核酸检测法应用于血液标本内乙型肝炎病毒检测的结果

王菲 李卓

[摘要]目的：分析核酸检测法应用于血液标本内乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）检测的结果。方法：研究时段自2016年10月至2018年10月，选定本院检验科收集的血液标本200例，分别采用HBV-DNA（核酸检测法）、ELISA（酶联免疫吸附法）检测HBV病毒。对比两种方法的检测情况。结果：HBV-DNA法特异性（99.82%）、敏感性（98.25%）显著高于EuSA法（91.05%、92u%），P<0.05（具统计学差异）：HBV-DHA法窗口期显著低于ELISA法，P<0.05（具统计学差异）。结论：HBV-DNA检测法在乙型肝炎HBV检测中的特异性、敏感性较高，明显减少了窗口期，临床价值较高。值得借鉴。

[关键词]核酸检测法;血液标本;乙型肝炎;HBV

[中图分类号]Rd40;R512.62 [文献标识码]A [文章编号H2096-5249（2019）06-0219-02

当前，临床对于乙型肝炎HBV检测主要有ELISA、HBV-DNA两种，ELISA检测窗口期较长，由于病毒变异、免疫沉默性感染、病毒滴度低、病毒感染存在窗口期等因素的影响，临床输血存在一定风险性。ELISA具有方便、可靠等优点，现己被临床广泛应用于血液筛查中，对于ELISA检测法在乙型肝炎HBV检测中的临床价值目前报道相对较少。因此，本文选定2016年10月至2018年10月本院检验科收集的血液标本200例研究，目的是为乙型肝炎HBV检测提供一种科学、安全的诊断方法，做出如下报道：

1资料与方法

1.1基线资料

研究时段自2016年10月至2018年10月，选定本院检验科收集的血液标本200例。

1.2方法

1.2.1仪器、试剂

血型血清离心机（型号：TD4ZB：生产企业：北京泰泽瑞达科技有限公司）、全自动生化分析仪（型号：PUXS-300：生产企业：南京舒普思达医疗设备有限公司）、全自动血培养仪（型号：Bact/ALERT3D;生产企业：济南鑫井医疗器械有限公司）、高通量全自动核酸提取仪（型号：etP-968;生产企业：上海腾柔仪器设备有限公司）、全自动化学发光分析仪（型号：DXl800：生产企业：美国贝克曼尔特公司）、全自动免疫分析仪（型号：MD-IA-1000;生产企业：武汉明德生物科技股份有限公司）。ELISA试剂：北京万泰生物药业股份有限公司提供的HBV血清学标志物检测试剂盒。HBV-DNA检测试剂：由上海科华生物工程股份有限公司提供的人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂。

1.2.2方法

所有血液标本均应经过正定血型初筛，干化学检测ALT（谷丙转氨酸）。血液标本分别置于3个试管，其中2个试管采用ELISA法检测，使用抗凝真空管;另一个试管采用HBV-DNA法检测，使用分离胶抗凝真空管。所有试管粘贴唯一性条形码，血袋标签上的条形码应与试管保持一致，离心处理血液标本，并置于4℃的冰箱中，所有检测操作在2.d内完成。所有血液标本均进行梅毒、抗-HIV、抗-HCV、HBsAg（乙肝表面抗原）、ALT速率法检测，阳性标本去除后，再行HBV-DNA检测，如果HBV-DNA结果呈反应性，则应再次检测HBV标志物，HBV标志物包括HBcAb（乙肝核心抗体）、HBeAb（乙肝e抗体）、rmeAg（乙肝e抗原）、HBsAb（乙肝表面抗体）。ELISA检测阳性标准：S/CO大于等于1;HBV-DNA检测阳性标准：采用8份混样核酸标本，设定对照、室内质控，拆分测量结果为阳性，则可判定为NAT阳性，反之即为阴性。

1.3统计学方法

用SPSS22.0软件展开数据处理，计量资料数据（窗口期），表达形式为，计算以t检验为主;计数资料数据（特异性、敏感性），表达形式为[n/（%），以x检验为主，P<0.05，具统计学差异。

2结果

2.1两种检测方法特异性、敏感性对比：

特异性、敏感性：HBV-DNA法的显著高于ELISA法的，P<0.05（具统计学差异），见表1.

