急性冠状动脉综合征患者血清miR-27a、miR-34a表达及其临床意义

王 磊，夏云峰，李 良，王 晨

(解放军总医院第四医学中心干一科，北京 100048)

急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)是指冠状动脉不稳定斑块破裂并形成血栓引起心肌急性缺血的临床综合征，可增加心血管疾病患者死亡率，因而早期诊断ACS对提高治疗效果具有重要意义[1]。ACS发生过程涉及炎症反应与细胞凋亡过程，其中炎症反应可促进动脉管壁粥样硬化进展，进而引起心肌供血不足，研究显示冠状动脉粥样硬化相关炎症因子可用于诊断ACS并取得一定效果[2]。微RNAs(microRNAs，miRNAs)是一种内源性非编码RNA，可作为诊断多种心血管疾病的重要标志物[3]。研究表明心肌细胞中miR-27a呈高表达并可影响细胞增殖及凋亡过程[4]。miR-34a在急性心肌梗死患者中表达水平明显升高，并与冠状动脉粥样硬化引起的心肌缺血及心脏重构过程密切相关[5]。关于miR-27a、miR-34a表达与ACS发生和发展过程的研究较少见报道，本研究主要探讨ACS患者血清miR-27a、miR-34a表达及其与冠状动脉病变程度的关系，为进一步揭示ACS发病机制及提高诊疗效果提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年7月至2018年2月于解放军总医院第四医学中心进行冠状动脉造影术的患者为研究对象，其中ACS患者86例为ACS组，所有患者均经冠状动脉造影检查证实且符合相关诊断标准[6]，均行SYNTAX评分，并根据冠状动脉病变程度分为轻度病变组(22例)、中度病变组(27例)、重度病变组(37例)[7]。稳定型心绞痛(stable angina petoris，SAP)患者70例为SAP组，所有患者均经冠状动脉造影检查证实且符合相关诊断标准[8]。同时选取经冠状动脉造影检查正常的72名志愿者为对照组。纳入标准：受试者均符合相关诊断标准；受试者均签署知情同意书。排除标准：肝肾功能严重损伤者；慢性感染性或风湿性疾病者；患有自身免疫性疾病者；急性心力衰竭患者；合并其他恶性肿瘤患者；心脑血管疾病患者；合并造血系统疾病患者。

1.2方法

1.2.1标本采集 所有受试者入组后均于次日凌晨分别抽取空腹静脉血2 mL，3 000 r/min转速离心5 min(离心半径10 cm)后吸取血清，置于-20 ℃冰箱保存待测。

1.2.2实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-27a与miR-34a表达水平 按照Trizol试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司生产，编号：ALH011)说明书提取总RNA，将RNA反转录为互补DNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清 miR-27a与miR-34a表达水平。反应体系为20 L：SYBR Green Ⅰ qPCR Master Mix 10 L，上下游引物各0.5 L，互补DNA模板2 L，双蒸水6.6 L，ROX Reference Dye(50×)0.4 L，其中引物合成见表1。反应程序为：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s；60 ℃ 30 s 72 ℃ 30 s，共40个循环。反应结束后收集数据，并对所得数据Ct值进行分析，miR-27a、miR-34a均以U6为内参基因，采用2-ΔΔCt算法计算miR-27a与miR-34a的相对表达量。

表1 实时荧光定量聚合酶链反应引物序列

1.3观察指标 所有受试者均检测收缩压、舒张压水平，并统计患高血压者、有吸烟史者，采用酶联免疫吸附法检测三酰甘油(triacylglycerol，TG)与总胆固醇(total cholesterol，TC)水平，直接法检测高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)与低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)水平，试剂盒均购自上海盈公生物技术有限公司。采用葡萄糖氧化酶法检测所有受试者空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)，应用HF-240全自动血糖分析仪(泰安市泰诺科贸有限公司)检测糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，HBA1c)，采用增强免疫比浊法检测高敏C反应蛋白(high sensitive C-reactive protein，hs-CRP)水平。

