沉降菌监测碟暴露时间及沉降菌监测数据报告问题

张爽 庞月

[摘要]针对洁净区动态沉降菌监测，A级区以平均值报告这个区域的监测结果。但任何一个监测碟中发现微生物都应该调查原因;对90mm平皿TSA培养基，在标准条件下考察了暴露120min、240min的失水率，结果表明，在标准条件下，暴露120min的90mm平皿TSA培养基能保证各实验菌种培养霉要。

[关键词]沉降菌;放置时间;失永率

[中图分类号]TQ460.8 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）06-0296-01

《中国药典》2015年版四部通则1100中要求无菌检查的试验环境必须达到无菌检查的要求。日常检验需要对试验环境沉降菌进行监控。《中国药典》2015年版指导原则9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则中表4注：各洁净级别环境微生物监测的动态标准的注解要求表中各数值均为平均值，根据EUGMP和FDA指南，A级洁净区空气气流形式是层流，监测碟的结果直接反映垂直上方的空气质量。所以A级区应该在原始记录体现每个监控碟的原始结果，最后以平均值报告这个区域的监测结果。但任何一个监测碟中发现微生物都应该调查原因。

《药品生产质量管理规范（2010年修订版）》中规定动态沉降菌监测时间为4h，但单个培养皿暴露时间可以小于4h。中国药典2015年版指导原则9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则中也规定单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时。培养基适用性试验合格的沉降菌试验用培养基在监测时有三个关键点：培养基回收率、培养基含水量、培养基放置时间。我们知道一定条件下回收率和含水量呈正比关系，而含水量与培养基放置时间呈反比关系。

1沉降菌监测（培养基放置）时间确定原则

1.1洁净区环境（风速、温度及相对湿度）

无菌检查所在区域为A级洁净区，A级洁净区风速为0.36-0.54m/s，温度一般控制在18-26℃，相对湿度在45%-65%。我们未挑战极限条件，选择标准条件：温度24℃，相对湿度55%，风速0.45.m/s。

1.2培养基的选择

中国药典2015年版规定：如果培养基不能终端灭菌，在使用前应进行100%的预培养。所以我们沉降菌监测时，使用的为用外购培养基干粉自制90mm平皿培养基，培养基为TSA，灌注量为20ml。市售培养基很多，我們选择一个品牌培养基干粉，自制平皿培养基预培养后进行试验。

2试验材料

2.1材料

TSA培养基（批号：160322北京陆桥技术有限责任公司）、温湿度记录仪、万分之一电子天平、刻度吸管等。

2.2失水率测定方法

在沉降菌监测时，培养基暴露于空气中，水分不断蒸发流失。沉降菌监测培养基必须维持足够水分，培养基水分低于一定限度，回收率无法实现。为了考察暴露时间与失水率的关系，对暴露不同时间的沉降碟测量重量变化情况，以估计其失水率情况。

在A级区域送风风速调节0.45.m/s，待风速和温湿度平衡。将90mm自制平皿培养基，共4块，测定前用精确到0.01g的电子天平分别称重，后均匀铺设在层流下方操作台表面，打开各个碟盖，按沉降菌监测方法操作，开始计时。分别在第120分钟、240分钟将沉降碟各取出2块，加盖，用精确到0.01g的电子天平称重，后将各沉降碟培养基挖出，用精确到0.01g的电子天平称重，计算不同暴露时间的沉降碟的失水率。

3失水率测定结果

试验温度24℃，相对湿度55%，暴露120min失水率达到9.76%，在暴露240min时失水率超过30%达到33.99%。

4本试验考察了沉降菌检测试验过程中。某品牌培养基自制平皿培养基失水率与暴露时间的关系。

本试验采用的环境为模拟标准条件，暴露120min培养基失水近10%，能够满足沉降菌培养的需要。考虑失水率还与培养基品牌，温湿度，风速等条件有关，每2h以内更换动态沉降菌监测培养皿能够满足环境监测需要。以平均值报告A级区域的监测结果。但任何一个监测碟中发现微生物都应该调查原因。