检测HBV-DNA载量在使用核苷酸类似物治疗慢性乙型肝炎的临床应用

韩霞 ，施丽 ，王路 ，沈黎俊

1.新疆巴州人民医院医学检验科，新疆巴州 841000；2.新疆巴州人民医院感染科，新疆巴州 841000

慢性乙型肝炎(CHB)是由HBV病毒持续感染引起的慢性肝脏炎症性疾病，严重危害着人们的身心健康。抗病毒治疗是乙型肝炎治疗的基础，能阻止疾病的进展，延长患者的生存率，提高生活质量。目前国际公认的口服抗病毒药物为核苷酸类似物(NAs)，包括：拉米夫定(LAM)、替比夫定(LdT)、阿德福韦酯(ADV)、替诺福韦(TDF)和恩替卡韦(ETV)[1]。无论哪种抗病毒药物治疗，HBV-DNA载量和转阴都是考核抗病毒治疗的硬性指标。因此，采用高灵敏度精确度的实时定量聚合酶链 (RT-qPCR)法检测HBVDNA尤为重要。该文记录了在2016年1月—2017年12月就诊于该院使用不同抗病毒药物治疗的167例HBeAg阳性CHB患者的血清HBV-DNA载量变化及应答情况，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取在新疆巴州人民医院就诊的CHB患者167例，诊断符合我国《慢性乙型肝炎防治指南（2015）》，适合并接受单药抗病毒治疗的初治HBeAg阳性CHB患者，HBVDNA≥1.0×105IU/mL，ALT≥2×ULN， 依从性好并规律复查。排除标准：严重肝硬化、肝癌、肝移植以及使用免疫抑制剂、合并HIV、HDV、HCV患者。研究所选病例经过该院伦理委员会批准，并且患者签订知情同意书。

1.2 仪器与试剂

HBV-DNA定量检测采用宏石科技SLAN-96P实时荧光定量PCR仪，试剂来源于湖南圣湘生物。HBeAg使用深圳市爱康生物的URANUS AE120，试剂由广州市达瑞生物提供。ALT采用罗氏Cobas8000检测。

1.3 方法

选定研究对象，告知治疗风险及长期服药性，根据患者病情和意愿双向选择，确定抗病毒治疗方案并分为5组，依次为 LAM 组 100 mg，TdT 组 600 mg，ADV 组 10 mg，TDF组 300 mg，ETV组0.5 mg，均1次/d口服。分别收集患者基线水平和接受 NAs治疗 12、24、48、72、96 周时的血清标本，检测其HBV-DNA、HBeAg、ALT。5组患者在初始抗病毒治疗时，性别、年龄、HBV-DNA、ALT差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.4 统计方法

采用Excel 2007，SPSS 22.0统计学软件进行统计数据分析，计量资料用（±s）表示，采用t检验；计数资料用百分数(%)表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同抗病毒周期内各组HBV-DNA转阴率比较

5组患者接受治疗12周时HBV-DNA转阴率差异无统计学意义(χ2=2.348，P=0.672)，而在 24、48、72、96 周时差异有统计学意义 (χ2=11.086，P=0.026；χ2=10.942，P=0.017；χ2=10.738，P=0.030；χ2=30.788，P=0.000)。 5 组患者在不同抗病毒治疗周期内HBV-DNA转阴率变化见图1。

图1 5组患者在不同抗病毒周期内HBV-DNA转阴率的变化

2.2 抗病毒治疗48周时各组患者HBV-DNA、HBeAg、ALT变化情况

患者在分别接受5组药物抗病毒治疗48周，HbeAg转阴率、ALT复常率差异无统计学意义(P＞0.05)；而 HBVDNA转阴率差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 治疗48周5组患者血清病毒学变化及ALT复常情况比较(%)

2.3 抗病毒治疗72、96周各组病毒学应答情况

接受抗病毒治疗72周时，TDF组获得完全病毒学应答，ETV组有8.33%未获得病毒学应答；96周时，TDF组和ETV组获得完全病毒学应答，而LAM组、TdT组、ADV组分别有20.00%、20.00%、15.00%未获得病毒学应答。

3 讨论

在我国，乙型肝炎病毒(HBV)感染率一直位居前列，CHB患者居多。临床治愈CHB的主要指标是HBsAg的清除[2]，但清除HBsAg的新策略，还没有进入临床应用的案例。目前，最大限度地长期抑制HBV-DNA病毒复制是治疗CHB的关键，它可以减轻肝细胞坏死，延长生存期[3]。荧光定量PCR技术检测HBV-DNA，可以全面了解乙肝病情，达到科学用药、科学治疗的目的。有研究表明，适当的免疫反应有助于清除病毒和修复肝损伤[4]，NAs可以通过调节免疫应答，有效抑制HBV的复制。近年来TDF、ETV被世界卫生组织(WHO)、美国肝病学会(AASLD)等推荐为一线抗病毒药物[5]。但鉴于我国国情，仍有基层患者在应用非一线药物LAM、TdT、ADV治疗。

新疆巴州地区位于中国西部，属于乙肝高发区[6]，该研究分析近2年该地167例CHB患者抗病毒治疗情况，有32.93%的患者选择非一线抗病毒药物；而选用一线抗病毒药物的112例患者中，替诺福韦者占12.28%，这可能与该地经济发展水平和医保报销政策有关。CHB患者在使用5组抗病毒药物治疗12周时，HBV-DNA转阴率差异无统计学意义 （P＞0.05）；24周后，HBV-DNA转阴率TDF组、ETV组高于LAM组、TdT组、ADV组，这与张颖慧等人[7]发表的抗病毒疗效较好的预测时间为12周或24周类似，提示检测血清HBV-DNA载量变化对抗病毒疗效的判断优于HBeAg、ALT；48周时，5组HBV-DNA转阴率差异有统计学意义（P＜0.05），其 ETV组HBV-DNA转阴率与段文文[8]报道的84%相似，HBeAg转阴率、ALT复常率无明显差异，而TDF和ETV组HBV-DNA转阴率差异无统计学意义（P＞0.05），这不同于有关TDF在48周时其HBV-DNA转阴率方面优于ETV的报道[9]；72周时，TDF组全部获得完全病毒学应答，而ETV组有8.33%的患者未获得病毒学应答，这相似于杨有道等人[10]报道的在抗病毒治疗到72周时，TDF在根除HBV-DNA有效性方面优于ETV(P=0.010)；96周时，TDF组、ETV组均获得病毒学应答，而LAM组、TdT组、ADV组均存在病毒学应答不良者，提示该地区还未发现TDF、ETV耐药的情况。

治疗CHB应长期服用NAs，TDF和ETV具有抗病毒作用强、低耐药率、在不同阶段均能有效抑制病毒复制等优点[8,11]，被大力提倡，但由于部分患者经济条件、依从性不佳等因素导致停药或换用低级别药物，增大了耐药率。有研究结果表明[12]，国产ETV胶囊能迅速、持续抑制HBV的复制，可长期治疗CHB。不仅要在基层医院推广PCR技术检测HBV-DNA，还要发展国产TDF、ETV药物，降低价格，全面纳入医保，给更多乙肝患者带来福音。