超高效液相色谱法检测 肉制品中4种食品添加剂

周宏霞 郐鹏 王楠

摘要：目的：建立UPLC-DAD法检测肉制品中的4种食品添加剂的方法。方法：采用 Poroshell 120-C18 柱 （3.0 mm×150 mm×2.7 μm）反相色谱柱，流动相为甲醇+0.01 mol/L 磷酸二氢铵，梯度洗脱，流速为0.3 mL/min，柱温度为25℃。采用外标法定量。结果：该方法在0～50 mg/L范围内具良好的线性关系，相关系数均大于0.9996。测定低限为0.5 mg/kg， 回收率为91.1%～100.1%，相对标准偏差为1.18%～3.27%。结论：该方法简便、灵敏、可靠，适合于肉制品中多种食品添加剂的同时检测。

关键词：UPLC;苯甲酸;脱氢乙酸;山梨酸;糖精钠

食品添加剂被广泛地应用到食品加工过程中。适当地使用食品添加剂可以提高食品质量，防止食品变质，保持食品营养，但乱用或滥用会损害消费者健康[1]。因此，对食品添加剂的使用必须进行严格的监控[2]。我国国家标准 GB 2760—2014 《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中已经明确规定了食品添加剂允许使用的范围和用量[3]。肉制品在制作过程中会加入一些食品添加剂。目前肉制品中食品添加剂的主要监控项目有：苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸、糖精钠。GB5009.28-2016明确规定了食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定。GB5009.121-2016明确规定了食品中脱氢乙酸的测定。采用两种方法分别检测会比较繁琐费时，不利于样品量大时的检测。因此，需要研究一种能同时检测这四种食品添加剂的方法。目前，关于这方面的研究报道也有很多。金悦敏等[4]利用HPLC法测定糕点类食品中的8种常用防腐剂。孙美娜等[5]采用HPLC法检测饮料中常见的8种防腐剂和2种甜味剂。陈松润等[6] 采用液相色谱法同时测定肉制品中5种防腐剂。但是未见采用超高效液相色谱法检测肉制品中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠。本文采用超高效液相色谱法检测肉制品中的苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸、糖精钠，采用DAD检测器进行检测定性，排除了杂质峰的干扰。

仪器与材料

仪器与设备。超高效液相色谱仪;电子天平; Milli-Q型超纯水器，超声波清洗仪;漩涡混合器，台式高速离心机。

试剂。甲醇（色谱纯），乙酸锌，亚铁氰化钾，氢氧化钠（分析纯），磷酸二氢铵（优级纯），苯甲酸、山梨酸、糖精钠（标准品，中国计量科学研究院）、脱氢乙酸（标准品，德国DR.）

标准溶液配制：准确称取脱氢乙酸标准品0.0500 g（精确至0.0001g）于50 mL容量瓶中，用5 mL氢氧化钠溶液（20 g/L）溶解，用水定容，此标准贮备液的浓度为1 mg/mL。

色谱条件。色谱柱：Poroshell 120-C18 柱 （3.0 mm×150 mm×2.7 μm）;流速：0.3 mL/min;柱温：25 ℃;进样体积：10 μL;流动相：甲醇（A）+0.01 mol/L 磷酸二氢铵（B）。流速为：0.3 mL/min，检测波长为：230 nm，并且采集190 nm～400 nm的光谱。梯度洗脱的程序如下：0～2.00 min 5% A～5% A，2.00～10.00 min 5%A～35%A，10.00～10.10 min 35%A～5%A，10.10～15.00 min 5% A～5% A。

样品处理。称取粉碎好的样品2.5 g（精確至0.01 g）于25 mL比色管中，加入2.0 mL亚铁氰化钾溶液和2.0 mL乙酸锌溶液，加水至约15 mL，混匀，超声提取30 min，后用水定容至刻度25 mL，混匀。后转移至离心管中5000 r /min离心5 min，取上清液，过0.45 um的滤膜，待上机检测。

结果与讨论

检测波长的选择。用DAD检测器在190nm～400 nm下对四种标准溶液进行扫描，发现苯甲酸的最大吸收峰在225nm处，脱氢乙酸的最大吸收峰在230 nm和292 nm两处，山梨酸的最大吸收峰为255 nm，糖精钠的最大峰为270 nm。综合考虑这四种物质的吸收情况，选择230 nm作为测定波长，同时采集190nm～400 nm的光谱图。利用光谱图可以排除杂质峰的错判。

流动相的选择。采用甲醇-磷酸二氢铵作为流动相，采用不同的流动相比例进行摸索，最后确定1.3中的梯度洗脱条件。在此梯度下各物质能很好的分离，目标物质峰与杂质峰也能分开，大大降低了杂质的干扰。

线性范围和检出限。利用4种浓度为1mg/mL的标准贮备液配制成浓度为0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L的混合标准溶液，按照1.3的仪器条件进行色谱检测。以峰面积为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果显示，四种物质在0～50 mg/L浓度范围内，具有良好的线性关系。应用 3 倍的信噪比来计算检出限。 回归方程、相关系数及检出限见下表1。

回收率和精密度。称取粉碎好的空白肉制品样品2.5 g，加入高、中、低三个水平的四种添加剂的混合标准溶液，按照1.4的方法进行前处理操作，按照1.3的仪器条件上机检测。每个水平做6个平行，来计算各种添加剂的回收率以及精密度。其结果见表2。从表中可以看出样品的回收率为91.1%～100.1%，相对标准偏差为1.18%～3.27%。

结果

本文建立了肉制品中苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸、糖精钠的超高效液相检测方法，该方法操作简单，定量检测准确，灵敏度准确度均能达到要求。检测器采用二极管阵列检测器，利用对照光谱吸收图的方法排除杂质干扰，能达到准确定性的目的。结果表明，该方法在0～50 mg/L浓度范围内具有良好线性关系，相关系数在0.9996以上，检出限为0.5 mg/kg，平均回收率为91.1%～100.1%，相对标准偏差为1.18%～3.27%。四种物质能达到很好的分离，分离效果好，回收率高，适合于肉制品中食品添加剂的快速检测。

参考文献

[1]杨新泉，田红玉，陈兆波，等.食品添加剂研究现状及发展趋势[J].生物技术进展，2011，1（5）：305-311.

[2]张小芳，付大友. 高效液相色谱法同时测定食醋和酱油中的6种防腐剂和甜味剂[J].中国调味品，2018，.43（9）：147-150.

[3]刘胜男，张国庆，王素方，郭保宝，权明珠，石志格.高效液相色谱法同时测定果蔬汁饮料中20种禁限用食品添加剂[J].轻工学报，2016年7月，31（4）：23-29.

[4]金悦敏，胡国华.HPLC法测定糕点类食品中的8种常用防腐剂[J].食品工业，2018，39（6）：270-272.

[5]孙美娜.RP-HPLC法检测饮料中常见的8种防腐剂和2种甜味剂[J].食品工业，2018，39（7）：323-326.

[6]陈松润，何权，黄娟.液相色谱法同时测定肉制品中5种防腐剂[J].广州化工，2018，46（7）：94-95.