浸润性乳腺癌组织中miRNA-206表达与临床病理及预后的关系*

杨永德，周焱琳

(重庆三峡中心医院，重庆 404000)

浸润性乳腺癌是乳腺癌众多类型中的一种，发病率逐年升高，已严重影响我国女性身心健康[1]。由于浸润性乳腺癌早期症状不明显，多数患者容易忽视，因此死亡率偏高。目前，多数学者正致力于浸润性乳腺癌的研究，以期发现延缓或抑制浸润性乳腺癌发展的新方法。

目前，已有多数微RNA(microRNA，mRNA)被发现参与肿瘤发生、发展过程[2-4]。有研究[5]已证实miRNA-206通过调控Cx43参与乳腺癌细胞的转移。但关于miRNA-206与浸润性乳腺癌患者预后的关系并未阐明。因此，笔者选取121例浸润性乳腺癌患者作为研究对象，分析miRNA-206表达与临床病理及预后的关系。现报道如下：

1材料与方法

1.1 研究对象 选择2014年3月～2016年5月在重庆三峡中心医院接受治疗的121例浸润性乳腺癌患者作为研究对象。所有患者均经病理穿刺活检证实为乳腺癌。121例浸润性乳腺癌患者年龄36～65岁，平均年龄48.37±7.25岁，绝经前患者85例，绝经后患者36例。纳入标准：①接受手术切除治疗；②有保存完好的乳腺癌组织及癌旁组织；③病理穿刺活检证实为浸润性乳腺癌；④签署了知情同意书。排除标准：①并发其他组织肿瘤；②接受过放、化疗、免疫治疗等；③随访失联；④存在手术禁忌症。收集患者年龄、病理诊断结果、病理类型、TNM分期、组织学分期、雌激素受体(ER)、尿激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)表达情况、月经状况、肿瘤直径及淋巴结转移个数等信息。采用电话随访方式了解患者肿瘤复发、转移及生存预后等情况，每月电话随访一次，随访至2018年12月。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 试剂和仪器 TRIzol Reagent总RNA提取试剂盒，PrimerScript反转录试剂盒(日本TaKaRa公司)，7500 Real-Time PCR System(美国Applied Biosystems公司)，QubitTM4 Fluorometer核酸蛋白荧光定量仪(美国LIFE公司)。

1.3 方法 RT-qPCR法检测浸润性乳腺癌组织中miRNA-206表达：无菌环境下将浸润性乳腺癌组织及癌旁组织分别置于研钵中研磨，取研磨液于离心管中离心15 min，3 500 r/min。取离心后上清液于EP管中，置于-80℃冰箱内保存，待检。取EP管中上清液，将其加入总RNA提取试剂盒中，提取乳腺组织中总RNA。取2 μg总RNA置于反转录试剂盒中，进行反转录反应，合成cDNA。最后，用PCR扩增仪进行扩增，反应条件为94℃ 10 min，40个循环，94℃ 45 s，60℃ 45 s，72℃45 s。以U6作为内参。miRNA-206基因序列F：5’-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3’；R：5’-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3’。U6基因序列F：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，R：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。ΔCt=CtmiR-206-CtU6，用2-ΔΔCt表示浸润性乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织中miRNA-206的相对表达量。

2结果

2.1 miRNA-206在浸润性乳腺癌组织中的表达 浸润性乳腺癌组织中miRNA-206的相对表达量高于癌旁组织[(0.75±0.23) vs (0.12±0.06)]，差异有统计学意义(t=27.761，P<0.001)。

2.2 miRNA-206与浸润性乳腺癌临床病理的关系 见表1。以浸润性乳腺癌组织中miRNA-206相对表达量的中位数(0.77)为界，将121例浸润性乳腺癌组织分为高表达组和低表达组。浸润性乳腺癌组织中miRNA-206相对表达量与年龄、肿瘤直径、组织学分级、ER，PR和HER-2表达情况均无关(P>0.05)，而与TNM分期和淋巴结转移个数有关，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 miRNA-206与浸润性乳腺癌临床病理的关系

2.3 浸润性乳腺癌患者预后情况 见图1。121例浸润性乳腺癌患者1a，2a和3a生存率分别为84.30%(102/121)，75.21%(91/121)和66.94%(81/121)。miRNA-206高表达组1a，2a和3a生存率均低于miRNA-206低表达组[78.18%(43/55)，67.27%(37/55)和56.36%(31/55) vs 89.39%(59/66)，81.82%(54/66)和75.76%(50/66)]。miRNA-206高表达组患者平均生存时间低于低表达组[26.87个月(95%CI：23.80～29.95) vs 31.52个月(95%CI：29.34～33.69)]，差异有统计学意义(χ2=5.570，P=0.018)。

