不同炮制方法对党参化学成分及产品质量的影响

陈 皓, 王 瑞, 董敬远, 邢 浩, 贾明璐, 陈雪平

(漯河市中心医院,河南 漯河462000)

党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.为临床常用补益中药材,性味甘、平,主归肺脾二经,具有补中益气、滋脾养肺等效果,临床多用于脾胃虚弱、体倦无力、口渴少食、中气不足、润肺化痰、解毒平肝等［1-2］。关于党参的历史记载较多,《纲目拾遗》 称其具有益肺气、治肺虚、补血等作用, 《本草从新》 中提到其“补中益气,和脾胃,除烦渴”［3］。近年来研究显示,党参在提高机体免疫力、增强机体造血功能、调节机体肠胃蠕动、改善血液循环等方面具有良好效果,而且含有多种人体必需的氨基酸及微量元素,可作为人参理想的替代品［4］,2010 年版《中国药典》 中共收录党参、素花党参、川党参3 个品种,称其“补中益气,健脾益肺,用于脾肺虚弱,气短心悸,食少便溏,虚喘咳嗽,内热消渴”。中药炮制是中药材应用于临床治疗前或制备成各种剂型前需要进行的加工过程,有助于降低甚至消除药物的烈性、毒性和不良反应,增强药物作用,提高临床疗效,同时除去药材中的杂质和非药用部分,也有助于纯净药材、保证质量及用量准确［5］。文献中记载的党参炮制方法较多,本实验旨在研究不同炮制方法对党参化学成分及药材质量的影响,以期规范该药材炮制工艺,提高其安全性及有效性,发挥医用价值。

1 材料

Agilent 1200 高效液相色谱仪(美国Agilent 公司)；CQ-250 超声波清洗器(上海跃进医用光学器械厂)；Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm,昆山市超声仪器有限公司)；RE-52 旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂)；MP17C-KE 微波炉(美的公司)。

党参由浙江省永康医药公司提供 (批号20120909),经江西中医药大学药学系鉴定教研室专家鉴定为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根。党参炔苷对照品(批号136085375,江西本草天工科技有限公司)。冰醋酸、乙腈、乙醇等试剂为色谱纯(美国Sigma公司)。

2 方法与结果

2.1 炮制工艺

2.1.1 米制 将米置于锅内,用文火加热,喷洒纯净水少许,以米粘贴于锅上为宜,待烟冒出时即加入切好的党参段,翻炒至微黄色后取出放凉,将米粒去除。每100 kg 党参使用20 kg 米。

2.1.2 酒制 将党参置于米酒中拌匀,置于热锅中炒制,以近乎干燥为宜,取出放凉。每100 kg党参使用1.5 kg 米酒。

2.1.3 土制 取灶心土置于热锅内炒制,以将土炒松为宜,后加入党参片炒制至有香气逸出,取出将土筛去后放凉。每100 kg 党参使用30 kg 灶心土。

2.1.4 蜜制 取蜜用开水稀释后与党参片一同加入锅中拌匀,文火加热,炒制棕黄色且不粘手为宜,取出放凉。每100 kg 党参使用20 kg 蜜。

2.1.5 炒制 将党参片或党参段置于锅内,文火炒制,以党参变为棕黄色、表面略有焦斑为宜,取出放凉［6］。

2.2 观察指标 不同炮制方法对党参中多糖、党参炔苷含有量及产品质量的影响。

2.3 检测方法

2.3.1 党参炔苷含有量

2.3.1.1 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相乙腈-1%冰醋酸；体积流量1 mL/min；柱温25 ℃；检测波长267 nm。

2.3.1.2 对照品溶液制备 准确称量10 mg 干燥至恒定质量的党参炔苷对照品,与流动相一同加入10 mL 量瓶中,定容,即得(1 mg/mL),待用。

2.3.1.3 样品处理 将党参磨成细粉,准确称取5.000 g,加入50 mL 50%酒精,于60 ℃水浴锅中水浴处理30 min 后微波炉加热5 min,滤过,滤液减压回流至干,加入10 mL 量瓶中,流动相定容后备用。

