VEGF、VEGFR在NSCLC 组织中的表达及临床意义

雷芸，闫春良，薛旗山，赵秋红

北京航天总医院呼吸内科，北京 100076

在揭示非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）病情进展机理的过程中发现，肿瘤相关调控因子的表达能够影响肿瘤细胞的生物学特征，增加恶性肿瘤的发生风险[1-2]。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的高表达能够促进血管内皮细胞的新生，促进新生血管内皮细胞的迁移，进而促进毛细血管的新生，提高肿瘤组织的血流灌注水平[3]。血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）不仅能够参与VEGF信号通路的激活，还能够促进肿瘤细胞的增殖，导致肿瘤细胞的细胞周期调控紊乱[4]。相关研究对VEGF在NSCLC患者中的表达情况进行探讨，发现在NSCLC患者中，VEGF的阳性表达率明显上升[5]。但目前尚缺乏关于VEGF、VEGFR表达与NSCLC患者临床特征关系的研究。本研究对VEGF、VEGFR在NSCLC患者NSCLC组织中的表达情况进行分析，并对VEGF、VEGFR表达与NSCLC患者临床特征的关系进行探讨，旨在为NSCLC患者的诊疗提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2017年12月北京航天总医院收治的NSCLC患者。纳入标准：①符合中华医学会制定的NSCLC诊断标准[6]；②经胸部计算机断层扫描（computed tomography，CT）、磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）检查初步确诊，经纤维支气管镜病理学检查或术后病理学检查证实为NSCLC；③年龄≤79岁；④病历资料完整。排除标准：①长期使用免疫抑制剂；②既往具有放化疗史；③伴有结缔组织疾病、强直性脊柱炎、风湿性疾病。根据纳入和排除标准，本研究共纳入NSCLC患者90例，其中男49例，女41例；年龄45～79岁，平均（62.5±10.0）岁；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期32例，Ⅲ期34例，Ⅳ期4例；肿瘤直径≥5 cm 43例，肿瘤直径＜5 cm 47例；病理学分级：G1级23例，G2级34例，G3级33例；有淋巴结转移47例，无淋巴结转移43例。收集90例NSCLC患者的NSCLC组织和对应癌旁组织（距离肿瘤病灶边缘3 cm以内的肺组织）标本。

1.2 免疫组织化学法检测

取NSCLC组织和对应癌旁组织，石蜡包埋，连续性切片，厚度3 μm，60℃烤片60 min，常规脱水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）进行抗原修复，加入10 μl蒸馏水，加入10%过氧化氢5 μl，室温下孵育30 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）洗涤3次，每次 3 min，加入 VEGF、VEGFR 单克隆抗体（1∶1000，购自罗氏检测公司），37℃孵育60 min，PBS洗涤3次，每次3 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的VEGF、VEGFR二抗（1∶2000，购自罗氏公司），37 ℃孵育20 min，PBS洗涤3次，每次3 min，加入二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色后，PBS冲洗和复染，脱水后在显微镜下进行观察。

1.3 免疫组织化学法检测结果评价

免疫组织化学法检测结果判定：VEGF、VEGFR蛋白的阳性着色表达于细胞质，呈黄色、棕黄色或褐色表达。根据着色强度评分：0分，无色；1分，淡黄色；2分，棕黄色；3分，褐色、黑色。根据阳性细胞所占比例评分：1分，阳性细胞所占比例≤10%；2分，阳性细胞所占比例为11%～50%；3分，阳性细胞所占比例为51%～75%；4分，阳性细胞数所占比例＞75%。将着色强度和阳性细胞所占比例评分相乘，总分＜3分为蛋白阴性表达，≥3分为蛋白阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件对数据进行分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF、VEGFR表达情况的比较

NSCLC组织中VEGF的阳性表达率为72.22%（65/90），明显高于癌旁组织的13.33%（12/90），差异有统计学意义（χ2=49.973，P＜0.01）；NSCLC组织中VEGFR的阳性表达率为68.89%（62/90），明显高于癌旁组织的12.22%（11/90），差异有统计学意义（χ2=47.455，P＜0.01）。（图1）

图1 NSCLC患者NSCLC 组织和癌旁组织中VEGF、VEGFR蛋白的表达情况（免疫组织化学染色，×400）

2.2 NSCLC组织中VEGF、VEGFR表达与NSCLC患者临床特征的关系

TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、合并胸腔积液NSCLC患者NSCLC组织中VEGF、VEGFR的阳性表达率均分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、未合并胸腔积液的患者，差异均有统计学意义（χ2VEGF=4.712、8.140、5.777，PVEGF＜0.05；χ2VEGFR=7.204、4.438、8.025，PVEGFR＜0.05）；但不同肿瘤直径、病理学分级NSCLC患者NSCLC组织中VEGF、VEGFR的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 不同临床特征NSCLC患者NSCLC组织中VEGF、VEGFR的阳性表达情况（n=90）

3 讨论

NSCLC的发生与长期生活习惯的改变有关[6]。肿瘤相关因子的改变能够影响上皮细胞的损伤修复、血流灌注及DNA的扩增调控，促进呼吸系统恶性肿瘤的发生[7-8]。本研究针对VEGF、VEGFR的表达情况进行研究，希望能够为临床上NSCLC的病因分析及免疫靶向治疗提供参考。

VEGF是VEGF家族成员之一，其能够通过激活细胞膜表面的蛋白激酶，影响肺泡上皮细胞内信号通路的激活程度。相关研究表明，VEGF的表达不仅能够促进新血管生成，提高血管侧支循环的建立能力，还能够促进肿瘤细胞的细胞核DNA转录[9]；VEGFR能够通过增加血管内皮细胞的损伤修复能力，激活下游磷酸肌醇3-激酶（phosphatidylinositide 3-kinase，PI3K）信号通路，进而降低肿瘤细胞的基因错配修复能力[10]。已有研究表明，VEGFR表达水平的增高能够增强肺泡上皮细胞的侵袭和迁移能力，提高肿瘤细胞对血管内皮细胞的黏附能力，进而促进患者的疾病进展[11-12]。

本研究结果显示，NSCLC组织中VEGF、VEGFR蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁组织（P＜0.01），提示VEGF、VEGFR表达水平增高与NSCLC的发生、发展密切相关。这主要由于VEGF、VEGFR表达水平增高能够促进肿瘤细胞的浸润和转移的能力，增加肿瘤组织血流动力学的紊乱风险。同时VEGF、VEGFR还能够抑制细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（B cell lymphoma/leukemia-2 associated X protein，BAX）的表达，维持肿瘤细胞的持续性增殖过程。姚月娟等[13]研究发现，在NSCLC患者中，VEGF蛋白的表达水平可平均上升30%以上，在合并有明显的局部转移或远处肿瘤扩散的患者中，VEGF蛋白的阳性表达率上升更为显著。本研究结果显示，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、合并胸腔积液NSCLC患者NSCLC组织中VEGF、VEGFR的阳性表达率均分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、未合并胸腔积液的患者（P＜0.05），提示VEGF、VEGFR表达水平增高与肺癌患者的病情进展密切相关。而VEGF或VEGFR的表达对于胸腔积液形成的影响，考虑可能与二者的表达能够提高血管内皮细胞的通透性，促进液体的渗出有关。

综上所述，在NSCLC患者中，VEGF、VEGFR蛋白的阳性表达率明显升高，且VEGF、VEGFR表达与肺癌患者的TNM分期、淋巴结转移情况、合并胸腔积液情况密切相关。后续相关研究可以探讨VEGF、VEGFR表达与肺癌患者生存预后的关系。