YAP1、FAT4蛋白在卵巢癌组织中的表达特点及临床意义

胡紫薇，刘显灼，戴小财，李 维

(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院急诊科，湖北武汉 430000)

流行病学研究证实，卵巢癌的发病率在(252～627)/10万人，近年来，其发病率或病死率等具有一定的上升趋势[1]。临床上卵巢癌患者的无瘤生存时间较短，治疗后5年内的病死率仍然超过35%[2]。在分析研究卵巢癌发病机制的过程中发现，肿瘤相关生物学蛋白分子的表达改变，能够影响卵巢癌的癌细胞生物学特征，导致癌细胞增殖、分化成熟障碍，促进卵巢癌的发生。Yes相关蛋白(YAP1)的表达能够通过促进HIPPO信号通路的激活，导致下游肿瘤细胞的异常持续性增殖，促进卵巢癌的早期发生过程[3-4]。FAT4蛋白是重要的甲基化修饰因子，其能够通过对卵巢上皮细胞的甲基化作用，增加基因突变的风险，导致基因错配修复能力的显著下降[5]。有研究探讨YAP1蛋白在卵巢癌中的表达情况，认为YAP1蛋白的高表达是增加卵巢癌患者临床分期进展、临床预后恶化的重要风险[6]，但对于YAP1蛋白或FAT4蛋白与卵巢癌患者临床病理特征的关系研究较少。为探讨FAT4蛋白、YAP1蛋白与卵巢癌的发生关系，本研究选取本院2015年1月至2017年6月收集的术后卵巢癌组织，探讨不同的蛋白表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2015年1月至2017年6月收集的术后卵巢癌组织80例(恶性组)、卵巢良性肿瘤组织80例(良性组)为研究对象。恶性组患者年龄34～67岁，平均(54.8±9.6)岁；临床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期38例，Ⅳ期14例；分化程度：G1级14例，G2级21例，G3级45例；病理学类型：浆液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌28例，卵巢子宫内膜样癌15例；发生淋巴结转移39例。良性组患者年龄35～69岁，平均(53.5±10.0)岁，其中浆液性囊腺瘤59例，黏液性囊腺瘤21例。2组患者的年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2纳入、排除标准 纳入标准：(1)卵巢癌的临床分期为Ⅰ～Ⅳ期；(2)手术后经病理学检查证实为卵巢癌或卵巢良性肿瘤；(3)未使用放化疗治疗、免疫治疗；(4)纳入对象资料完整。排除标准：(1)未经病理学证实；(2)转移性卵巢癌。

1.3方法

1.3.1免疫组织化学方法 石蜡切片脱蜡至水，过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，3% H2O2，室温 10 min(避光),10 mmol/L pH 6.0 枸橼酸钠缓冲液，PBS冲洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封闭处理，37 ℃ 15 min。用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37 ℃ 2 h，滴加生物素化二抗，37 ℃ 40 min，PBS冲洗5 min，DAB显色，苏木素复染，加拿大树胶或中性树胶封片。

1.3.2免疫组织化学结果判定 YAP1蛋白的阳性着色表达于细胞质、细胞核， FAT4蛋白定位于细胞核，二者阳性均呈黄色、棕黄色、褐色表达。(1)根据着色强度：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为褐色、黑色；(2)根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分，阳性细胞所占比例11%～50%为2分，阳性细胞数51%～75%为3分，阳性细胞数所占比例>75%为4分。2种积分相乘总分<3分为阴性，≥3分为阳性。

2 结 果

2.12组标本的YAP1蛋白、FAT4蛋白阳性表达率比较 恶性组患者的YAP1蛋白、FAT4蛋白阳性表达率分别为61.25%、71.25%，均显著高于良性组的18.75%、26.25%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 2组标本的YAP1蛋白、FAT4蛋白阳性表达率比较[n(%)]

2.2卵巢癌组织的YAP1蛋白、FAT4蛋白表达相关性 卵巢癌组织中的YAP1蛋白与FAT4蛋白阳性表达呈显著正相关关系(r=0.629，P=0.000),见表2。