2.3.1.4 线性关系考察 依次取配制好的对照品溶 液 1.0、 5.0、 10.0、 20.0、 25.0 μL, 在“2.3.1.1” 项条件下进样。 以峰面积为纵坐标(Y),样品量为横坐标(X) 进行回归,得方程Y＝320.22X+9.365 (r ＝ 0.999 8), 在 0.02 ～0.50 mg/mL范围内线性关系良好。

2.3.1.5 精密度试验 将对照品溶液连续3 d 在“2.3.1.1” 项条件下进样6 次,测得党参炔苷峰面积RSD 0.03%,表明仪器精密度良好。

2.3.1.6 稳定性试验 将党参制成供试品溶液,每隔1 h 在“2.3.1.1” 项条件下进样,连续6 次,测得党参炔苷峰面积RSD 0.08%,表明供试品溶液稳定性良好。

2.3.1.7 样品含有量测定 对不同炮制方法下党参进行分析,计算党参炔苷含有量［7］。

2.3.2 多糖含有量

2.3.2.1 线性关系考察 准确称取葡萄糖对照品12.1 mg 后加水溶解,并于100 mL 量瓶中定容至0.121 mg/mL, 吸 取 0、 0.2、 0.4、 0.5、 0.6、0.7、0.75 mL 于量筒中,蒸馏水定容至1 mL,加入2.0 mL 5%苯酚溶液后摇匀,滴加5.5 mL 浓硫酸,摇匀后置于60 ℃水浴锅内30 min,在490 nm波长处测定吸光度。以溶液质量浓度为横坐标(X),吸光度为纵坐标(A) 进行回归,得方程为A ＝0.008 6X+0.014 5(r ＝0.999 1),在0.000 ～0.011 mg/mL 范围内线性关系良好。

2.3.2.2 多糖含有量测定 准确称取干燥至恒定质量的样品23.5 mg,加水溶解,置于100 mL 量瓶中定容,吸取0.2 mL,按“2.3.2.1” 项下方法测定吸光度,根据标准曲线得到多糖质量浓度,计算含有量［8］。

2.4 检测结果

2.4.1 对党参质量、含水量及党参炔苷含有量的影响 含水量测定选择甲苯法,精确称取不同炮制方法所得党参50.0 g 进行蒸馏,测定其含水量。结果发现,不同炮制方法对党参含水量及党参炔苷含有量的影响不同,炮制后党参质量及含水量依次为蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制,党参炔苷含有量依次为酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制,见表1。

2.4.2 对党参中多糖含有量的影响 不同炮制方法对党参中多糖含有量具有较大影响,依次为酒制＞蜜制＞炒制＞土制＞米制。与生品比较,酒制和蜜制方式可增加该成分含有量,而炒制、土制、米制可导致其出现不同程度的降低,见表2。

3 讨论

党参炔苷作为党参药理作用最关键的化合物之一,是炮制过程中标志性检测成分,通常以其作为衡量不同产地党参质量的重要指标［9］,动物实验已证实党参炔苷对机体胃黏膜的保护具有重要作用［10］。不同产地党参中党参炔苷含有量具有较大差异,黄健等［11］测定山西五台山党参炔苷含有量为10.62%, 辽宁党参为2.249%, 甘肃党参为2.489%；时军等［12］对来自内蒙古、云南、贵州等地的9 种党参检测发现,党参炔苷含有量介于0.187～1.174 mg/g 之间,其中云南福贡产者最低,甘肃岷县产者最高,均表明其受产地、种植环境等的影响较大。

表1 不同炮制方法对党参质量、含水量及党参炔苷含有量的影响Tab.1 Effects of different processing methods on C.pilosula quality，water content and lobetyolin content

表2 不同炮制方法对多糖含有量的影响Tab.2 Effects of different processing methods on the content of polysaccharides

