贵州不同产地南沙参多糖含量的测定

贵州中医药大学药学院, 贵州 贵阳 550025

南沙参为桔梗科植物轮叶沙参Adenophoratetraphylla或沙参A.stricta的干燥根，具有养阴清肺、祛痰止咳等功效[1]。同时，南沙参多糖具有防辐射、抗衰老和保肝等作用[2-4]。贵州产南沙参以多糖含量进行质量评价至今尚未见报道。本试验以多糖含量为标准对贵州不同产地南沙参药材质量进行评价，以期为贵州南沙参的开发利用提供一定的基础资料。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 紫外分光光度计(UV-5900，上海元析仪器有限公司)；电子天平(XS205，瑞士梅特公司)；回流装置，水浴锅(HH-6，常州澳华仪器有限公司)；数显电热鼓风干燥箱(GZX-9070MBE，上海博讯公司)。

1.2 试药 D-无水葡萄糖(中国食品药品检定研究院，批号110833-201506)；95%乙醇(国药集团化学试剂有限公司，AR，批号：20151222)；苯酚(重庆川东化工有限公司，AR，批号：20130501)；浓硫酸(重庆川东化工有限公司，AR，批号：20160601)。试验用水为超纯水。

1.3 南沙参样品 南沙参生药分别采自于贵州高坡、施秉、普定、织金、花溪、六枝、水城、安顺、黔西和纳雍等不同地区，经贵州中医药大学药学院药用植物与栽培教研室檀龙颜副教授鉴定为轮叶沙参Adenophoratetraphylla。

2 方法与结果

2.1 多糖的提取与精制 将南沙参药材切片后，按冯泽岸等[1]的方法处理得南沙参多糖，得率约14%。

2.2 多糖的定性检查 采用Fehling试验法，参考梁莉等[5]的方法：取2只10 mL试管，分别加入供试品溶液1 mL、Fehling试剂2 mL，1只试管中加入盐酸(2 mol·L-1)0.5 mL，2只试管于沸水浴加热，加酸试管有砖红色沉淀生成，表明多糖酸解后发生反应。

2.3 试液的制备 参考冯泽岸等[1]的方法：标准品母液按0.5 g·L-1浓度制备；系列标准液浓度按0.01、0.02、0,04、0.06、0.08、0.1 g·L-1浓度制备；供试品溶液按0.2 g·L-1浓度制备；苯酚溶液按250 g·L-1浓度制备(现用现配，避光)。

2.4 硫酸-苯酚法测定

2.4.1 吸收波长及显色条件 参考冯泽岸等[1]的方法，测定波长选择490 nm；显色条件设定为苯酚用量1 mL，硫酸用量5 mL，沸水浴，反应10 min。

2.4.2 标准曲线的制备 精密量取各标准溶液各1.0 mL，以纯水为对照，于490 nm测定，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线，回归方程为：y=7.0241x+0.1271，(r=0.9996，n=6)(表1，图1)，线性关系良好。

表1 多糖线性关系的考察

2.4.3 精密度及稳定性试验 精密量取0.06 mg·mL-1供试品溶液1.0 mL，于490 nm测定吸光度，由表2可知平均吸光度为0.435 AU，RSD值为1.86%，显示其精密度良好。将显色后的溶液溶于0，10，40，80，150 min测定吸光度，由表3可知平均吸光度为0.552 AU，RSD值为0.8773%，结果显示其在150 min内稳定。

表2 南沙参多糖含量测定的精密度试验

表3 南沙参总多糖含量测定的稳定性试验

2.4.4 重复性试验 精密量取适量南沙参多糖平行制备成6份溶液，测定吸光度计算多糖含量及RSD值。由表4可知，所测得多糖平均含量为13.95%，RSD值为1.2%，由此可见其重复性较好。

表4 南沙参总多糖含量测定的重复性试验

2.4.5 加样回收率实验 精密称取南沙参多糖约20 mg，共6份，制备溶液，精密吸取各溶液1.5 mL，标准溶液(浓度：0.2 mg·mL-1)1.5 mL，于10 mL容量瓶中定容，摇匀，测定吸光度，用标准曲线计算样品含量，在计算回收率、RSD值。从表5可知平均加样回收率为99.1%，RSD值为0.95%。

表5 加样回收率实验结果

注：回收率%=(测得总量-样品含量)/加样量×100%。

2.4.6 多糖含量测定 精密称取不同产地样品粗多糖共10份，各20.0 mg，配置成浓度为0.06 mg·mL-1的样品溶液，每份样品溶液精密量取3份各1.0 mL，即每组3份，测定吸光度，计算样品中葡萄糖浓度，以葡萄糖计样品中多糖含量=C×D×V/m×100%(C：样品溶液葡萄糖浓度；D：稀释倍数，V：样品溶液体积，m：样品质量)。

表6 南沙参多糖含量测定结果 (n=3)

由表6可知，在所检测的不同10个产地之中，以六枝，水城，施秉地区南沙参多糖含量最低，约为6%～7%。 以纳雍南沙参多糖含量最高，为21.978%。高坡、黔西、普定南沙参多糖含量较为接近，为11%～13.799%。 织金、花溪、安顺南沙参多糖相近为17.839%～19.901%。

3 结论

通过研究发现，六枝、水城、施秉地区所产南沙参药材多糖含量低，表明在该地区的南沙参药材原植物多糖转化率较差；相比之下，纳雍、安顺所产南沙参多糖含量较高，表明其原植物多糖转化率较高；而高坡、黔西、普定、花溪、织金所产南沙参多糖含量居中。因此，以多糖含量为评价指标考察南沙参种植区的选择，此次实验认为纳雍和安顺为南沙参种植的较适宜地区。