高效液相色谱法测定痰咳净片中咖啡因的含量

2019-08-26韩璐

中国医药指南 2019年20期

韩璐

（吉林省四平市食品药品检验所，吉林四平 136000）

痰咳净片是由桔梗、苦杏仁、远志、五倍子、冰片、甘草、咖啡因等药物组成的复方制剂，具有通窍顺气，消炎镇咳，促进排痰。用于急慢性支气管炎、胸闷、咽喉炎、肺气肿等引起的咳嗽多痰，气促，气喘等症，疗效显著。在产品质量检测中，咖啡因含量测定采用的是间接碘量法，该方法操作麻烦，影响因素较多，误差较大[1]。本文根据实验中影响因素，做了很多实验，建立了高效液相色谱法对痰咳净片中的咖啡因含量进行测定，具体如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪U3000（美国戴安）；电子天平型号BS224S，感量0.1 mg（北京塞多利斯仪器系统有限公司）；电子天平型号BT25S，感量0.01 mg（北京塞多利斯仪器系统有限公司）；咖啡因对照品，批号为171215-201211（中国药品研究院）；所有试剂为分析纯；痰咳净片（批号为170201、180101、170801）；规格：每片重0.2 g，含咖啡因20 mg，由四平正和制药有限公司提供。

2 实验方法与结果

2.1 实验条件的选择

2.1.1 HPLC法的确立依据：该复方制剂中的咖啡因采用C18柱，反相高效液相色谱法对其进行检测，而且操作简单，其他成分没干扰。

2.1.2 检测波长的确定：咖啡因在216 nm有最大吸收，其他成分不干扰，检测的灵敏度符合检测要求。另外了参考文献中该类制剂的色谱条件，采用216 nm为检测波长[2]。

2.1.3 色谱条件。色谱柱：Diamonsil C18（2） 5u 250×4.6 mm ；流动相：甲醇-水（40∶60）；进样量：20 μL；流速：1.0 mL/min；检测波长：216 nm；柱温：25 ℃。

2.1.4 溶液的配制

2.1.4.1 对照品溶液的配制：精密称取咖啡因对照品约15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液2.5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀释制成每1 mL中含咖啡因约为0.03 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.4.2 供试品溶液的配制：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于咖啡因15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液2.5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.1.5 测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，分别注入高效液相色谱仪中，记录峰面积，以外标法计算，即得。

2.1.6 处方中其他成分吸收峰的检测：按处方比例，精密称取无咖啡因的阴性样品适量，按供试品溶液的配制方法配制，吸取20 μL，注入高效液相色谱仪中，观察色谱图。处方中其他成分在216 nm无干扰。

2.2 方法学验证

2.2.1 标准曲线的绘制：精密称取咖啡因对照品约15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1、2、3、4、5 mL，分别置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别吸取20 μL，注入高效液相色谱仪中，检测，记录峰面积，得咖啡因标准曲线。回归方程为Y=1.417X+0.005（r=0.999）。

2.2.2 回收率试验：精密称取咖啡因约10 mg，置已知含量的痰咳净片中，按供试品溶液项下配制，进样，计算其回收率。结果见表1。