研究表明,党参在增强机体造血功能、改善机体肠胃运动、抗缺氧、抗血栓、改善血脂、提高机体免疫力、改善机体血液系统循环水平等方面均具有较为理想的临床效果［13］。实验发现,向戊四氮、硝酸士的宁处理后的小鼠腹腔注射一定剂量的党参后,小鼠自由活动次数明显减少,惊厥及死亡的时间显著延长、例数明显降低［14］；Fleischer 等［15-16］报道,党参水溶性、脂溶性提取所得产物均对家兔中枢神经系统有一定的抑制作用,此外,党参总碱还能有效缓解东莨菪碱对家兔记忆功能的损伤作用,对因东莨菪碱引起的家兔乙酰胆碱浓度下降具有抵抗作用。邱亚磊等［17］实验结果表明,党参对提高家兔机体血红蛋白水平及红细胞数量具有积极意义,并且未发现溶血症状；窦霞等［18］发现,给予大鼠一定剂量的党参后机体内血红蛋白水平明显升高,与注射生理盐水组具有明显差异,进一步研究还发现党参对大鼠血红蛋白水平的调节作用与其对脾脏的刺激效果有关；目前临床常将丹参与党参联合应用于心绞痛及冠心病患者的治疗,对改善患者机体微循环、抑制机体血小板聚集及红细胞硬化、避免机体血栓形成等均具有积极意义［19］。

党参的水提醇沉溶液对大鼠实验性胃溃疡具有抵抗作用,对应激性、幽门结扎、慢性乙醇性胃溃疡具有较好的预防及治疗效果,且给药量在10.0～80.0 g/kg 时具有明显的量效关系［20］。党参多糖对提高大鼠胃黏膜内PGE2a 水平具有积极意义,这也表明党参能增强大鼠胃黏膜的屏障作用,提高胃黏膜细胞保护效果,抵抗大鼠胃黏膜损伤［21］。

研究表明,党参配伍灵芝、黄芪对增强机体网状内皮系统功能的效果超越卡介苗,机体网状内皮系统吞噬功能增强可有效提高机体抗病能力,这与中医治疗“气虚” 相吻合,从而达到“扶正” 效果［22］。邹利等［23］通过体外培养人体淋巴细胞发现,高浓度党参可促进人体淋巴细胞的有丝分裂,低浓度时则表现为抑制作用,表明它对淋巴细胞有丝分裂过程的影响。

不同炮制方法可导致中药成分发生不同的质和量变化,同时改变具有生理活性及临床治疗作用的成分,从而导致其临床效果的差异,炮制加工的方式、时间、环境温湿度、辅料的选择及用量等均会对中药材有效成分的含有量产生影响［24-25］。中药炮制的目的主要包括： (1) 通过合理的炮制方法促进其有效成分的溶出, 增强临床治疗效果；(2) 通过炮制加工降低中药材毒性,以达到入药要求； (3) 改变中药材成分,突出或加强中药材某一方面的作用； (4) 通过炮制加工降低中药材储存难度,延长储存时间。中药材炮制加工是以中医药理论为依据,并结合药材本身性质及临床辨证施治要求而施行的一项不可或缺的制药技术,只有在继承传统炮制技术及理论的基础上结合现代医学制药技术进行整理总结,制定科学规范的炮制质量检测标准,探索并改进炮制工艺,才能有效推动相关技术的发展,提高临床用药的安全性及治疗的有效性［26-28］。

研究发现,不同炮制方法对党参质量、含水量、党参炔苷含有量及多糖含有量等均具有不同程度的影响,炮制后党参质量出现不同程度的降低,含水量变化也较为明显,依次为蜜制＞米制＞酒制＞土制＞炒制；党参炔苷作为党参重要成分之一,含有量越高则表明党参质量越好,治疗效果越佳,经炮制后其提取率明显升高,依次为酒制＞米制＞炒制＞蜜制＞土制。此外,酒炙及蜜制加工后党参中多糖含有量较生品明显升高,其原因可能与酒精可增加该成分溶解度有关；蜜制一方面可增加中药材中多糖含有量,另一方面也不排除蜜作为辅料对该成分含有量的影响,这与高欢等［29］观点一致。

结合现有文献可知,蜜制党参可增强中药材补中益气的效果；米制党参焦香味较为浓厚,有助于增强中药材益气健脾的功效；土制党参和胃健脾效果明显。因此,临床用药时不仅要考虑到不同炮制方法对党参化学成分的影响,还应关注其疗效,根据治疗目的选择合适的炮制品。