表2 卵巢癌组织的YAP1蛋白、FAT4蛋白表达相关性

2.3卵巢癌组织的YAP1蛋白、FAT4蛋白表达与患者临床病理特征的关系 卵巢癌组织中的YAP1蛋的阳性表达与肿瘤分化程度、临床分期有关(P<0.05)；FAT4蛋白阳性表达与卵巢癌患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结是否转移有关(P<0.05)，见表3～4。

表3 卵巢癌组织的YAP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系[n(%)]

表4 卵巢癌组织的FAT4蛋白表达与患者临床病理特征的关系[n(%)]

3 讨 论

环境因素、遗传因素等均可能影响卵巢癌的发生，促进卵巢癌临床病理特征的进展。作为生殖系统常见的恶性肿瘤，卵巢癌的无瘤生存时间不足38个月[7]，包括手术在内的相关综合性治疗措施治疗后的3年病死率仍然超过35%[8]。现阶段临床缺乏对卵巢癌早期诊断的有效生物学血清分子，而本研究通过探讨肿瘤相关蛋白的表达，为揭示卵巢癌的发生机制提供参考，为卵巢癌的免疫靶向治疗提供基础，为卵巢癌早期高危人群的血清学筛查提供依据。

生物学因子的浓度波动，能够在促进肿瘤细胞的早期核异型性的发生或中晚期临床病理特征进展中发挥重要作用，能够调控癌细胞的生物学特性，干预癌细胞的扩散和转移速率等，进而影响患者的整体生存预后。YAP1是重要的信号通路激活因子，其对于HIPPO信号通路的激活作用，能够提高卵巢癌上皮细胞核DNA的转录风险，导致启动子的增强和增强子的激活，增加癌细胞的调控异常风险。基础方面的研究也显示，YAP1够诱导癌细胞对于基底膜的黏附和浸润，增加其突破基底膜的风险[9-10]；FAT4蛋白能够与卵巢癌细胞膜内的转录基因结合，促进其甲基化的修饰，提高癌细胞的浸润能力，从而为癌细胞变形能力的获得及转移风险的提升提供基础。基础领域的研究也认为，FAT4蛋白能够通过诱导癌细胞的伪足形成及对于淋巴结的黏附，从而提高了其脑部转移及肺部转移的风险[11]。

本次研究发现，在卵巢癌病灶组织中，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表达阳性率均明显上升，高于良性组病灶组织，差异较为明显，提示YAP1蛋白、FAT4蛋白二者均可能影响卵巢癌的发生过程。荟萃国内外的相关研究，笔者认为YAP1蛋白、FAT4蛋白主要通过以下几个方面的因素影响卵巢癌的发生发展[12-13]：(1)YAP1蛋白能够导致体内HIPPO信号通路的激活，导致癌细胞膜内的第二信使如钙离子或者三磷酸腺苷的浓度上调，增加癌细胞的转录激活风险；(2)FAT4蛋白的表达能够导致癌细胞错配基因修复能力下降，导致癌细胞肿瘤相关基因突变风险增强，增加相关肿瘤效应分子的激活风险。安锦丹等[14]研究也通过免疫组织化学分析研究揭示卵巢癌病灶组织中的YAP1蛋白的表达情况，发现YAP1蛋白的表达阳性率可平均上升28%，同时在病死率较高或者临床分期较晚的卵巢癌病灶组织中，YAP1蛋白的表达阳性率可进一步上升。相关关系分析结果显示，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表达具有一定的内在关系，二者可能相互影响，进而促进肿瘤转录基因的表达，在肿瘤细胞的生物学特征的变化方面发挥了重要的调控作用，但具体的机制仍然需要后续研究进一步证实。卵巢癌组织中的YAP1蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、临床分期具有关，提示YAP1蛋白与卵巢癌的临床病理特征密切相关，这主要是由于YAP1蛋白能够影响到卵巢癌细胞的分化成熟过程，提高癌细胞对临近正常上皮组织的浸润能力；FAT4蛋白阳性表达与卵巢癌患者的肿瘤分化程度、临床分期、发生淋巴是否结转移有关，这主要与FAT4蛋白能够影响到卵巢癌细胞对于淋巴结的黏附能力等有关。

综上所述，卵巢癌组织中的YAP1蛋白、FAT4蛋白表达上调，相互间呈正相关性，与卵巢癌的发生发展关系密切。