2.2两种检测方法窗口期对比：

HBV-DNA法窗口期为（20.06±3.25）d;ELISA法窗口期为（38.99±6.17）d，两组比较HBV-DNA法显著较ELISA法低，P<0.05（具统计学差异）。

3讨论

乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的主要病原体，包括禽嗜肝DNA病毒属、正嗜肝DNA病毒属，正嗜肝DNA病毒是引起感染的主要菌属，HBV感染是当前全球性的一种公共卫生问题。乙型肝炎病毒生物学特征主要有以下两点：1.形态、结构：由核衣壳、包膜组成，包膜含细胞脂肪、糖蛋白、HBsAg，核心颗粒包括HBV-DNA多聚酶、环状双股HBV-DNA、HBcAg（核心颗粒内含核心蛋白），是病毒的一种完整形态，存在感染性。病毒生活周期：HBV通过低亲和力受体，例如蛋白多糖、硫酸乙酰肝素，吸附到肝细胞表面，通过病毒受体结合大包膜蛋白的PreSl区，介导细胞对病毒的内吞作用，NTCP（钠离子-牛磺胆酸供转运多肽）是建立感染、介导HBV进入细胞的重要受体，在吞体膜融合、内吞体病毒包膜将衣壳释放入细胞质，运送衣殼至核孔复合体内部的病毒基因组rcDNA释放入细胞核。乙肝病毒主要以血液传播为主，我国是一个乙肝发病率较高的国家，对献血人群进行乙肝病毒检测对于控制乙肝传播极为重要。HBV-DNA反映了HBV的复制活跃程度，也可反映出HBV-DNA病毒的传染性，是指导抗病毒药物治疗、观察抗病毒药物治疗效果、预后的重要指标。定量检测突破了免疫学方法，通过对病毒核酸水平进行检测，进而反映出机体的病毒水平。近年来，随着我国医疗科技、基因检测技术的不断发展，基因诊断在疾病的治疗中发挥着重要作用，提取核酸是基因诊断成功的关键所在。

乙型肝炎病毒的传染源主要是乙型肝炎病毒携带者、慢性乙肝患者、急性乙肝患者，乙型肝炎病毒不论是在慢性期、急性期、潜伏期，血液均具有一定的传染性，HBsAg阳性大于6个月，无肝炎体征，肝功能指标均正常，血清AST以及ALT均在正常范围内，肝组织检查示：无明显异常，则被称为“乙型肝炎病毒携带者”，病毒携带者、慢性患者作为传染源的意义最大，传染性与体液中乙肝病毒的DNA含量、病毒复制呈正相关性。HBV的主要传播途径是血液传播，包括血制品和输血两方面，其次是母婴传播，即在分娩前后，母体携带HBV，并将HBV传染给新生儿，母乳喂养也会传播HBV。慢性乙型肝炎汇总，母婴传播占到了40%-50%，其次是密切接触传播，例如阴道分泌物传播或者精液传播，最后是医源性传播，包括不安全注射以及消毒不彻底等。肝细胞的受损程度与患者机体免疫应答的强弱有着极为密切的联系，HBV会导致免疫病理损害，具体表现为病毒降低机体免疫应答、病毒变异出现耐药、抗体介导免疫病理损害、细胞介导免疫病理损害等。HBsAg（表面抗原）、抗HBs（表面抗体）、HBeAg（e抗原）、抗HBe（e抗体）、抗HBc（核心抗体）被称为是乙肝五项，是HBV感染常用的检测指标。

ELISA法是临床检测乙肝病毒常用的一种方法，HBsAg是主要的检测指标，具有快捷、方便、简单等一系列优点，但是ELISA法也存在一定不足，例如HBV感染存在窗口期，明显增加了漏诊率，具有一定的局限性。HBV-DNA法属于生物学诊断方法，检测原理是有效测定HBV-DNA（HBV病毒），进而反应机体HBV感染情况，具有较高的灵敏度，现己被香港、日本、欧美等国家应用于献血者的血液筛查中。其次HBV-DNA法可有效缩短HCV、HBV、HIV的窗口期，降低病毒经血液传播的风险，安全性更高，有效弥补了ELISA法的不足。且临床有研究显示：在乙肝HBV感染早期，ELISA法检测不出，但HBV-DNA法可检测出。本研究显示：HBV-DNA法特异性、敏感性显著高于ELISA法，HBV-DNA法窗口期显著低于ELISA法，P<0.05.说明HBV-DNA法在乙肝HBV病毒检测中的有效性、可靠性，應当作为乙肝患者HBV检测的首选方法。

综上所述乙肝患者HBV检测中采用HBV-DNA法检测，可有效提高检测特异性、敏感性，减少窗口期，提高检测安全性，值得临床信赖，并进一步推广。