梵净山丛枝菌根真菌三个中国新记录种

姚莉梅 石磊 李海波 尚昆 朱青青 周光荣 江龙

摘要：对贵州省梵净山自然保护区进行丛枝菌根真菌资源调查时，从植物根际土壤中分离鉴定出三个中国新记录种，分别为网纹双型囊霉Ambispora reticulata、光亮多样孢囊霉Diversispora clara和高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum，对其进行了详细的形态描述和图示。

关键词：梵净山;丛枝菌根真菌;双型囊霉属;多样孢囊霉属;隔球囊霉属

中图分类号，0939.5支献标识码，A

丛枝菌根（Arbuscular mvcorrhizal，AM）真菌是属于球囊菌门（G10meromvcota）中的一类营养共生真菌，可与大多数植物形成共生体。按照ht-tp：//www，amf-phylogerly，com网站上整理公布的数据，目前在世界范围内发表的AM真菌共有4目11科36属334种，中国记录近两百种。梵净山国家自然保护区位于贵州省铜仁市，是武陵山脉主峰，1992年被世界自然保护联盟（IUCN）列为具有全球意义的A级保护区，2018年被列人“世界自然遗产名录”。全区生态系统保存完好，基本没有人为扰动，是当今地球同纬度生物多样性保存最为完好的地区，拥有高等植物303科1266属3728种，是研究AM真菌物种多样性的极佳样地。目前仅陶光耀与袁腾进行了初步调查，鉴定报道的AM真菌种类12属42种，接近国内AM真菌物种数量的1/4.说明该保护区AM真菌种类十分丰富。因此开展梵净山自然保护区土壤中AM真菌的调查与研究，在丰富我国丛枝菌根真菌资源和开发应用方面有重要意义。通过对梵净山植物根际土壤AM真菌的物种鉴定，我们发现了三个国内新记录种，现予报道。

1材料與方法

1.1采集土样

采样地位于贵州省铜仁市梵净山自然保护区，采集土样时，除去土壤表面约2cm的腐殖土与杂质，采集距离地表约5～30cm土层土壤，约1kg装入采样袋中，自然风干后放4℃冰箱中进行保存以备用。

1.2分离鉴定

土壤AM真菌孢子采用湿筛倾注-蔗糖离心法进行分离。在体视显微镜下对分离到的孢子进行其大小、形状、颜色及连孢菌丝进行初步观察及分类，再将孢子洗净后吸取到载玻片上，置于生物显微镜（Olympus Bx53）和摄影系统（OlympusDP70）下，对孢子大小、形状、颜色、连孢菌丝、孢子壁及发芽壁的层数和厚度、孢子压破后的内含物及在Melzer’s试剂中的染色情况、孢子表面有无纹饰或附着物等特征进行详细观察、记录，并照相。再依据http：//www，amf-phvlogeny，com网站、国际丛枝菌根真菌保藏中心（INvAM）（http：//invam，caf，wvu，edu）、和http：//www，zor，zut，edu，pl/Glomer-omvcota等网站提供的种属描述及其相应的图片，结合贵州大学AM真菌保藏资源，进行属种鉴定，中文学名参见王幼珊等（2017）球囊菌门丛枝菌根真菌最新分类系统菌种名录。

2结果与讨论

经孢子形态学鉴定，从贵州省铜仁市梵净山自然保护区植物根际土壤中共分离、鉴定出 AM真菌中国新记录种3种，双型囊霉属（4mbisporn）、多样孢囊霉属（Diwersispora）、隔球囊霉属（Septoglomus）各1种。下面是详细描述和图示。

2.1 网纹双型囊霉Ambispora reticulata Oehl&Sieverd（2012），（图1）

孢子果未见。孢子在土壤中单生，幼嫩孢子白色，成熟孢子黄棕色，球形至近球形，大小89～140um。孢子壁有2层，L1为透明至淡黄色，厚1um左右，随着孢子成熟逐渐消失，成熟孢子几乎不可见;L2为无色透明至浅黄色，厚2～5um，在Melz-er’s试剂中发生反应，呈现紫红色。孢子壁两层：GWl两层紧贴，均为无色透明膜状壁，GW1-L1半柔性，厚1.1～3.um，表面具有特殊的网状纹饰，有由脊包围的不规则形状的凹坑，形状为三边形到八边形，宽3.2～9.6um，深0.5～2.um;GW1-L2光滑，厚1um左右，在Melzer’s试剂中不发生反应;GW2双层：GW2-L1为透明刚性壁，厚1.3～3.5um，GW2-L2透明，厚度很薄，很难观察到，发芽壁在Melzer’s试剂中无反应。孢子梗：由孢子壁和发芽壁的外层延伸形成，在孢子基部宽6～16um×4～17um，GW1-L1的网状纹饰延伸到孢子梗呈波浪状纹饰。在Melzer’s试剂中不反应。

Fritz Oehl（2010）。在瑞士阿尔卑斯山和亚高山草原上首次发现网纹双型囊霉，观察到第一层发芽壁上有特殊的网状纹饰结构，是区分双型囊霉属其它物种的识别特征。我们从梵净山植物根际土壤中分离得到的孢子经过观察，在第一层发芽壁上可明显观察到该种的识别特征一网纹纹饰结构（图1-1.4.7～12），且纹饰的形状（图1-4）、宽度与深度（图1-9.11～12）也与该种识别特征一致，此外孢子颜色、大小及其与Melzer’S试剂的反应结果（图1）与Fritz Oehl的描述一致，因此确定为网纹双型囊霉Ambisporareticulata。