2 结 果

2.1各组一般资料比较 ACS组与SAP组患者TC、LDL-C、TG、FBG、HBA1c及hs-CRP水平显著高于对照组(P<0.05)，且ACS组显著高于SAP组(P<0.05)，而HDL-C显著低于对照组(P<0.05)，三组受试者性别、年龄、高血压、吸烟史、收缩压、舒张压比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.2各组血清miR-27a、miR-34a表达水平比较 各组血清miR-27a、miR-34a表达水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。ACS组和SAP组患者血清miR-27a、miR-34a表达水平显著高于对照组(P<0.05)，且ACS组显著高于SAP组(P<0.05)，见表3。

2.3miR-27a、miR-34a与ACS患者临床指标的关系 Pearson法分析结果显示miR-27a与患者血清TC、LDL-C、HBA1c、hs-CRP均呈正相关(P<0.05)，而与TG、FBG无明显相关性(P>0.05)；miR-34a与TC、HBA1c、hs-CRP呈正相关(P<0.05)，而与LDL-C、TG、FBG无明显相关性(P>0.05)；miR-27a、miR-34a均与HDL-C呈负相关(P<0.05)，见表4。

2.4ACS患者冠状动脉病变程度与miR-27a、miR-34a 表达的关系 不同病变程度组miR-27a、miR-34a比较差异有统计学意义(P<0.01)。重度病变组与中度病变组ACS患者血清miR-27a、miR-34a 表达水平均显著高于轻度病变组(P<0.05)，且重度病变组显著高于中度病变组(P<0.05)，见表5。

表2 各组受试者一般资料比较

对照组：健康体检者；SAP：稳定型心绞痛；ACS：急性冠状动脉综合征；TC：总胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；TG：三酰甘油；FBG：空腹血糖；HBA1c：糖化血红蛋白；hs-CRP：高敏C反应蛋白；△为χ2值，余为F值；a与对照组比较，P<0.05；b与SAP组比较，P<0.05

组别例数miR-27amiR-34a对照组721.12±0.371.05±0.15SAP组701.73±0.28a1.52±0.25aACS组862.21±0.72ab2.01±0.67abF值88.51892.548P值<0.001<0.001

SAP：稳定型心绞痛；ACS：急性冠状动脉综合征；对照组：健康体检者；a与对照组比较，P<0.05；b与SAP组比较，P<0.05

表4 miR-27a、miR-34a与ACS患者临床指标的关系

ACS：急性冠状动脉综合征；TC：总胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；TG：三酰甘油；FBG：空腹血糖；HBA1c：糖化血红蛋白；hs-CRP：高敏C反应蛋白

组别例数miR-27amiR-34a轻度病变组221.22±0.201.35±0.23中度病变组271.85±0.62a1.61±0.27b重度病变组372.23±0.37ab2.20±0.37abF值37.05459.358P值<0.001<0.001

ACS：急性冠状动脉综合征；a与轻度病变组比较，P<0.05；b与中度病变组比较，P<0.05

2.5影响ACS患者冠状动脉病变程度的有序Logistic回归分析 将影响ACS患者冠状动脉病变程度的相关因素进行有序Logistic回归分析，多因素分析结果显示，血清miR-27a、miR-34a表达水平均为ACS患者冠状脉病变的影响因素，见表6、表7。

ACS：急性冠状动脉综合征；TC：总胆固醇；HBA1c：糖化血红蛋白；hs-CRP：高敏C反应蛋白

表7 影响ACS患者冠状动脉病变程度的 有序Logistic回归分析

ACS：急性冠状动脉综合征；TC：总胆固醇；HBA1c：糖化血红蛋白；hs-CRP：高敏C反应蛋白

3 讨 论

ACS主要以冠状动脉斑块不稳定、易破裂、血小板凝聚为病理基础，研究表明细胞凋亡与易损斑块稳定性及ACS发生、发展过程密切相关[9]。miRNA 可通过调控下游基因表达进而参与多种生理病理过程，研究表明部分miRNA可参与心肌细胞生长、重构及凋亡过程[10]。因此，本研究检测ACS患者血清miR-27a、miR-34a表达并分析其与冠状动脉病变的关系，旨在为监测病情进展及治疗方案提供新思路。

