五种杀菌剂防治菩提树黑痣病试验

黄宇豪，韦继光，罗基同，杨秀好，吴耀军，罗辑

(1.广西大学农学院，农业环境与农产品安全广西重点实验室培育基地，植物科学国家级实验教学示范中心，广西 南宁 530004；2.广西壮族自治区林业有害生物防治检疫站，广西 南宁 530028；3.广西壮族自治区林业科学研究院，广西 南宁 530002)

菩提树Ficus religiosa，又名菩提榕，是桑科Moraceae 榕属Ficus的大乔木植物，一般高达15～25 m，叶片呈三角状卵形，具有生长速度较快，树龄长，树形优美等特点，具有一定的观赏价值。菩提树是广西、广东、云南等地的行道树，也是公园、寺庙等地的观赏树种。菩提树黑痣病[Phyllachora repens(Corda)Sacc.][1]在广西凭祥市、南宁市、东兴市发病较严重，叶片产生黑色的凸起斑块，影响菩提树的光合作用，造成叶片组织坏死并大量落叶，严重影响其观赏价值、经济效益和引种工作。目前菩提树黑痣病的相关研究较为缺乏，尚未有防治药剂筛选的相关报道。笔者测定5 种杀菌剂对菩提树黑痣病病原菌的子囊孢子萌发的抑制作用，并进行田间防治试验，以期筛选出适于田间防治的药剂。

1 材料与方法

1.1 试验材料 防治地点为广西凭祥市的绿化树种苗圃，该苗圃菩提树面积18 hm2。地理坐标为:E 106°45′15″，N 22°6′38″，属热带季风气候。土壤状况良好，土壤质地属于黏质土类，有机质含量达平均水平，有效养分较为协调，土壤整体偏酸性。

试验用杀菌剂为:80% 代森锰锌可湿性粉剂(WP)，河北双吉化工有限公司；50%多菌灵WP，江苏蓝丰生物化工股份有限公司；70% 甲基硫菌灵WP，日本日友商社香港有限公司；45%咪鲜胺水乳剂(EW)，山东澳得利化工有限公司；等量式波尔多液(自配)。

1.2 试验方法

1.2.1 子囊孢子液制备 将叶片上的黑痣病病斑刮下经研磨处理后放入离心管，加入3 mL 无菌水后，涡旋震荡3 min，用4 000 r/min 的转速进行离心处理 3 min，过滤多余杂质，取上清液，再用8 000 r/min的转速离心4 min，使孢子沉淀，用移液枪吸走多余上清液，保留1 mL 液体于离心管中，得到纯净子囊孢子液备用。

1.2.2 杀菌剂对子囊孢子萌发的抑制作用测定将处理好的子囊孢子液取出，调节子囊孢子悬浮液浓度至10 ×10 倍显微镜下每视野有100～150 个子囊孢子。将孢子悬浮液与配置好浓度的药剂按1∶1的体积混匀，使药剂浓度分别为0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 μg/mL，以不加药剂的处理作为空白对照，每个处理吸取20 μL 液体滴在干净的凹玻片上，于25 ℃培养24 h 观察子囊孢子的萌发情况，子囊孢子的芽管长于子囊孢子的直径视为萌发。每个处理3个重复，每个重复计数200 个子囊孢子的萌发情况。根据下列公式计算子囊孢子的萌发率及抑制率。

孢子萌发率(%) ＝萌发的孢子数/孢子总数×100

孢子萌发抑制率(%)＝(对照孢子萌发数-药剂处理后孢子萌发数)/对照孢子萌发数×100

1.2.3 杀菌剂对子囊孢子萌发的室内毒力测定室内毒力测定采用孢子萌发抑制法。先通过预试验将各个药剂浓度的抑制率控制在10%～90%后，用无菌水把杀菌剂配制成有效成分含量为50 mg/L的母液，再用无菌水分别稀释成5 个预试验范围内不同的浓度梯度 0.01，0.05，0.1，0.2，0.35 μg/mL的药液。分别将0.1 mL 药剂与4.9 mL 孢子液混合于试管中，以等量无菌水与孢子液混匀作为空白对照组，保证在10 ×10 倍显微镜每个视野下有150～200 个孢子，之后用移液枪分别取40 μL 混合液滴至凹玻片内，将凹玻片放置于玻璃干燥器中保湿，静置36 h 后取出用显微镜观察并按上列公式计算孢子萌发抑制率。

