大连地区猪细小病毒病精液带毒情况分析

赵景利/辽宁省大连市长海县动物卫生监督所

猪细小病毒病又称猪繁殖障碍病，临床症状主要以怀孕母猪发生流产、死胎、木乃伊胎为主，对生猪养殖造成重大危害。大连地区作为生猪养殖的重点区域，养殖数量大，种类多，虽然进行了多年的疫苗免疫，但猪细小病毒病对大连地区养猪业的威胁依旧存在，而带毒精液则是猪细小病毒传播的重要途径。

根据猪细小病毒精液传播的特点，如何在传播途径上对猪细小病毒进行控制，就成为猪细小病毒防控的另一种思路。基于这一观点，大连市动物疫病预防控制中心对大连区域内21家种猪场进行了精液采集，对采集的精液进行了猪细小病毒的病原检测，现将检测情况报告如下。

一、材料与方法

1.精液样品。从大连地区21家种猪场采集了精液样品750份，其中原精液450份，经1：5稀释16～18℃保存不超过3d的精液300份，均-70℃保存。

2.试剂。猪细小病毒核酸（PPV）检测试剂盒（批号：20171114）：中山大学达安基因股份有限公司；核酸提取试剂盒（产品批号20180503）：上海拜诺生物科技有限公司。

3.主要仪器。荧光定量PCR仪（型号QuantStudio5）：美国Thermo Fisher科技公司；高速冷冻离心机（型号3K-15）：德国SIGMA公司；核酸提取仪（型号King Fisher Flex）：美国Thermo公司。

4.试验过程

1）将采集的精液样品放置在-70℃和37℃的环境中反复冻融3次，用高速冷冻离心机以13000r/min离心3min，取上清液。

2）按核酸提取盒中的操作说明进行核酸提取。取50uL上清液加入到已经配好试剂的sample板中，按顺序放入到核酸提取仪中，提取完成后，取出elution板。板内液体即为核酸。

表1 检测结果

3）将提取的核酸按PPV核酸检测试剂盒进行荧光PCR检测。

4）当阴性质控品FAM检测通道无扩增曲线，且阳性质控品FAM检测通道有扩增曲线，同时Ct值≤32时，实验结果成立。当检测样品有典型扩增曲线，并且Ct值≤38时，可判为样品PPV核酸阳性，如样品Ct值＞38或无Ct值时，可判为样品PPV核酸阴性。

二、结果与分析

1.结果。对采集的750份精液进行检测其结果为：在450份原始精液中，检出阳性样品13份，阳性率为2.9%；在300份稀释精液中，没有检出阳性样品（见表1）。

2.分析。通过对采集的750份精液进行免疫情况调查，了解到这21家种猪场猪细小病毒病免疫使用的都是猪细小病毒灭活苗，所以排除了因为疫苗免疫而造成的假阳性结果。经分析出现这一结果的原因可能有以下几点：1）在原精中的阳性检出率较低，而在稀释后的精液中没有检出阳性样品。2）由于对猪细小病毒病的免疫较为重视，日常疫苗接种及时有效，免疫效果较好。3）在稀释精液中，由于稀释液中含有抑制或杀灭病原微生物的成分，所以在稀释精液中，没有检出猪细小病毒病原阳性样品。

三、讨论与小结

大连地区长期以来对猪细小病毒病的防控采取以免疫为主，结合实验监测、流行病学调查等措施，从而防止了猪细小病毒病大规模的暴发和流行。可是由于猪细小病毒病的流行和传播特点，还是难以从根本上消除猪细小病毒病，但是随着近几年大连地区对养殖户的宣传教育，接种疫苗、自繁自养的理念被广大养殖户采纳接受，通过实验可知，在种猪精液中携带猪细小病毒病的精液数量较少，猪细小病毒病通过精液传播的风险性大大降低。