乌司他丁抑制NF-κB通路对脓毒症急性肝损伤的保护作用

刘肖君 曾敏 符秀虹 何杨利 王萍 陈积雄

脓毒症是宿主感染细菌后引起的全身炎症反应综合征，肝脏在脓毒症发生、发展过程中参与炎症产物及细菌内毒素的清除，是脓毒症早期易侵及损伤的器官之一[1]，临床统计显示15.6%～50.4%的脓毒症患者会伴发急性肝损伤，临床研究认为，急性肝损伤是脓毒症患者死亡的一项重要的预警指标[2]。脓毒症急性肝损伤的发病机制较为复杂，至今还没有特效的治疗手段，研究脓毒症急性肝损伤的治疗方案仍然是临床工作者的重要任务[3]。乌司他丁(ulinastatin)是尿液中分离纯化出来的一种糖蛋白，起到广谱蛋白酶抑制剂的作用，在急性胰腺炎的临床治疗中发现乌司他丁具有显著的抗炎作用，起到器官保护功能[4]，动物研究发现乌司他丁对脓毒症急性肝损伤模型具有显著的疗效[5]。本研究探讨了乌司他丁对脓毒症急性肝损伤患者核因子κB(NF-κB)炎症通路的影响，以及其相关的临床效果。

资料与方法

一、临床病例资料

收集我院2017年1月至2018年9月治疗的脓毒症急性肝损伤患者112例，脓毒症诊断参照《国际脓毒症定义会议关于脓毒症诊断的新标准(2001)》[6]，急性肝损伤诊断：总胆红素(TBil)>34 μmol/L，和(或)谷草转氨酶( AST)、丙氨酸氨基转移酶( ALT)>2倍正常值。排除对象：原发心、肾、肺等脏器严重功能障碍者，既往有慢性肝脏疾病者，伴发胆道疾病者，伴发肿瘤患者。使用随机数表法将患者随机分为观察组和对照组，每组56例。从表1可见，两组在性别组成、年龄分布、致病原因、致病菌类型上差异均无统计学意义(P>0.05)。

二、方法

(一)治疗方法

对照组：抗感染、营养支持、液体复苏、维持保持水和电解质平衡等常规治疗；观察组在对照组基础上给予乌司他丁(广东天普生化医药股份有限公司，生产批号：160114)10 万单位治疗，溶于100 mL 0.9%氯化钠注射液静脉滴注，2次/d，疗程7 d。

(二) 外周血中p65、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、TBil、AST和ALT的检测

p65、TNF-α、IL-6、TBil、AST和ALT使用ELISA法检测。操作简述如下：治疗前及治疗后采集患者静脉血2 mL，分离上层血清，置于-70℃冰箱保存待。ELISA检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，标本交由检验科参照试剂盒说明书操作，并设立空白孔及样品孔，加入相关试剂，显色后用赛默飞世尔科技公司生产的Multiskan MK3酶标仪测定吸光度值，依据标准品绘制的标准曲线，计算p65、TNF-α、IL-6、TBil、AST和ALT表达水平。

三 、统计分析

选用SPSS 18. 0行数据统计，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、 治疗前、疗程结束后p65、TNF-α和IL-6表达水平的变化

治疗前对照组和观察组p65、TNF-α和IL-6表达水平无显著性差异(P>0.05)，疗程结束后观察组p65、TNF-α和IL-6分别为(15.25±3.26)、(43.64±8.71)和(30.72±7.26)μg/L，显著低于对照组的(23.57±5.42)、(52.53±10.62)和(41.95±10.12)μg/L(P<0.05)。见表2。

二、 治疗前、疗程结束后TBil、AST和ALT的变化

治疗前对照组和观察组TBil、AST和ALT表达水平无显著性差异(P>0.05)，疗程结束后观察组TBil、AST和ALT分别为(26.22±5.0)μmol/L、(64.58±14.36)U/L和(60.14±13.68)U/L，显著低于对照组的(32.02±8.14)μmol/L、(64.58±14.36)U/L 和(60.14±13.68)U/L(P<0.05)。见表3。

表1 两组临床资料的比较

表2 两组p65、TNF-α和IL-6表达水平的比较

注：治疗后与治疗前比较，**P<0.01。观察组治疗后与对照组治疗后比较，▲P<0.05。

表3 两组TBil、AST和ALT的比较

注：治疗后与治疗前比较，**P<0.01。观察组治疗后与对照组治疗后比较，▲P<0.05。

三、 治疗前、疗程结束后急性生理与慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ)

治疗前对照组和观察组APACHEⅡ评分为(21.34±4.02)分和(21.28±4.06)分，两组间无显著性差异(P>0.05)，疗程结束后观察组APACHEⅡ评分为(8.82±3.14)分，显著低于对照组的(11.13±3.65)分(P<0.05)。

讨 论

肝脏虽有门静脉和肝动脉双重血液供应，但脓毒症时平均动脉压下降，肝动脉、胃肠道动脉等血流减少，胃肠道血流减少又会导致门静脉血流减少，因此脓毒症肝脏微循环血流明显减少，缺血缺氧的肝细胞再受到细菌毒素和炎性因子的攻击，极易伴发急性肝损伤，可见肝脏是脓毒症侵犯较早且最易受损的靶器官。脓毒症急性肝损伤临床表现形式可为缺氧性肝炎或胆汁淤积( 高胆红素血症) ，容易引起临床医生的忽视，给早期的积极防治治疗带来困难[8]。

核因子κB(NF-κB)是一个常规的炎症激活通路，经典的炎症因子TNF-α和IL-6都受到该通路的调控，脓毒症全身炎症综合征中已发现炎症通路的激活[9]。邱荣宗等[10]使用白藜芦醇治疗脓毒症模型大鼠，发现抑制NF-κB通路后可以显著抑制模型鼠的全身炎症反应，显著改善模型鼠的预后。乌司他丁属于广谱蛋白酶抑制剂，能稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶的释放，清除氧自由基，减少炎症因子释放，临床使用中发现乌司他丁可以显著降低脓毒症患者的死亡率[11]。Cao等[12]的研究发现乌司他丁可以抑制NF-κB通路 发挥免疫调节作用，对脓毒症模型大鼠起到治疗作用。本研究观察到乌司他丁下调了NF-κB通路中的关键活性分子P65蛋白，随后的下游炎症因子TNF-α和IL-6都获得了显著的减低。TBil、AST和ALT是临床上肝功能主要的监控指标，本研究显示观察组治疗后TBil、AST和ALT显著低于对照组，说明了乌司他丁有利于脓毒症急性肝损伤患者肝功能的恢复，本研究的结果提示了乌司他丁对脓毒症急性肝损伤患者肝功能的保护作用可能是通过抑制NF-κB通路实现的。APACHEⅡ评分系统是临床上常用的机体急性生理状态进展程度的评估指标，本研究观察到治疗后观察组APACHEⅡ评分显著低于对照组，说明了观察组有利于患者病情的缓解。

综上所述，本研究显示乌司他丁可以抑制脓毒症急性肝损伤患者NF-κB炎症通路，发挥对肝脏的保护作用，有利于患者病情的恢复。