包埋模具温度对超小活检组织包埋质量的影响

罗添友，唐 进，李明峰，张 刚

四川大学华西医院 病理科(成都 610041)

包埋是指将组织放于受热熔化的载体中，通过载体冷却固化后支撑组织的过程[1]，是组织制片中重要的环节之一。临床上常用的包埋方法为石蜡包埋法[2]，而超小活检组织是石蜡包埋中的难点[3-4]。随着胃肠镜，纤维支气管镜及穿刺组织检查技术的日益成熟，超小组织活检成为门诊患者的主要病理检查项目之一，但因其送检组织具有体积微小，形态不规则，数量少等因素，因此病理技术人员在包埋和切片过程中稍有不慎将会导致制片失败，影响病理诊断。有报道[5]显示，包埋模具的温度可影响组织的包埋质量，常温包埋模具注入石蜡后，仅底部石蜡为熔化状态，表面及四周温度迅速下降，很快形成半凝固状态，不利于组织的包埋，影响切片质量。因此，本研究拟评价包埋模具的温度对超小活检组织包埋质量的影响，为临床病理技术提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料来源及分组

收集2019年1-3月在四川大学华西医院胃肠镜、纤维支气管镜下活检及超声科粗针穿刺的超小标本120例为研究对象，标本包括甲状腺、乳腺、肺、胃、肝、肾脏、前列腺等组织。依照随机数字表法分为两组，模具加热组(H组)和模具常温组(C组)，每组60例。

1.2 仪器

LEICA Histocore Arcdaia C组织包埋机，工作前两组蜡缸温度设置为70 ℃，冷台温度设置为-10 ℃，电热镊设置为70 ℃。

1.3 包埋方法

所有标本经过固定、脱水、透明、浸蜡处理后待用。H组：1)每例取1个加热至70 ℃的包埋模具，将热包埋模具放置包埋机蜡嘴下方热台(温度为70 ℃)，开始注蜡，第1次注蜡少许，一般超过包埋模底部即可；2)将组织用电热镊迅速从包埋盒取出，放入包埋模具底部中央、轻压、粘稳；3)选择组织的包埋方向，迅速将包埋模具移动到小冷冻台，使之底部快速凝固；4)包埋模底部凝固后，将包埋盒底盒放在该包埋模具上，沿包埋盒的四周进行二次注蜡，蜡量适中，不要超过包埋盒边缘；5)将注好蜡的包埋模具置于冻台充分冷却，再进行常规切片，然后行HE染色与网状纤维染色。C 组每例取一个常温包埋模具，其操作方法同H 组。

1.4 观察指标

比较两组包埋时间、包埋合格率、HE染色后组织结构完整性、细胞显示效果、网状纤维染色效果及切片等级。包埋合格率依肉眼下组织切面是否完整判断，单张切片满分计10分，组织稍不完整扣1～3 分，不完整扣4～10 分，包埋合格率=切片满分例数占总切片例数的百分比。HE染色后组织结构完整计10分，细胞显示效果包括细胞透明度及核质对比清晰度各计10 分，网状纤维染色效果包括背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度各计10 分，每项指标因质量缺陷扣减相应分值，以上指标由两名主治医师进行双盲评片，每项指标的分数取其均值。切片等级分为甲级片：≥90 分；乙级片：75～89 分；丙级片：60～74 分；丁级片：≤59 分[6]。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 两组包埋时间及合格率比较

与C组比较，H组包埋时间延长，包埋合格率增加(P<0.01)(表1)。

表1 两组包埋时间及合格率的比较

2.2 两组包埋切片后肉眼及镜下比较

C组包埋后切片存在切面不全现象，未展示最大组织面，染色组织较松散；H组所有切片厚薄适当，切面完整，染色后对比分明(图1)。

图1 两组胃窦近贲门处活检组织包埋切片后肉眼及镜下比较

注：A、C示胃窦近贲门处活检组织。A：经加热模具包埋切片后厚薄适当，切面完整；C：镜下见少许胃黏膜组织，腺体减少，间质中见中等量淋巴细胞浸润，灶性区见淋巴滤泡形成，可见多灶出血；B、D示胃窦近贲门处活检组织；B：经常温模具包埋切片后切面不全，未展示最大组织面；D：镜下见少许胃黏膜组织，腺体减少，间质中见中等量淋巴细胞浸润，可见多灶出血

2.3 两组包埋后制片评分比较

经HE染色后，与C组比较，H组织结构完整性、细胞显示效果(细胞透明度和核质对比度)、网状纤维染色效果(背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度)等项目评分增加(P<0.01)(表2)。

表2 两组包埋后制片评分的比较(分，

2.4 两组切片等级比较

H组切片等级高于C组，差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表3 两组切片等级的比较(n=60)

3 讨论

随着胃肠镜，纤维支气管镜及超声引导下粗针穿刺技术的日益发展和成熟，因其操作简便、损伤小、安全性大，确诊率高，其在临床中的应用也越来越广泛[7-9]。超小组织活检是门诊患者的主要病理检查项目之一[10-12]，如声带肿物，因其组织体积较小，数量少，工作人员在包埋、切片过程中稍有不慎将会导致取材失误，包埋结果不理想，未包埋最大面，切片不全，导致制片失败，甚至发生组织遗失的严重情况，最终影响病理诊断，存在很大的医疗风险；所以在组织标本制作的环节中，不但要求病理技术人员要有高度的责任心，还需要有正确规范的操作流程，而包埋技术是病理组织制片过程中至关重要的环节之一，只有组织包埋合格后，才能为以后的切片、染色和诊断提供可靠的保证，为患者的后期治疗赢得宝贵时间。

在病理技术中常用的包埋方法为石蜡包埋法，石蜡是由于碳氢键所构成的正烷烃的混合物，没有固定的熔点，一般为56～62 ℃[13]，因此在包埋过程中，石蜡受热熔化后，将组织放置于熔化的石蜡液中，通过石蜡冷却凝固后支撑组织，来实现包埋的过程，在此过程中，应在石蜡凝固的时间范围内将浸蜡的组织妥善放置于石蜡液的中央。常温包埋模具只有底部受热，其余部分为常温，当注入石蜡后，只有底部石蜡为熔化状态，表面及四周温度迅速下降，很快形成半凝固状态，不利于组织的包埋[14]，特别是当组织呈条索状时，容易导致蜡块切面中间凹陷，因组织不在一个切面上而丧失整条组织的完整性[15]。本研究中，将包埋模具加热至70 ℃，与石蜡温度一样，第1次注蜡后，温度下降速度减慢，保证了工作人员有足够的时间将组织从包埋盒取出，并妥善放入包埋模具底部中央，并调整组织的包埋方向，再移至小冷冻台，使底部快速凝固后完成二次注蜡。结果显示，H组包埋模具加热后，延长了包埋时间，提高了包埋的合格率，后期切片和HE染色后，H组组织结构完整性、细胞透明度和核质对比度以及背景清洁度、纤维完整性、网状纤维与胶原纤维对比度评分增加，这与林倩等[5]研究结果相吻合。

综上所述，热包埋模具可提高超小活检组织包埋的合格率，保证切片质量，提高诊断准确率。