miR-27a可通过调节细胞凋亡及细胞周期等过程而发挥癌基因作用导致病情恶化，研究表明心肌细胞中miR-27a呈高表达并参与心力衰竭、心肌肥厚等多种心肌疾病发生及发展过程[11-12]。研究显示miR-27a可通过抑制凋亡蛋白Bcl-2表达提高caspase-3等促凋亡因子表达水平进而参与心肌细胞凋亡过程[13-14]。本研究结果显示ACS组和SAP组患者血清miR-27a表达水平显著高于对照组，且ACS组显著高于SAP组，说明ACS患者血清miR-27a表达水平明显升高，并与ACS疾病严重程度有关。分析原因可能为miR-27a通过提高促凋亡因子表达水平，并降低抗凋亡因子表达进而参与ACS发生过程。ACS与炎症反应密切相关，研究发现miR-34a可通过调控冠状动脉粥样硬化炎症反应过程而促进冠心病的发生[15]。研究表明miR-34a可调控血小板形成过程，而血小板激活可导致血栓形成引发冠心病[16-17]。近年来研究发现，miR-34a表达水平降低可促使靶基因Bcl-2表达水平升高，进而抑制动脉粥样硬化过程中的细胞凋亡[18]。本研究结果显示，ACS组和SAP组患者血清miR-34a表达水平显著高于对照组，且ACS组显著高于SAP组，说明ACS患者血清miR-34a表达水平明显升高并可参与ACS发生过程。推测ACS患者血清miR-27a 表达水平升高可抑制Bcl-2表达并提高miR-34a表达水平进而参与ACS发生过程。同时本研究结果显示miR-27a与miR-34a表达呈正相关且均与HDL-C呈负相关，miR-27a与TC、LDL-C、HBA1c、hs-CRP呈正相关，miR-34a与TC、HBA1c、hs-CRP 呈正相关，说明miR-27a、miR-34a 与ACS患者脂质代谢及炎症反应密切相关。提示miR-27a与miR-34a发挥协同作用并可通过参与细胞凋亡调控过程促使动脉粥样硬化斑块不稳定进而促进ACS发生及发展过程。

ACS患者冠状动脉病变严重程度不同，SYNTAX 积分可有效评价冠状动脉病变严重程度，研究显示SYNTAX积分增加表示患者血运重建与不良心脏事件发生率增加[19-20]。本研究对所有ACS患者均进行SYNTAX评分并划分不同等级，将ACS患者分为轻度病变组、中度病变组、重度病变组，并检测不同病变程度患者血清miR-27a与miR-34a 表达水平，结果显示重度病变组和中度病变组ACS患者血清miR-27a、miR-34a表达水平均显著高于轻度病变组，且重度病变组高于中度病变组，说明随着ACS患者冠状动脉病变严重程度加剧血清miR-27a、miR-34a表达水平显著升高，提示miR-27a、miR-34a可有效评价ACS患者冠状动脉病变程度。同时本研究进一步分析影响ACS患者冠状动脉病变的相关因素，Logistic回归分析显示血清miR-27a、miR-34a 均为ACS患者冠状脉病变严重程度的影响因素。本研究结果揭示miR-27a与miR-34a 在ACS发生及发展中发挥调控作用，并可作为评估ACS患者冠状动脉病变程度的重要指标。但本研究仅从miR-27a与miR-34a表达水平方面初步分析其与ACS发生及冠状动脉病变程度的关系，具体作用机制有待进一步研究。

综上所述，ACS患者血清miR-27a与miR-34a表达水平均显著升高并与冠状动脉病变程度有关，有助于实时监测ACS患者病情进展。