十二指肠球部溃疡患者肠道菌群改变

付冰 梁红亮 付丹

(1成都市第六人民医院消化内科，四川 成都 610000；2西南医科大学附属363医院消化内科)

随着生活节奏的加快和生活作息的不规律，消化性溃疡的发生率逐年增加。十二指肠球部溃疡作为消化性溃疡的重要组成部分，一旦发生便合并出血和穿孔甚至急性腹膜炎的危险性。既往研究表明，消化性溃疡患者肠道菌群会发生改变，尤其是幽门螺杆菌(HP)阳性患者在经过抗HP四联疗法后〔1,2〕。亦有研究报道称，HP会诱发肠道菌群的紊乱，阻碍溃疡面的愈合〔3,4〕。本研究探讨十二指肠球部溃疡患者，肠道菌群与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1研究对象 选择2016年1月至2018年1月成都市第六人民医院消化内科132例十二指肠球部溃疡患者。入组标准：①患者均经内镜证实为十二指肠球部溃疡，且溃疡面积≥0.3 cm×0.4 cm，②HP阳性与阴性均可，有明显的空腹痛和夜间痛症状，③均知情同意并签署知情同意书。排除标准：①有消化道手术史和(或)溃疡史，②合并心血管系统疾病患者并在治疗前1 w内服用过阿司匹林、氯吡格雷及华法林等抗凝药，③同时存在胃溃疡、炎症性肠病、糖尿病等诱发肠道菌群改变的疾病，④近1 w有上消化道出血，⑤合并有严重的心、肺、肝、肾功能不全的患者，⑥对研究用药过敏的患者。本研究在伦理委员会批准下进行。

1.2研究方法

1.2.1HP检测及样本获取 所有患者治疗前后进行13C呼气试验检测，确定HP阳性情况。并于就诊当天留取新鲜粪便200～300 g于无菌粪便收集管中，迅速置于-80℃冰箱保存，方便后续RT-PCR检测。

1.2.2RT-PCR 委托上海Invitrogen设计并合成肠道目的细菌的引物序列(见表1)，包括：乳酸杆菌属(LAG)、普氏杆菌属(PRE)、柔嫩梭菌属(CLS)、拟求梭菌属(CCS)、拟脆弱杆菌属(BFG)及肠杆菌科(ENG)。严格按照RT-PCR试剂盒规定的操作步骤对样品进行菌群DNA定量分析。

表1 肠道目的细菌的引物序列

1.2.3治疗方法 患者均需要营养均衡，加强十二指肠球部溃疡知识教育，交代注意事项，调整作息规律。药物治疗方面，HP阳性患者采用奥美拉唑四联疗法〔奥美拉唑(洛赛克，20 mg×1/次，1次/d，阿斯利康，国药准字：J20080097)+枸橼酸铋钾(先瑞，0.25 g×1/次，3次/d，苏州东瑞制药有限公司，国药准字：H10983185)+阿莫西林(阿莫灵，0.3 g×2/次，3次/d，香港澳美制药厂，国药准字：HC20080020)+呋喃唑酮(呋喃唑酮片，0.1 g×1/次，3次/d，北京双鹤药业股份有限公司，国药准字：H11020698)〕；HP阴性患者给予奥美拉唑和枸橼酸铋钾治疗。

1.3统计学方法 采用SPSS21.0软件进行χ2及t检验。

2 结 果

2.1一般资料 132例十二指肠球部溃疡患者中，男96例，其中HP阳性63例(65.63%)，女36例，其中HP阳性25例(69.44%)，两组相比未见显著差异(χ2=0.172，P=0.678)。年龄61～87岁，平均年龄(76.42±7.89)岁，<80岁患者76例，HP阳性53例(69.74%)，≥80岁患者56例，HP阳性35例(62.5%)，两组患者相比差异无统计学意义(χ2=0.760，P=0.383)。吸烟史方面，98例具有吸烟史的患者中有68例(69.39%)HP检查阳性；34例无吸烟史患者中20例(58.82%)检查HP阳性，两组间相比无明显差异(χ2=1.268，P=0.260)。家族史资料对比结果显示，有102例患者家族中患过消化性溃疡，这部分人群中有67.65%(69例)HP检测阳性；30例无家族史患者中，63.33%(19例)的患者HP检测阳性，两组间比较差异无统计学意义(χ2=0.194，P=0.660)。进一步对治疗情况进行分析，132例患者中，接受过传统治疗的患者122例，其中82例(67.21%)HP检测阳性；10例未接受过治疗的患者中，6例(60%)出现HP阳性，两组间亦未见显著差异(χ2=0.216，P=0.642)。

2.2肠道菌群在不同性别中的分布特点 在男性患者HP阳性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(42.5±9.3)CFU/g、(42.5±9.3)CFU/g、(46.3±8.4)CFU/g、(47.4±9.2)CFU/g、(46.7±8.8)CFU/g及(45.5±8.9)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(43.3±8.9)CFU/g、(45.7±7.3)CFU/g、(44.2±5.6)CFU/g、(48.1±10.1)CFU/g、(45.5±8.6)CFU/g及(45.9±9.1)CFU/g；两组LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在男性患者粪便中未见明显差异(均P>0.05)。在女性患者HP阳性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(45.5±8.8)CFU/g、(42.3±7.6)CFU/g、(45.9±7.7)CFU/g、(44.4±9.3)CFU/g、(47.8±9.2)CFU/g及(46.5±7.9)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(44.3±8.7)CFU/g、(43.1±6.9)CFU/g、(44.9±6.4)CFU/g、(45.1±9.4)CFU/g、(48.5±7.9)CFU/g及(45.9±8.7)CFU/g；两组LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在女性患者粪便中未见明显差异(均P>0.05)。

