云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的影响

马 欧，郭美仙，何正春，杨毅雯

云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的影响

马 欧1，郭美仙2，何正春2，*杨毅雯2

(1. 昭通市中医医院，云南，昭通 657000；2. 大理大学药学与化学学院，云南，大理 671000)

研究云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的作用。通过制备大鼠离体子宫标本，观察云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动，催产素及乙酰胆碱诱发收缩活动的影响。云南松松塔正丁醇提取物可使正常大鼠自发收缩和催产素及乙酰胆碱诱发收缩的频率减慢、张力减小、活动力减弱。云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动具有抑制作用，其机制可能跟阻断催产素受体和M受体有关。

云南松松塔；大鼠离体子宫；催产素；乙酰胆碱

云南松(Franch.）为松科松属，属裸子植物门[1-2]，松塔是其球果。《本草纲目》中记载松塔具有祛痰、止咳平喘、祛风、润肠、安神等功效。随着现代实验研究的深入，人们发现松塔中含有多糖、木质素、二萜、黄酮、挥发油[3-8]等多种化学成分。此外，松塔还具有抗病毒[9]、抗氧化[10]、免疫增强[11]和抗肿瘤[12]等作用。郭美仙等人[13]研究发现云南松松塔乙醇浸膏，石油醚部位和氯仿部位对静息离体气管有舒张作用，然而云南松松塔对子宫平滑肌的作用至今尚未见报道。因此，本实验观察了云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动和催产素及乙酰胆碱诱发收缩活动的影响，以期阐明松塔正丁醇提取物对子宫平滑肌的药理作用，为今后对于云南松松塔的进一步研究开发提供实验依据。

1 材料

1.1 药品与试剂

催产素（蚌埠市宏业生化制药厂，批号：060924）；乙酰胆碱（上海丽珠东风生物制药，批号：150321）。

1.2 动物

SD雌性未孕大鼠，清洁级，体重250-300 g，由昆明医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(滇)2011-0004。

1.3 仪器

BL-420E+生物机能实验系统，HW-400恒温平滑肌槽（成都泰盟电子有限公司）；张力换能器（航天工程医学工程研究所）。

2 方法

2.1 样品提取

云南松松塔采自云南省大理白族自治州苍山，由大理大学生药学教研室张德全副教授鉴定为松科松属植物云南松 (Franch.) 的松塔 ( Pine cone )。取云南松松塔干燥粉碎10 kg，用95%的乙醇冷浸提取（24 h×3次），合并提取液，减压浓缩回收溶剂。浓缩得到的乙醇浸膏加适量的蒸馏水混悬，用正丁醇进行萃取。然后对萃取得到的正丁醇部分进行减压浓缩回收溶剂，即得正丁醇部位51.6 g，冷冻干燥备用。

2.2 样品配置

称取云南松松塔的正丁醇提取物4.8 g置于烧杯中，然后取一定量的蒸馏水于烧杯中溶解（超声溶解），接着转移至量筒中，定容至50 mL即得到96.0 mg/mL混悬液，然后依次倍比稀释，得到48.0、24.0、12.0、6.0、3.0、1.5 mg/mL混悬液 ,备用[13]。

2.3 营养液配置

按参考文献的方法配置戴雅隆氏液[14]。

2.4 标本制备

实验前48 h，取大鼠肌肉注射0.2%己烯雌酚0.2 mL/100 g，以提高子宫对药物的敏感性。实验时，颈椎脱臼法处死大鼠，立即取出子宫，放入盛有冷营养液的培养皿中，剪去子宫周围的组织，备用。剪取1.0~1.5 cm长的子宫体作为标本，在标本两端穿线，一端固定于通气钩上，另一端与张力换能器相连，置于盛有20.0 mL营养液的标本槽中，调节基础负荷1~1.5 g，温度（37 ± 0.5）℃，通氧气1~2个气泡/ s，平衡30 min，待标本稳定后，开始实验[15-16]。

