验结果表明，在MS培养基添加0.5 mg/L NAA的情况下，6-BA浓度的变化对白芨丛芽的诱导增殖具有显著影响;而且在试验浓度范围内（0.5～2.0 mg/L），白芨试管苗丛芽增殖数与6-BA浓度成正相关，增殖丛芽的平均株高和平均叶宽与6-BA浓度成负相关。当6-BA浓度达到2.0 mg/L时，丛芽的增殖倍数达到最大，为7.12倍，诱导芽增殖的效果最好;而且观察发现，此时的试管苗丛芽仍较健壮，没有出现徒长、弱化或玻璃化等现象。因此，可以认为，与0.5 mg/L NAA协同配合使用诱导白芨试管苗丛芽健壮增殖的适宜6-BA浓度为2.0 mg/L，既能保障白芨试管苗丛芽的快速增殖，又能使试管苗丛芽健壮生长而不出现徒长、弱化或玻璃化等情况。

4    参考文献

[1] 中国科学院《中国植物志》编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1999.

[2] 陈灿，陈海霞.白芨繁殖研究进展[J].湖南农业科学，2015（4）：135-137.

[3] 陶阿丽，金耀东，刘金旗，等.中药白芨化学成分、药理作用及临床应用研究进展[J].江苏农业科学，2013，41（11）：8.

[4] 石丽敏，卢华兵，胡贤女.白芨的研究现状[J].农业科技通讯，2016（5）：6-8.

[5] 鲁光耀，杨仙，蒋瑞彬，等.白芨组培快速繁殖体系研究[J].浙江中医药大学学报，2015，39（5）：383-389.

[6] 叶静，郑晓东，管常东，等.白芨的无菌萌发和组织培养[J].云南大学学报（自然科学版），2010，32（增刊1）：422-425.

[7] 李慧敏，杨冠海，李明静.白芨瓶内假鳞茎诱导研究[J].南方农业学报，2013，44（10）：1067-1612.