2.3肠道菌群在不同年龄患者中的分布 在年龄<80岁患者HP阳性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(43.2±8.2)CFU/g、(44.7±7.6)CFU/g、(46.5±7.6)CFU/g、(45.4±7.2)CFU/g、(47.2±8.2)CFU/g及(46.2±7.7)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(43.6±6.9)CFU/g、(45.3±6.2)CFU/g、(41.6±6.3)CFU/g、(46.1±8.3)CFU/g、(46.5±7.7)CFU/g及(37.9±6.8)CFU/g；两组LAG、PRE、CCS及BFG的滴度在<80岁患者粪便中未见明显差异(均P>0.05)，而在CLS和ENG中存在明显差异(均P<0.05)。在≥80岁患者HP阳性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(45.1±7.4)CFU/g、(43.1±5.8)CFU/g、(45.8±8.1)CFU/g、(46.2±6.2)CFU/g、(46.7±7.7)CFU/g及(47.3±9.3)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(44.6±7.1)CFU/g、(43.6±6.6)CFU/g、(46.1±7.3)CFU/g、(46.1±7.1)CFU/g、(47.2±8.1)CFU/g及(38.8±8.4)CFU/g；两组LAG、PRE、CLS、CCS及BFG的滴度未见明显差异(均P>0.05)，而ENG的滴度存在显著差异(P<0.05)。

2.4肠道菌群在患者吸烟史中的分布特点 在吸烟的HP阳性的十二指肠球部溃疡患者粪便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(42.4±7.6)CFU/g、(43.9±8.2)CFU/g、(43.5±6.9)CFU/g、(44.1±6.2)CFU/g、(44.2±7.1)CFU/g及(46.2±7.7)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(42.4±7.9)CFU/g、(43.1±8.3)CFU/g、(44.5±7.4)CFU/g、(46.1±7.2)CFU/g、(45.1±7.7)CFU/g及(36.8±6.5)CFU/g；两组仅在ENG中存在显著差异(P<0.05)。在不吸烟的HP阳性的十二指肠球部溃疡患者粪便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(43.8±9.5)CFU/g、(45.6±7.8)CFU/g、(46.2±9.8)CFU/g、(45.4±7.7)CFU/g、(48.2±8.3)CFU/g及(45.3±9.3)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(44.4±6.9)CFU/g、(45.2±9.5)CFU/g、(46.6±7.9)CFU/g、(45.2±7.9)CFU/g、(47.8±7.8)CFU/g及(46.1±8.7)CFU/g；两组LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度在不吸烟患者粪便中均未见明显差异(均P>0.05)。

2.5肠道菌群在治疗前后的分布特点 治疗前HP阳性的十二指肠球部溃疡患者粪便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(39.5±5.5)CFU/g、(45.7±9.2)CFU/g、(40.3±8.9)CFU/g、(46.1±9.5)CFU/g、(44.6±7.1)CFU/g及(35.4±8.5)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(46.3±7.9)CFU/g、(44.8±8.7)CFU/g、(45.3±9.2)CFU/g、(45.1±8.6)CFU/g、(45.1±8.3)CFU/g及(46.4±7.2)CFU/g；两组在LAG、CLS及ENG中存在显著差异(P<0.05)。治疗后HP阳性的十二指肠球部分溃疡患者粪便中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(45.7±9.4)CFU/g、(45.5±9.1)CFU/g、(44.4±7.9)CFU/g、(43.4±7.6)CFU/g、(45.6±7.8)CFU/g及(39.9±8.1)CFU/g；HP阴性组中，LAG、PRE、CLS、CCS、BFG及ENG的滴度分别为(46.1±10.7)CFU/g、(46.1±8.8)CFU/g、(44.3±8.5)CFU/g、(44.2±9.2)CFU/g、(46.1±8.9)CFU/g及(44.7±9.1)CFU/g；两组仅在ENG中存在显著差异(P<0.05)。

3 讨 论

十二指肠球部溃疡是临床上常见的消化系统疾病，通常表现为上腹痛，以空腹痛和夜间痛为主要特点。肠道菌群亦称为肠道微生物群，已被证实与功能性肠病，肥胖症，2型糖尿病和心血管疾病及许多自身免疫性疾病之间有很强的相关性〔5,6〕。随着科学技术的不断发展，使得通过肠道微生物组粪便多样性的基因检测和肠道菌群的种类和系统发育分类的准确分析成为可能。这种检测可以识别多样性的变化，并且可以揭示某些细菌的过度生长。既往研究表明，在缺血性心脏病不稳定的情况下，胃十二指肠区的侵蚀性和溃疡性病变伴随着其黏膜微生物的分泌增加和细菌和真菌的酶活性的诱导，在那里形成的异常微生物可以增加黏膜的炎症和坏死〔7〕，提示肠道菌群在溃疡形成及愈合中具有重要的作用。

本研究结果表明肠道微生物群在性别中的分布无显著差异，这与既往研究存在一定的差异，可能与入选标准的不同，溃疡种类的差异及样本量的大小密切相关〔8,9〕。本研究结果表明年龄是十二指肠球部溃疡发生的重要因素，在HP阳性患者中表现更显著，这与既往报道的HP阳性促进十二指肠球部溃疡发生的观点较为一致〔8,10～12〕。本研究暂无证据表明吸烟与十二指肠球部溃疡的发生存在相关性。治疗后十二指肠球部溃疡患者粪便中的菌群种类失衡情况逐渐改善，有助于病情的恢复，符合我们的预期〔13,14〕。但本研究也存在一定的不足之处，虽然初步结论可以说明肠道菌群在不同临床病理特征中表现各异，但由于本研究属于小样本临床实验，得出的结果仍需进一步大样本数据的证实。