新型肿瘤标志物TSGF和Hsp90α与非小细胞肺癌的临床相关性分析

郑 爽 金 毅 王 振

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是一种低分化类型的肺癌，其主要特点是增殖速度快，恶性程度高，病变转移早，生存率低，且晚期病变预后极差。近年来，NSCLC的发生率和病死率均逐年增加[1]。随着对NSCLC研究的不断深入，人们开始从不同的领域对NSCLC的早期诊疗进行深入的探索，其中对新型肿瘤标志物的研究也已经展开，并取得了初步的研究成果。

热休克蛋白(heat shock proteins，Hsps)是机体在应激条件下合成的一类蛋白质分子。Hsp90是HSP家族的一员，其在细胞中含量丰富。有研究证实，Hsp90可以通过与细胞增殖和凋亡有关的多个受体蛋白来影响肿瘤的发生、发展过程[2～4]。研究表明，Hsp90 抑制剂对晚期NSCLC患者具有一定的临床疗效[5]。因而，Hsp90α与NSCLC的关系日益受到人们重视。肿瘤特异性生长因子(tumor specific growth factor，TSGF)是几种得到国际公认肿瘤标志物之一，其作用是促进肿瘤血管的增生，对恶性肿瘤的血管浸润起到重要作用[6]。TSGF也是目前使用较多的非器官特异性肿瘤标志物。但目前国内对其研究成果十分有限。虽然TSGF和Hsp90α的单项检测都对肺癌都有一定的诊断价值, 但是，其敏感度和准确性不佳。本研究旨在检测NSCLC患者血清和病变组织中TSGF和Hsp90α的表达水平，探讨二者联合检测的意义及其与NSCLC的病理变化和NSCLC 临床预后的相关性关系。

对象与方法

1.研究对象:收集2013年6月～2017年6月期间经笔者医院病理科确诊的120例NSCLC 患者的血液样本和切除的肺部病变标本，并选择50例同期肺部良性病变患者的血液样本以及30例健康体检者的血液样本。采集样本前，所有患者均未接受其他方案的治疗。

2.酶联免疫吸附法(ELISA)：所有患者空腹，采集静脉血3ml，离心后，留取出上清液，并将其保存在-20°C的冰箱中备用。采用贝克曼DXC800全自动生化分析仪对上述血清进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测。根据ELISA 试剂盒(TSGF试剂盒由瑞典CanAg公司提供，Hsp90α试剂盒由厦门慧嘉生物科技有限公司提供)的使用说明书所要求的步骤，测定受试者血清样品中TSGF和Hsp90α的水平。所有操作均在严格质控下完成。

3.免疫组化染色:肺部病变标本以10%的中性甲醛溶液固定，常规进行石蜡包埋，连续切片；二甲苯脱蜡、水化、抗原修复后，进行免疫组化染色。以细胞质或细胞膜出现黄至棕褐色颗粒显色为TSGF和Hsp90α阳性[7]。

4.病例随访：通过电话、微信、QQ留言等形式对所有患者进行随访，并将患者的所有资料进行记录和备案。患者的生存期是指从手术之日到随访截止之日(2017年6月30日)或患者死亡之日为止。

5.统计学方法：采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行统计分析，计数资料作χ2检验，采用Kaplan-Meier生存曲线法及Log-rank检验记录生存率,以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.各组受试者TSGF和Hsp90α的水平:在NSCLC 患者中，TSGF和Hsp90α的测定值分别为736.38±114.03和241.50±92.14；肺部良性病变的测定值分别为105.22±13.56和75.35±13.10；健康体检者的测定值分别为24.14±10.13和49.35±12.11。与健康体检者和肺部良性病变患者比较，NSCLC 患者的TSGF和Hsp90α水平均显著升高(P<0.05)，详见表1。

表1 各组受试者TSGF和Hsp90α的水平

与健康体检者比较，*P<0.05，**P<0.01；与肺部良性病变患者比较，#P<0.05，##P<0.01

2.NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平与病理特征关系:TSGF的水平与NSCLC 的临床分期和淋巴结(LN)转移密切相关(P<0.05)；Hsp90α 的水平与所观察的指标无相关性(P>0.05)，详见表2。

3.NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平与生存期的关系:生存曲线分析结果显示,TSGF阳性的患者较阴性的患者生存时间更短(P<0.01,图1)，Hsp90α阳性的患者也较阴性的患者生存时间短(P<0.05,图2)，提示TSGF和Hsp90α水平与NSCLC患者的术后生存期有关。

表2 NSCLC 患者TSGF和Hsp90α水平与病理特征关系

图1 TSGF阳性患者的表达水平与患者生存曲线

图2 Hsp90α阳性患者的表达水平与患者生存曲线

4.在NSCLC组织中TSGF和Hsp90α水平的相关性:在120例NSCLC中， TSGF阳性的NSCLC 有98例，其中Hsp90α水平阳性57例，Hsp90α水平阴性41例；TSGF阴性的NSCLC 有22 例，其中Hsp90α水平阳性9例，Hsp90α水平阴性13 例(χ2=9.1432，P<0.05，r=0.272)。TSGF水平与Hsp90α水平呈正相关(P<0.05)。

讨 论

肺癌是目前世界范围内常见的恶性肿瘤之一。调查显示，2002年全球男性肺癌的发生率和病死率分别为35.5/10万和21.2/10万，占恶性肿瘤发病和死亡构成比分别为16.6%和22.3%，对患者的生命健康造成威胁[8]。其中，非小细胞肺癌的发生率约占肺癌总人数的80%[9]。HSP蛋白通常以分子伴侣的形式参与相关蛋白的折叠、装配、细胞内运输及蛋白质降解等的过程。有研究证实，在应激环境下，热休克蛋白可以迅速升高，以维持细胞的稳定性，进而促进细胞的增殖[10～13]。随着分子生物学的发展，人们对HSP的结构和功能有了更深入的了解，HSP与肿瘤的关系也得到了越来越多的研究人员的研究和探讨。近年来，诸多研究显示，Hsp90与肺癌的发生、发展过程息息相关[14～16]。另一项大样本病例研究显示，肺癌患者的血浆Hsp90水平显著高于健康者，且该水平会随着疾病的进展进一步升高[17]。因此，笔者推测Hsp90抑制剂可在治疗非小细胞肺癌中显示出高效的临床治疗效果[18]。此外，有研究证实，TSGF是数种国际公认的与恶性肿瘤生长相关的糖类物质和代谢物(脂蛋白、酶、氨基酸)的统称，可以作用于恶性肿瘤的血管，对肿瘤周边毛细血管的增生产生一定的影响，进而会对肿瘤的生长起作用，在对肿瘤的诊断和治疗过程中具有较高的指导价值[19，20]。

本研究采用ELISA法对非小细胞肺癌患者的血清和肿瘤组织中TSGF和Hsp90α 的水平进行检测。结果显示，非小细胞肺癌组织中TSGF的水平与NSCLC 的临床分期、淋巴结转移和术后生存期具有相关性(P<0.05)。且TSGF的水平与NSCLC 的临床分期、淋巴结转移和术后生存期具有相关性(P<0.05)。更为重要的是，笔者还发现TSGF和Hsp90α的水平呈正相关(P<0.05)，提示在非小细胞肺癌的早期诊疗过程中，进行血清TSGF和Hsp90α的联合检测有望对疾病的早期确诊提供一项更加经济、便利且可靠的检查手段。