参加行业会议对养猪场生物安全影响调查
2019-09-16李沛东郑佳佳
高 硕，李沛东，郑佳佳，李 龙*
（杭州贝尔塔生物技术有限公司，浙江 杭州 310000）
生物安全是防止引入新病原和阻止病原传播与扩散的重要措施，是疫病防控的第一道防线。2018 年8 月3 日，我国辽宁省沈阳市首例非洲猪瘟确诊[1]，之后中国多地出现非洲猪瘟疫情，给养猪业造成巨大经济损失。非洲猪瘟被列为我国的一类传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为法定呈报的动物疫病[2]，足见其危害性之大。同时因其100%的发病率和死亡率[3-5]，且目前没有有效的疫苗可用于防控，猪场的生物安全显得尤为重要。所以生物安全越来越受到养猪业乃至整个养殖行业的重视。
本研究通过2018 年下半年国内2 次大型行业会议进行环境调查，对猪常见病毒性疾病病原（PEDV、PRRSV）进行实验室检测，揭示了猪病病原在行业会内传播流行的现状，为国内大型行业会议生物安全工作的开展，提供了理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
GenoTube 采样拭子管（Thermo Scientific）；无菌生理盐水；小剂量核酸提取试剂盒（AXYGEN）；PEDV 荧 光 定 量RT-PCR 试 剂 盒（BETA VDL）；PRRSV 荧光定量RTPCR 试剂盒（BETA VDL）。
1.2 采样方案
根据会议场地区域进行采样，主要包括各区域人员（鞋，衣服，携带物表面）、会场（地面，桌椅）、停车场（汽车轮胎，车身，驾驶室）等。另外，人员/车辆的采样进行来源地登记，会场环境样品采样区域及具体采样点登记；两次会议（会议A、会议B）均为期3 日，每天进行采样，每日约100 ～150 个样品，共计约500个样品。具体采样方案见表1、表2。
表1 会议A 采样方案
1.3 采样方法
使用GenoTube 采样拭子管蘸取无菌生理盐水后，对人员、环境、车辆等进行采样。采样点面积大于25 cm×25 cm 的 以25 cm×25 cm进行采样，不足25 cm×25 cm 的采取全部表面积。采样时一边涂抹一边旋转拭子头，直至涂抹完所有采样面积及拭子头完全涂黑，之后将拭子塞回采样管，旋紧，做好编号和标记。
1.4 检测方法
1.4.1 样品预处理
GenoTube 采样拭子均用灭菌的磷酸缓冲液（PBS）浸泡，震荡混匀。
表2 会议B 采样方案
1.4.2 检测前混样
按照分组对样品进行3 混1 或5 混1 混样操作。
1.4.3 样品检测
混样后的样品提取核酸后，采用荧光定量PCR 方法检测PEDV 和PRRSV 病原。
1.5 数据汇总分析
对检测结果进行汇总分析，得到统计结果。
2 结果与分析
2.1 会场环境调查采样及检测结果
根据采样方案结合现场实际情况，会议A 的 3 d 共采集261 个样品；会议B 的3 d 共采集235 个样品。具体如表3、表4 所示。
会议A 检测结果显示，会议第3 天在展览中心104-108 号混合样品中检测到了PRRSV 病毒，占当天采样总数量的4.6%；会议第2 天环境混合样品、人员消毒前后混合样品、车辆混合样品均检测到PEDV 阳性分别占比18.9%、9.8%、3.7%。会议第3 天消毒前人员1-35 人员混合样品、消毒后人员51-55 号、61-65号和71-74 号人员混合样品、停车场车辆84-88 号混合样品、会议中心89-98 号环境混合样品均为PEDV病毒阳性，各占当天采样总量的45.4%，4.6%，13.9%，如图1-a 所示。
会议B 检测结果显示，会议第2 天21-25 号人员混合样品检测到PRRSV 病毒；会议第1 天31-35 号人员混合样品和会场环境51-55 号环境混合样品、会议第2 天31-35 号人员混合样品、会议第3 天会场周边71-75 号环境混合样品和停车场车辆66-70 号混合样品均为PEDV 病毒阳性。会议B 检测到的各类阳性样品比例约为6%左右，如图1-b 所示。
2.2 讨论与分析
从检测结果来看，两次会议会场人员（车辆）病原携带及病原交叉污染情况较为严重。1）对比消毒前后结果，大会采取的消毒措施并未显示出很好的消毒效果，消毒后的会场内依然带毒；2）人员密度较大的会议中心病原检出率最高；（3）大会进行的第3 天，人员携带的病原依然可以检测到，更提醒我们要重视病原的携带传播，参会人员应做好自身洗消工作，勤洗澡换衣，业内类似的大型会议应采取更加严格的消毒措施，提高生物安全等级，以保证大会的安全进行和广大养殖者的切身利益。
表3 会议A 环境调查采样统计结果
表4 会议B 环境调查采样统计结果
图1 会议A、会议B 阳性样品占当天采样数量百分比
近年来，猪病尤其非洲猪瘟的暴发给我国养猪业造成了巨大的经济损失。携带接触传播是猪病的传播方式之一，业内大型会议使行业内人员和车辆密集聚集，易造成病原携带及交叉污染。因此，行业大型会议应重视生物安全工作，提高广大参会者的生物安全意识，确保会议的正常进行，防止携带的病原进入会场及养殖场，给企业造成不必要的损失。