将各药剂抑制率与对应浓度用DPS 软件进行数据处理，可以取得浓度对数与萌发率的线性回归方程y＝ax+b，以及药剂对菩提树黑痣病的抑制中量浓度(EC50)、浓度对数、萌发率三者之间的相关系数r。

1.2.4 田间防治试验 在凭祥市苗圃园区内选取统一大小的菩提树进行室外防治试验。每种药剂根据使用说明确定其浓度，80%代森锰锌WP 1 000 倍液，70%甲基硫菌灵WP 1 200 倍液，450 g/L咪鲜胺EW 1 000 倍液，等量式波尔多液(硫酸铜∶生石灰∶水 ＝1∶1∶200)。每种药剂选择 10 株健康的菩提树，设置重复。在3月初刚展叶时采用喷雾器对菩提树进行2 次药剂喷洒，每次间隔期15 d，以喷清水作为对照组。分别于第一次施药后15 d，第二次施药后15 d 进行调查，在每种药剂喷洒的10 棵树上随机选取100 片叶片，记录叶片的病害级别，计算每个处理的病情指数，最终获得药剂的防效。

病情指数＝[∑(各病级株数×各病级代表数值)/(株数总和×发病最高级的代表数值)]×100。

相对防治效果(%) ＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100[6-7]。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对孢子萌发的抑制作用 菩提树黑痣菌的子囊孢子对药剂比较敏感，在0.05 μg/mL 浓度条件下5 种杀菌剂对孢子的萌发已经显现出不同程度的抑制作用。在1.0 μg/mL 的浓度条件下除了70%甲基硫菌灵WP 外，其余4 种杀菌剂都能完全抑制孢子萌发。其中等量式波尔多液对黑痣菌游动孢子的抑制效果最强，在0.5 μg/mL 的浓度下对孢子萌发的抑制率就达到100%。相比之下，70%甲基硫菌灵WP 的抑制效果较差，药剂浓度需达到2.0 μg/mL 时才能完全抑制孢子萌发。而其余3 种杀菌剂均有较理想的抑制效果(表1)。

表1 5 种杀菌剂不同浓度对黑痣菌子囊孢子萌发的抑制率%

2.2 5 种杀菌剂对菩提树黑痣病病菌的抑制中量浓度比较 5 种供试药剂对菩提树黑痣病菌的室内毒力以80%代森锰锌 WP 和等量式波尔多液的EC50值较小，其次是50%多菌灵WP。70%甲基硫菌灵WP 和45%咪鲜胺EW 毒力相对较弱(表2)。

表2 5 种杀菌剂对菩提黑痣病的室内毒力

2.3 杀菌剂田间防治试验结果 所选药剂对菩提树黑痣病都有一定预防作用，以波尔多液的防效最好，代森锰锌和咪鲜胺防效中等，70%甲基硫菌灵防效较低(表3)。

表3 4 种杀菌剂对菩提树黑痣病的田间防治试验结果

3 讨论

Hsieh T J 和Hsieh W H(2003)报道用免赖得和代森锰锌对菩提树黑痣病菌子囊孢子有较好的抑制作用[8]。本试验中发现代森锰锌对菩提树黑痣病防效较好，与台湾报道的结果一致，还发现波尔多液也是一个较好的防治药剂。在后续调查中，施药植株比未施药植株发生病害的程度明显减少，可见代森锰锌和波尔多液也起到了一定的预防作用，并且施药植株没有发生药害。在实际生产应用中，菩提树的长叶期是防治效果最好时期。由于病害发生的复杂性，在病害防治时不能仅依靠化学防治，还应该合理运用抗病品种，或根据种植地形、种植分布等合理布局来对病害的发生进行研究。