猪O型口蹄疫灭活疫苗免疫试验

朱克锋

湖北省武穴市刊江办事处畜牧兽医技术服务中心，湖北武穴435400

为检验武穴市猪O 型口蹄疫灭活疫苗免疫效果，探索更合理以及更符合生产实际的猪口蹄疫免疫程序，更好的控制和预防生猪O 型口蹄疫疫情，笔者开展了猪O 型口蹄疫疫苗免疫试验，以期使猪O 型口蹄疫灭活疫苗产生更高和持续时间更长的免疫保护效果。

1 材料与方法

1.1 试验场地

武穴市魏垸养殖小区位于武穴市刊江办事处魏垸村，远离人群密集区，自然防疫条件好，地理位置优越。该场为自繁自养猪场，现有存栏母猪160头，存栏生猪1 600 头，每月新增仔猪250～300 头，年可出栏商品猪3 000 头；符合试验所需样品数量要求。母猪每年免疫4 次0 型口蹄疫疫苗（每3 个月免疫1 次）。近几年来，疫情稳定，没有发生重大动物疫病。

1.2 试验疫苗

猪口蹄疫O 型灭活疫苗（O/Mya98/XJ/2010 株+O/GX/09-7 株），新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，生产批号为201807。

1.3 试验方法

1）试验动物。试验前随机选取20 头32～68日龄未免疫猪O 型口蹄疫疫苗的健康仔猪，采血检测其母源抗体，确定该试验场口蹄疫母源抗体消失期为50日龄左右，遂选取50+日龄未免疫猪O 型口蹄疫疫苗健康仔猪120 头，随机分为A、B、C、D 4组，每组30 头。

2）免疫方法：A、C 组按1 头份（2 mL）进行免疫；B、D 组按2 头份(4 mL)进行免疫；一免4 周后C组按1 头份进行二次免疫；D 组按2 头份进行二次免疫，A、B 组不免疫；疫苗注射由笔者所在单位人员独立完成。各组用耳牌做好标记，分栏饲养。A 组，每头肌肉注射2 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗。B 组，每头肌肉注射4 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗。C 组，每头肌肉注射2 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗；30 d 后肌肉注射2 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗。D 组，每头肌肉注射4 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗；30 d 后日肌肉注射4 mL 猪O 型口蹄疫灭活苗。

2 结果与分析

2.1 猪O 型口蹄疫灭活疫苗免疫抗体检测

1）采血。一次性采血器前腔静脉采血，每份不少于3 mL，静置2 h 后3 500 r/min 离心6 min，分离血清。A、B 组分别于一免后28、58 d 各采血1次，分离血清做口蹄疫免疫抗体检测试验。C、D 组分别于一免后28 d、二免后28、58 d，各采血1 次，分离血清做口蹄疫免疫抗体检测试验。

2）抗体检测。按照口蹄疫O 型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书操作，结果判定：抗体效价≥1∶64，判为免疫合格（99%以上保护）。

3）抗体检测结果。由表1可知，规模化猪场母猪经年多次免疫后，仔猪通过母乳获得的抗体水平很高；本试验按初始设计方案为30日龄免疫注射，但在筛选试验猪时发现，5 周龄仔猪抗体滴度仍能达到1∶256～1∶512，7 周龄后衰减到1∶64 以下,9周龄时全部转阴。

2.2 免疫效果评估

由表2可以看出，A、B 组免疫后28、58 d 的免疫抗体合格率分别为0.0%、0.0%、0.0%、6.6%，免疫抗体合格率很低，说明一次免疫的效果极不理想。

由表3可以看出,1 头份二次免疫后28、58 d，免疫抗体合格率分别为6.6%、10%，2 头份二次免疫后28、58 d，免疫抗体合格率分别为13.3%、43.3%，说明口蹄疫苗2 头份二次免疫效果比较明显。

