荧光定量PCR 法与酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒检测及疗效评价中的应用价值探究

陈春妍

相关研究［1］表示， 全世界无症状乙型肝炎病毒携带者数量超过2 个亿， 我国占其中的一半左右， 这其中存在肝损伤的乙型肝炎患者在3000 万左右。乙型肝炎肝损伤是经乙型肝炎病毒感染导致机体出现的多种特殊免疫反应， 使得肝细胞出现病理性免疫损伤。目前， 临床上通常会根据乙型肝炎血清标志物对乙型肝炎病毒感染进行判断， 但酶联免疫吸附法作为一种定性的检测方法难以定量分析乙型肝炎病毒在人体内的含量， 难以对患者乙型肝炎病毒感染复制情况进行有效判断， 因此， 需要探索一种高效的检测方式。本文一共选择2017 年12 月～2018 年6 月在本院治疗的60 例乙型肝炎病毒患者进行研究， 探讨了在乙型肝炎病毒检测中应用荧光定量PCR 法和酶联免疫吸附法的价值， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料

选 择2017 年12 月～2018 年6 月 在 本 院治疗的60 例乙型肝炎病毒患者作为研究对象， 根据检测方法不同分为对照组与观察组， 各30 例。对照组患者中， 男16 例， 女14 例；年龄18～60 岁， 平均年龄(38.15±15.96)岁。观察组患者中， 男17 例， 女13 例；年龄17～60 岁， 平均年龄(37.15±15.26)岁。两组患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)， 具有可比性。

1. 2 方法

对照组应用酶联免疫吸附法进行乙型肝炎病毒检测， 选择北京万泰酶联免疫吸附法配套试剂；由临检质控中心提供质控品。取所有受检者的肘静脉血， 在室温下放置30 min 后， 采用3000 r/min 的速度对其行5 min 离心处理， 将血清分离后， 对乙型肝炎病毒血清标志物分别采用酶联免疫吸附法进行检测。

观察组应用荧光定量PCR 法进行乙型肝炎病毒检测。DNA 提取：同样取所有受检者的肘静脉血， 在室温下放置30 min 后， 采用12000 r/min 的速度对其行10 min 离心处理，将血清分离后， 离心后再取出血清5 ml， 加入50 ml 的DNA提取液混匀， 并置入到100℃环境中10 min 后， 再行离心处理；最后将处理后的标本放置在-20℃环境中存储。PCR 扩增：提取上述样品2 μl 上清液， 并将其加入到PCR 反应管中， 以8000 r/min 的速度离心1 min， 并置入到仪器样品槽中；在93℃中放置2 min、55℃中放置45 s、65℃中放置1 min， 共循环10 次；再93℃中30 s、55℃中45 s， 共循环30 次［2］。

1. 3 观察指标

对比两组各项乙型肝炎病毒检测指标阳性率， 指 标 包 括HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg。严格按照试剂说明书和《全国临床检验操作规程(第4 版)》进行操作。

1. 4 统计学方法

采用SPSS20.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示， 采用t 检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

观察组患者HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg检测阳性率分别为76.7%、86.7%、83.3%、80.0%、83.3%， 均明显高于对照组的50.0%、63.3%、56.7%、53.3%、60.0%， 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组各项乙型肝炎病毒检测指标阳性情况比较［n(%)］

3 讨论

乙型肝炎的主要发病人群为小儿及青壮年， 疾病容易反复发作， 且治愈难度较大， 对家庭甚至整个社会都有非常明显的危害。而乙型肝炎病毒属于正嗜肝DNA 病毒属， 机体受到乙型肝炎病毒感染后不仅会损伤肝细胞， 而且会引起免疫功能紊乱， 继而进一步导致肝细胞受损［3］。乙型肝炎病毒感染属于一个全球性问题， 我国具有较高乙型肝炎感染率，每年有许多患者死于原发性肝细胞癌、肝硬化或者肝衰竭。现阶段， 临床上通常会采用乙型肝炎病毒免疫标志物对乙型肝炎感染进行诊断， 以此来对乙型肝炎病毒的免疫反应强度进行有效反映。酶联免疫吸附法属于一种传统的检测方式，操作简单， 在大批乙型肝炎病毒感染样本检测中适用， 可以将其作为依据， 用来判定患者是否感染乙型肝炎病毒以及感染的具体阶段［4，5］。但是采用该检测方式进行测定的过程中，也有诸多局限性存在， 检测准确性会受到反应温度、试剂盒质量、外源性物质以及内源性物质等诸多因素的影响， 难以准确反映患者体内是否确实存在病毒感染。

而荧光定量PCR 法检测是当前临床较为常用的一种基因检验技术， 此种技术主要是将荧光标记探针加入到反应体系当中， 并在检验时用Taq 酶发挥其外切核酸酶的活性进而释放荧光信号， 同时， 在其扩增的过程中， 模板每进行一次复制便释放一个荧光信号， 并根据释放的荧光信号强弱来定量模板［6］。荧光定量PCR 法检测对于提高胸腹水、尿液等样品中的分枝杆菌检出率具有较高的应用价值；荧光定量PCR 法检测属于封闭性操作， 能够大大减少样品污染情况， 进而提升检验的质量；荧光定量PCR 法检测技术能够通过荧光信号来定量扩增产物。此次研究中显示， 观察组患者HBcAb、HBeAb、HBeAg、HBsAb、HBsAg 检测阳性率分别为76.7%、86.7%、83.3%、80.0%、83.3%， 均明显高于对照组的50.0%、63.3%、56.7%、53.3%、60.0%， 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述， 在乙型肝炎病毒检测中应用荧光定量PCR 法和酶联免疫吸附法时， 荧光定量PCR 法检测的效果较好， 若用于乙型肝炎病毒感染者传染性大小的判断和抗病毒药物临床疗效的评价， 可获得较好的效果。