2.4 影响浸润性乳腺癌患者预后的因素分析 见表2。将浸润性乳腺癌患者3a预后(生存=1，死亡=0)作为因变量，将可能与浸润性乳腺癌患者3a预后相关的指标年龄(>50岁=1，≤50岁=0)、TNM分期(Ⅲ+Ⅳ=1，Ⅰ+Ⅱ=0)、组织学分级(Ⅲ+Ⅳ=1，Ⅰ+Ⅱ=0)、肿瘤直径(>5 cm=1，≤5 cm=0)、淋巴结转移(是=1，否=0)、ER(+=1，-=0)、PR(+=1，-=0)、HER-2(+=1，-=0)和miRNA-206(高表达=1，低表达=0)作为自变量纳入Cox单因素分析，结果显示浸润性乳腺癌患者TNM分期、组织学分期、肿瘤直径、淋巴结转移、ER及miRNA-206相对表达量均与预后有关(P<0.05)。将Cox单因素分析有统计学意义的指标纳入Cox多因素分析，结果显示TNM分期、淋巴结转移及miRNA-206相对表达量与浸润性乳腺癌患者预后密切相关(P<0.05)。

表2 影响浸润性乳腺癌患者预后的因素分析

图1 miRNA-206高表达组与低表达组患者3a生存曲线

3讨论乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一，约占所有恶性肿瘤的8%～12%[6]。近年来，乳腺癌的发病率居高不下，尤其是欧美和北美等发达国家[7]。有研究[8]表明，乳腺癌患者的5年生存率偏低，尤其是浸润性乳腺癌。由于浸润性乳腺癌早期症状不明显，多数患者就诊时已处于晚期，错过了最佳治疗时间，因此预后往往不佳[9]。目前，浸润性乳腺癌的发病机制并未完全阐明，多数学者认为浸润性乳腺癌的发病与遗传及癌症干细胞有关[10-11]。mRNA是一类由20～25个核苷酸组成的非编码RNA，多数mRNA已被证实参与肿瘤的发生和发展过程[12-14]。miRNA-206作为抑癌基因，在癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移方面发挥重要作用，同时，也被证实有致癌作用[15]。目前，已有研究证实miRNA-206在胃癌、卵巢癌、黑色素瘤细胞、乳腺癌、肺癌和肝癌等肿瘤组织中异常表达[16]。本次研究分析浸润性乳腺癌组织中miRNA-206的表达情况，探究其与临床病理及预后的关系，以期为浸润性乳腺癌的临床诊治奠定基础。

本研究通过比较浸润性乳腺癌组织及癌旁组织中miRNA-206的相对表达量，发现浸润性乳腺癌组织中miRNA-206的相对表达量高于癌旁组织，因此，笔者推断miRNA-206可能参与浸润性乳腺癌的发生、发展过程。通过分析浸润性乳腺癌患者临床病理资料与miRNA-206的相对表达量的关系，发现浸润性乳腺癌组织中miRNA-206相对表达量与TNM分期和淋巴结转移个数有关。上述结果表明miRNA-206可能通过促进肿瘤细胞侵袭或迁移等促进浸润性乳腺癌发展，进而影响预后，其机制有待进一步研究。笔者通过随访了解到121例浸润性乳腺癌患者1a，2a和3a生存率分别为84.30%，75.21%和66.94%。通过比较miRNA-206高表达组和低表达组患者生存率，发现miRNA-206高表达组患者1a，2a和3a生存率均低于低表达组。比较两组患者平均生存时间，发现miRNA-206高表达组患者平均生存时间低于低表达组患者。进一步通过Cox单因素及多因素回归分析了影响浸润性乳腺癌患者预后的相关因素，结果发现TNM分期、淋巴结转移及miRNA-206相对表达量与浸润性乳腺癌患者预后密切相关。

综上所述，miRNA-206在浸润性乳腺癌中高表达。检测浸润性乳腺癌患者miRNA-206表达水平有助于了解预后。本文仅研究了miRNA-206在浸润性乳腺癌患者中的表达情况，未能纳入其他类型乳腺癌，且为单中心研究，样本量有限，今后将进行大样本、多中心研究，以期探究miRNA-206更多的价值。