2.5 云南松松塔正丁醇提取物对大鼠离体子宫平滑肌张力的影响

2.5.1 对离体子宫平滑肌自发收缩活动的影响

标本稳定后，记录6 min正常收缩曲线，加入0.2 mL蒸馏水（营养液19.8 mL），记录6 min收缩曲线；换洗4次，待曲线回复正常后，加入1.5 mg/mL云南松松塔正丁醇提物混悬液0.2 mL（营养液19.8 mL），记录6 min收缩曲线；换洗4次，待曲线回复正常后，依次分别从低浓度到高浓度加入不同浓度样品（操作同前），记录6 min收缩曲线。观察并分别记录加入不同浓度样品后子宫收缩的频率、张力和活动力。

2.5.2 对离体子宫平滑肌催产素诱发收缩活动的影响

标本稳定后，记录6 min正常收缩曲线，加入0.02 U/mL催产素0.2 mL（营养液19.6 mL），作用明显后立即加入0.2 mL蒸馏水，记录6 min收缩曲线；换洗4次，待曲线回复正常后，加入0.02 U/mL催产素0.2 mL（营养液19.6 mL），作用明显后立即加入1.5 mg/mL云南松松塔正丁醇提物混悬液0.2 mL，记录6 min收缩曲线；换洗4次，待曲线回复正常后，加入0.02 U/mL催产素0.2 mL（营养液19.6 mL），作用明显后立即依次分别从低浓度到高浓度加入不同浓度样品（操作同前），记录6 min收缩曲线。观察并分别记录加入不同浓度样品后子宫收缩的频率、张力和活动力。

2.5.3 对离体子宫平滑肌乙酰胆碱诱发收缩活动的影响

标本稳定后，记录6 min正常收缩曲线，然后加入0.1 mg/mL乙酰胆碱0.2 mL（营养液19.6 mL），作用明显后立即加入 0.2 mL蒸馏水，记录6 min收缩曲线；换洗4次，待曲线回复正常后，加入0.1 mg/mL乙酰胆碱0.2 mL（营养液19.6 mL），作用明显后立即依次分别从低浓度到高浓度加入不同浓度样品（操作同前），记录6 min收缩曲线。观察并分别记录加入不同浓度样品后子宫收缩的频率、张力和活动力。

2.6 数据统计

3 结果

3.1 云南松松塔正丁醇提取物对正常大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动的影响

与蒸馏水组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 60 μg /mL时，可使正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率、最大张力、活动力显著减慢（< 0.05或< 0.01）；与正常组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 60 μg /mL时，可使正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率、最大张力、活动力显著减慢（< 0.05或< 0.01）；结果见表1。

表1 云南松松塔对正常大鼠离体子宫平滑肌自发收缩活动的影响(±S, n=10)

注：与蒸馏水组比较☆< 0.05，☆☆< 0.01；与正常组比较★< 0.05，★★< 0.01。

3.2 云南松松塔正丁醇提取物对催产素诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

与蒸馏水组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 15 μg/mL时，可使催产素诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率显著减慢，最大张力显著减小，活动力显著减弱（< 0.05或< 0.01）；与正常组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 15 μg/mL时，可使催产素诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率、最大张力显著减小，活动力显著减弱（< 0.05或< 0.01），有统计学差异。结果见表2。

表2 云南松松塔对催产素诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响 (±S, n =10)

注：与蒸馏水组比较☆< 0.05，☆☆< 0.01；与正常组比较★< 0.05，★★< 0.01。

3.3 云南松松塔正丁醇提取物对乙酰胆碱诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

与蒸馏水组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 15 ug /mL时，可使乙酰胆碱诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率显著减慢，最大张力显著减小，活动力显著减弱（< 0.01）；与正常组比较：云南松松塔正丁醇提取物终浓度≥ 60 μg/mL时，可使乙酰胆碱诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩的频率、最大张力、活动力显著减弱（< 0.05或< 0.01）。结果见表3。

表3 云南松松塔对乙酰胆碱诱导的大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响(± S, n=10)