免疫28 d 后，1 头份1 次免疫组（A 组）、2 头份1 次免疫组（B 组）免疫合格率均为0.0%；1 头份2次免疫组（C 组）免疫合格率为6.6%；2 头份2 次免疫组（D 组）免疫合格率为13.3%。免疫58 d 后，1头份1 次免疫组（A 组）免疫合格率仍为0.0%、2 头份1 次免疫组（B 组）免疫合格率增长为6.6%；1 头份2 次免疫组（C 组）免疫合格率增长为10%；2 头份2 次免疫组（D 组）免疫合格率增长为43.3%。

本试验免疫抗体检出率特别低，甚至2 头份2次免疫组（D 组）的免疫合格率也只有43.3%，是否试验猪受到蓝耳病、圆环病毒、饲料霉菌毒素污染等免疫抑制类疾病的影响，因试验设计的原因没有得到验证。另外，检测试剂盒的准确性也值得进一步校验。

表1 免疫前O 型口蹄疫母源抗体情况

表2 一次免疫组O 型口蹄疫抗体合格率

表3 二次免疫组O 型口蹄疫抗体合格率

2.3 试验期猪发病死亡情况

最后1 次对120 头试验猪全部进行前腔采血，10 d 后在全栋276 头猪注射中牧成都猪瘟细胞苗（含120 头试验猪），每头猪注射4 头份，2 d 后试验猪开始出现咳嗽、减食，其他同时免疫猪瘟疫苗猪除偶见咳嗽外无其他异常。自始至终发病猪只见于试验猪，同场同栋其他猪只，未见发病。

发病率约60%（70 头左右），主要集中在A、B 2组（日龄较小），C、D 组零星发生。病猪体温40.5～41.5 ℃，食欲废绝但未见明显消瘦、被毛粗乱、扎堆；耳尖发绀、皮肤发红、有清涕、眼睑发炎、咳嗽、便秘、个别猪呕吐；病猪中约20%严重喘气。

剖检情况：喉头、会厌软骨未见出血，气管内有白色泡沫状分泌物；肺门淋巴结出血、肿胀，肺部出血、轻微水肿、间质增宽，肺尖页、膈页、心叶均有对称型虾肉样变；心衰、胃底轻度弥散性出血；肠系膜淋巴结串珠状肿胀；其他脏器未见明显变化

病初诊断为支原体肺炎混感猪流感，饲料投喂泰万菌素（10%预混剂）1 kg+氟苯尼考（10%预混剂）800 g/t，不采食猪肌注氟苯尼考（20%）注射液；以上方案治疗3 d 不见好转，发病数量仍有增加，并出现死亡。共计死亡52 头。

结合流行病学、临床、剖检症状、治疗及死亡情况，诊断为环境和免疫应激诱发高致病性蓝耳病混感支原体肺炎。

3 讨 论

抗体检测结果较差，但无口蹄疫病例发生。疫苗储运、使用及注射操作都是试验人员亲自操作的，非常规范，免疫抗体监测部分样品作重复检测，并无不同。整个试验期间没有口蹄疫疑似病例发生。抗体检出率低的原因，可能是试剂的抗原与新疆天康双毒株苗的抗原相差较大，或者是试剂盒本身的可靠性问题。仔猪首次免疫口蹄疫疫苗时应考虑母源抗体干扰影响，建议规模化猪场定期监测母源抗体水平，适当调整首次免疫时间。免疫2 头份比免疫1 头份效果好。2 头份免疫组（B、D 组）58 d抗体合格率的增长，说明免疫抗原量增加后对猪免疫系统刺激的时间更长，对后期抗体水平的提升有一定意义。免疫2 次比免疫1 次效果好。2 次免疫组（C、D 组）免疫合格率和抗体滴度都优于1 次免疫组，说明2 次免疫能更好地诱导、刺激免疫系统产生IgG 抗体，产生更高和持续时间更长的免疫保护效果。

对猪O 型口蹄疫疫苗采购质量标准应予以提高，建议省中心每年对猪O 型口蹄疫疫苗的有效抗原含量进行检测。根据试验结果，建议在实际免疫工作中猪O 型口蹄疫疫苗实施2 次免疫。