种公猪精液伪狂犬病野毒的筛查

陈鹏强 福建南星动物保健品有限公司 福建南平 353000

伪狂犬病（Pseudorabies）是由伪狂犬病病毒引起家畜和野生动物共患的一种急性传染病，可感染猪的神经系统、繁殖系统及呼吸系统，导致妊娠母猪流产或死胎、公猪不育、新生仔猪大量死亡、育肥猪呼吸困难、生长停滞等[1]。

2013年以来，该病开始了新一轮的流行暴发，且传播速度快、发病急。临床一般先发生在后期育肥猪，出现类似流感症状，按照流感方案治疗无效，反复出现呼吸道症状，后续在母猪和哺乳仔猪中传播[2-3]。其中母猪出现高烧、流产、木乃伊胎增多、返情率升高；哺乳仔猪出现急性死亡、神经症状[4]。

种公猪若携带伪狂犬病病毒，可通过精液迅速在猪群中传播。因此，进行种公猪精液的筛查是对疫病净化的先决条件。农业部规定伪狂犬病病毒的筛查及检测标准是通过检测血清PRV-gE抗体，若种猪检测为阳性应严格淘汰，但机体需要一定的时间来对感染形成免疫反应（需要10～15 d），因此，在感染前期是无法通过抗体检测进行诊断[5-6]，需要再结合精液PCR检测。本文通过将ELSIA检测与PCR诊断相结合，优势互补，精确实现种公猪伪狂犬病的带毒筛查。

1 材料与方法

1.1 样品来源 前腔静脉采集公猪血液，精液收集至输精瓶。

1.2 试剂与仪器 伪狂犬病gE抗体检测试剂盒（PRV-gE-Ab），购自爱德士；伪狂犬病病毒荧光定性PCR检测试剂，购自POCKIT；美国宝特酶标仪，POCKIT便携式荧光定性PCR仪。

1.3 试验方法 公猪血液伪狂犬病gE抗体检测按照爱德士操作说明进行，样本S/N值≥0.7判定为阴性，样本S/N值＜0.6判定为阳性；精液伪狂犬病病毒检测按照POCKIT检测说明书操作，样本A520/B520值≥1.4判定为阳性，样本A520/B520值＜1.2判定为阴性。

表1 公猪血清抗体检测及精液病原检测结果

2 结果与分析

本试验采集全场公猪14头，其中杜洛克公猪12 头（D1～D12）、长白公猪 2 头（L13～L14）的血液及精液，进行血清抗体检测和伪狂犬病病原学诊断。该规模场在2018年10～11月返情率达到25%以上，经系列排查，由于使用伪狂犬病带毒公猪的精液配种，导致母猪群返情率升高。

通过公猪血清抗体、精液病原检测结果显示：（1）D10、L13虽然伪狂犬病gE抗体为阴性，但是病原学检测其精液为阳性，说明这2头公猪目前正处于感染的前期且正在排毒，公猪的精液不能作配种使用；（2）公猪 D2、D3、D7、D8、D9 伪狂犬病 gE 抗体为阳性，且精液病原学检测伪狂犬病病毒为阳性，说明这5头公猪历史上曾感染过伪狂犬病野毒且正在排毒；（3）公猪 D1、D5、D6、D12、L14 伪狂犬病 gE 抗体及精液病原学检测均为阴性，说明使用其精液不存在感染风险；（4）公猪D4、D11虽然伪狂犬病gE抗体为阳性，但精液病原学检测伪狂犬病病毒为阴性，说明其历史上曾感染过伪狂犬病病毒但目前没有排毒，该精液暂时可以使用但有风险，应定期进行精液病原学检测。

由于该场历史上为伪狂犬病阳性场，新引进的部分后备公猪也随之转阳，结合本次系统检测结果，建议全场公猪一年免疫4次伪狂犬病弱毒疫苗，同时结合灭活疫苗免疫；公猪精液伪狂犬病病毒检测阳性的公猪暂不作生产使用 （原则上建议伪狂犬病阳性猪应淘汰），另外购伪狂犬病双阴精液（血清gE抗体及精液病原）补充本场使用。半个月后返情率下降至15%以下。

3 讨 论

伪狂犬病病毒为DNA病毒，基因组相对保守，变异率低[7]。目前国内流行的新毒株与2011年前分离的老毒株之间，序列差异并不大，个别存在的基因标记与毒力间的关系尚未得到验证[8]。

ELISA法是目前最为实用的血清学检测方法，能够快速鉴定出感染过伪狂犬病病毒的种公猪，但机体需要一定的时间来对感染形成免疫反应，因此，血清学检测在感染早期发挥的作用十分有限[9]。PCR诊断检测能够直接检测出伪狂犬病病毒，因此，可以在感染初期，还未产生抗体时检测到感染[10]。在实际应用中，关键在于了解每一种方法各自的优势和劣势，在不同情况下选择最适合的技术。通常，2种检测方法结合应用是最为准确而且经济的方案，保护和提升畜群的健康水平。

本文通过荧光定性PCR方法检测公猪精液的伪狂犬病排毒情况，优势互补了血清学检测的遗漏，实现精确高效的公猪精液筛查，快速有效地减少疫病传播风险，提高生产成绩。