注：与蒸馏水组比较☆< 0.05，☆☆< 0.01；与正常组比较★< 0.05，★★< 0.01。

4 讨论

M型受体广泛分布于中枢及周围神经组织、心肌、平滑肌和各种腺体，属于G蛋白偶联受体，通过与不同的鸟苷酸调节蛋白(G蛋白)结合，引起不同的生理生化效应[17]。平滑肌对某些化学物质有较高的敏感性，可以通过这些物质刺激M、催产素受体等而使平滑肌收缩。其中，乙酰胆碱为M胆碱受体激动药，它的作用机制是与M受体具有强大的内在活性，结合后产生强烈的收缩作用。本课题运用乙酰胆碱、催产素使其与子宫平滑肌上相应的受体结合后产生相应的效应，然后通过云南松松塔正丁醇提取物对相应效应的拮抗，从而研究云南松松塔正丁醇提取物的药理作用及其作用机制。

实验结果表明：云南松松塔正丁醇提取物能够使正常大鼠离体子宫平滑肌的自发收缩频率显著减慢、张力显著减小、子宫活力显著减弱；同时，也可以使大鼠离体子宫平滑肌催产素及乙酰胆碱的诱发收缩频率显著减慢、张力显著减小、子宫活力显著减弱。因此，可以认为云南松松塔正丁醇提物具有抑制子宫平滑肌的作用，且其抑制作用可能跟阻断催产素受体和M受体有关，其作用机制有待今后进一步研究。

目前，国内外对云南松松塔的研究很多，松塔中含有二萜类、黄酮类、木脂素类、甾体类、酚类化合物、多糖及还原糖等多种化学成分。据《本草纲目》中记载，云南松松塔具有具有祛痰、止咳平喘、祛风、润肠、安神等功效。此外，近年来研究发现松塔还具有抗病毒[9]、抗氧化[10]、免疫增强[11]和抗肿瘤[12]等作用。本研究结果提示云南松松塔正丁醇提物具有抑制子宫平滑肌的作用，但是云南松塔化学成分复杂，不知道是哪种或者是哪几种成分在发挥作用，依然需要今后实验中进一步分离提取。

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EFFECTS OF THE N-BUTANOL EXTRACTS FROM THE PINE CONES OFON ISOLATED RAT UTERINE SMOOTH MUSCLE

MA Ou, GUO Mei-xian, HE Zheng-chun,*YANG Yi-wen

(1. Zhaotong Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhaotong, Ynuan 657000, China; 2. College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunan 671000, China)

:To investigate the effects of the n-butanol extracts from the pine cones ofon the isolated rat uterine smooth muscle.: The isolated uterine smooth muscle was prepared from the rats, and then the effects of the n-butanol extracts from the pine cores ofon spontaneous contractions of isolated rat uterine smooth muscle were evaluated. Moreover, the effects of extracts on the contraction induced by oxytocin and acetylcholine in the isolated rat uterine smooth muscle were evaluated, respectively.: The n-butanol extracts from pine core ofcould significantly reduce the spontaneous contraction frequency, tension and uterine activity of the isolated rat uterine smooth muscle. Meanwhile, it also could reduce the contraction frequency, tension and uterine activity of the isolated rat uterine smooth muscle induced by oxytocin and acetylcholin, respectively.: The n-butanol extracts from the pine core ofhave an inhibitory effect on the contraction of isolated rat uterine smooth muscle, which may be related to the blocking of oxytocin receptors and M receptors.

pine cone of; isolated rat uterus; oxytocin; acetylcholine

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2019.05.018

1674-8085(2019)05-0091-05

2019-03-23；

2019-04-28

国家自然科学基金项目( 81260632)；云南省自然科学基金项目( 2012FD036)

马 欧(1993-)，男，云南昭通人，药师，硕士，主要从事临床药学工作(E-mail:1470946321@qq.com);

郭美仙(1980-)，女，云南凤庆人，实验师，硕士，主要从事药理学研究(E-mail:yndllyo@126.com);

何正春(1973-)，男，云南大理人，副教授，博士，主要从天然药物化学研究(E-mail:hezhengchun2006@163.com);

*杨毅雯(1978-），女，云南大理人，实验师，硕士，主要从事外科学研究(E-mail:13987295797@163.com).