标本号：Inl20181025FJ-5、Fas20181025FJ-41、Fas20181025FJ-48、Rhs20181025FJ-108、Rhg20181025FJ-112、Rhs20181025FJ-113、Rhr20181025FJ-118、Inb20181025FJ-128、Int20190725FJ-8、hnst，20190725FJ-13、Cajt20190725FJ-25、Fas20190725FJ-31、Inl20190725FJ-41、Que20190725FJ-53、Phy-20190725FJ-81.孢子于2018年10月从贵州省梵净山自然保护区阔叶箬竹Indocalamus latifolius、箭竹Fargesia spathacea、贵州杜鹃Rhododendronguizhouense、大钟杜鹃Rhododendron ririei、巴山箬竹Indocalamus bashanensis，以及2019年7月从黄金凤Impatiens siculifer、巴东栎Ouercus engleriana、山茶Camellia japonica、箭竹Fargesia spathacea、毛竹Phyllostachys edulis、箬竹Indocalamus tessellatus、阔叶箬竹Indocalamus latifolius根际土壤中分离得到。

2.2光亮多样孢囊霉Diversispora clara Oehl，B，Estrada，G，A，Silva&Palenz，（2012），（图2）

孢子果未见。孢子在土壤中单生，透明至奶白色，球形（63～112um）或近球形（67～127x63～122um）。孢子壁三层：L1透明，厚度<1um，在成熟过程中逐渐消逝，因此在成熟孢子中经常不存在：L2层状壁，明亮至较少的乳白色，厚度3～5.3um：L3透明，厚1um左右，通常与L2紧密粘附，不易观察。L1和L2在Melzer’S试剂中被染色为黄色，孢子细胞的内容物为油状液滴，在Melzer’S试剂中被染成比细胞壁更深的黄色。孢子具有亮白色连孢菌丝，常单生，形状为圆柱形，空隙少见打开，常在基部或离基部较近处由L2和L3的隔膜封闭。

Beatriz Estrada（2011）等人从西班牙10种金盏花植物根际土壤中首次发现光亮多样孢囊霉Di-versispora clara，该种孢子颜色较该属其他孢子透明，孢子壁较薄，连孢菌丝网柱形，且在孢子基部或离孢子基部较近的地方有隔膜封闭。我们分离到的孢子颜色透明（图2-2～4）、孢子壁较薄（图2-4～8），连孢菌丝网柱形且在离孢子基部较近处有隔（图2-3），孢子形态特征与Beatriz Estrada等人描述一致，由此确定为光亮多样孢囊霉Diversispora clara。

标本号：Inl20181025FJ-5、Fas20190725FJ-38、Int20190725FJ-45。孢子于2018年10月从阔叶箬竹Indocalamus latifoldius以及2019年7月从贵州省梵净山自然保护区箬竹Indocalamus tessellatus和箭竹Fargesia spathacea根际土壤中分离得到。

2.3 高山隔球囊霉Septoglomus altmontanumPalenz，Oehl，Azc6n-Aguilar&G，A，Silva（2013），（图3）

孢子果未见。土壤中单生，深红棕色至红黑色，形状椭网形至近球形，大小130～190X 121～167um。孢子壁两层：L1为半透明至暗黄色壁，光滑，厚2.2～3.7um：L2为深红棕色至红黑色的层状壁，厚4.0～7.6um，两层孢子壁在Melzer’S试剂中不发生反应。连孢菌丝颜色稍浅于孢子颜色，为暗黄色至红色，形状为圆柱形，偶尔为漏斗形，常发生弯曲;常在孢子基座处达到最宽19～31um，连孔常被L2延伸形成隔。连孢菌丝与Melzer’S试剂中也不发生反应。

Javier Palenzuela（2013）等人在對麦冬根际土壤丛枝菌根真菌进行调查时，首次报道了高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum。该种孢子较大，颜色较深，尤其是连孢菌丝较宽，最宽处可达35um，是高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum与该属其他种区分的主要识别特征。我们分离的孢子连孢菌丝结构最宽处可达31um（图3-7～8），在孢子颜色、形状上都与Javier Palenzuela等人的描述一致（图3），因此确定为高山隔球囊霉Septoglo-rous altomontanum。

标本号：Irt20181025FJ-38、Fas20181025FJ-60、Woj20190725FJ-72、Phh20190725FJ-28、Hys-20190725FJ-30、孢子于2018年10月从贵州省梵净山自然保护区鸢尾Iris tectorum、箭竹Fargesiaspathacea，以及2019年7月从狗脊蕨Woodwardiajaponica、腊莲绣球Hydrangea strigosa、毛竹Phyl-lostachys edulis根际土壤中分离获得。

梵净山国家级自然保护区原生生态系统保存完好，因其独特的气候及地理位置，具有梵净火绒草、梵净山冠唇花、梵净山铠兰等许多特有的生物物种，梵净山AM真菌资源也十分丰富，目前我们已经在该保护区共分离鉴定出13属58种AM真菌，占全球AM真菌种质资源17%，占国内29%。此次三个新记录种的发现，进一步说明梵净山自然保护区AM真菌的物种多样性丰富。