凉山地区鸡源大肠杆菌tetA基因的流行情况调查

李凤琴 王 玉

(西昌学院动物科学学院,四川西昌 625014)

大肠埃希氏菌俗称大肠杆菌（Escherichia coli），为环境中的常在菌，但某些特定血清型会给养殖业带来较为严重的损失。而随着抗生素在细菌疾病防控中的使用，特别是广谱抗生素的大剂量、大范围地不合理使用，使得大肠杆菌耐药情况日益突出。

四环素作为广谱抗生素，因其对多种细菌均有很好的抑制效果而被广泛用于大肠杆菌病的防治中，大肠杆菌对四环素的耐药性问题也随之日渐突出，目前研究发现，其耐药机制主要包括四环素外排泵机制、核糖体保护机制、酶灭活和核糖体靶位修饰四种。

1 方法

64株鸡源大肠杆菌（Escherichia coli）菌株由攀西地区动物疫病检测与防控省级重点实验室分离鉴定保存。

用DNA提取试剂盒按说明书步骤和要求提取复苏菌株DNA。

参照基因库中的CP024992.1序列设计引物，上游引物（P1）序列为TTGGCATTCTGCATTCACTCG，下游引物（P2）序列为CCACCCGTTCCACGTTGTT；预计扩增产物长度为344bp。

经优化后，使用下列条件进行各菌株tetA基因的检测。

上下游引物各0.5μl；2×PCR Master Mix 12.5μl；DNA模板2μl；ddH2O 9.5μl。50℃退火30s，共30个循环。

PCR产物在1.5%的琼脂糖凝胶中进行电泳，并观察结果。

2 试验结果

PCR产物经测序比对，确为tetA基因。部分菌株PCR产物电泳结果如图1，tetA基因携带菌株在250～500bp之间出现明亮的单一条带。

图1 部分菌株PCR产物电泳图

经统计，64株大肠杆菌中，有58株为阳性，6株为阴性，tetA耐药基因检出率为90.6%。

3 讨论分析

近年来，大肠杆菌对抗生素耐药性研究主要集中在β-内酰胺类、氨基糖苷类以及喹诺酮类等药物上。但就目前形势来看，大肠杆菌对四环素类抗生素的耐药性也不容忽视。本文的检测结果也显示，凉山地区鸡源大肠杆菌tetA基因流行广泛，虽未进行四环素类抗生素耐药表型的验证，但可推测该地区四环素类抗生素耐药性形势严峻，与部分学者在其他地区的研究结果一致。

针对这一现状，建议该地区做好大肠杆菌病的科学防控，防止耐药基因在不同菌株和菌种之间进行传播。