2种国标方法检测婴幼儿奶粉中叶酸和泛酸含量比较

王 晶 芦 云 师 佳 安丽艳 李 玲

（中国检验检疫科学研究院 北京 100123）

1 前言

叶酸（Folic）和泛酸（Pantothenic Acid）同属于水溶性的维生素，都是人体维持正常生理功能所必需的微量物质, 尤其对孕妇和新生儿有着特殊的重要性[1,2]。叶酸和泛酸在婴幼儿配方食品和特殊医学用途婴儿配方食品等国家强制性标准中规定为必须成分，并对添加量做了明确限定。

婴幼儿配方奶粉叶酸和泛酸的主要检测方法是微生物法。2018年8月，食品安全国家标准勘误，其中GB 5009.211—2014 《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》[3]和 GB 5009.210—2016《食品安全国家标准 食品中泛酸的测定》[4]在勘误中将当时现行有效的国家标准GB 5413.16—2010 《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定》[5]和GB 5413.17—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定》[6]替代。这2 个标准突然作废，无论是对检测机构还是乳品企业来说都有一定的影响。本文对叶酸和泛酸新旧国标方法的精密度和检测结果的差异性进行比较，希望能给检测机构和乳品企业在检测和生产中提供一些数据支持。

2 材料与方法

2.1 材料与试剂

市售各品牌婴幼儿配方奶粉。

标准菌株:植物乳杆菌（ATCC 8014）、鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469），购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）；培养基:乳酸杆菌琼脂培养基、乳酸杆菌肉汤培养基，购自北京陆桥生物技术有限公司；叶酸测定培养基、泛酸测定培养基，美国BD 公司；叶酸标准品（99.0%）、泛酸标准品（99.0%）:DR。

2.2 主要仪器设备

pH 计（S220，瑞士 METTLER 公司）；培养箱（MIR-254-PC，日本 Panasonic 公司）；酶标仪（multiskan go，美国 Thermo 公司）。

2.3 检测方法

叶酸参照 GB 5009.211—2014、GB 5413.16—2010方法检测；泛酸参照GB 5009.210—2016（第一法）、GB 5413.17—2010（第一法）方法检测，并分别测出了它们的相对标准偏差（RSD）。

3 结果与讨论

3.1 精密度

选择婴儿配方奶粉3 个、较大婴儿奶粉2 个、幼儿奶粉1 个，总共6 个样品，每个样品做6 个平行。2种方法检测结果的精密度详见表1～表4。

表1 GB 5413.16—2010 叶酸检测结果

表2 GB 5009.211—2014 叶酸检测结果

表3 GB 5413.17—2010（第一法）泛酸检测结果

表4 GB 5009.210—2016（第一法）泛酸检测结果

由表1、表2可知，GB 5413.16—2010 检测 6 种奶粉叶酸，6 个平行的 RSD 为 2.78%～4.59%，GB 5009.211—2014 检测 6 种奶粉叶酸，6 个平行的 RSD为 3.05%～4.23%；由表3、表4可知，GB 5413.17—2010（第一法）检测6 种奶粉泛酸，6 个平行的RSD为 1.10%～4.05%，GB 5009.210—2016（第一法）检测6 种奶粉泛酸，6 个平行的 RSD 为 1.75%～4.99%。每种方法的精密度比较接近。

3.2 2种方法的差异分析

叶酸 2 种方法的检测结果经 F 检验，P＞0.05，可进一步采用双样本等方差t 检验对2 种方法的结果进行分析:在95%的置信区间下，自由度df=10，t 检验值=0.066，t 临界值=2.228，P=0.949＞0.05，2 种方法的检测结果无统计学意义；泛酸2 种方法的检测结果经F 检验，P＞0.05，可进一步采用双样本等方差t检验对2 种方法的结果进行分析:在95%的置信区间下，自由度 df=10，t 检验值=-0.102，t 临界值=2.228，P=0.920＞0.05，2 种方法的检测结果差异无统计学意义。

3.3 讨论

叶酸和泛酸新旧国标的主要差异在于样品前处理。叶酸旧标准中婴幼儿配方奶粉的前处理方法是100℃水浴加热，泛酸旧标准中婴幼儿配方奶粉的前处理方法是121℃水解。在新国标中，2 个项目的前处理方法都变成了超声直接提取法，并省去了调整pH 值的步骤，与旧方法对比，前处理步骤工作量有所减少。值得一提的是，对于泛酸项目，由于省去了试样调整pH4.5 后过滤取上清液的步骤，试样会浑浊，使得测试结果平行性差，故建议先将试样用0.22 μm 的过滤器过滤除去背景颜色再进行后续实验。

4 结语

本文对叶酸、泛酸新旧国标方法检测婴幼儿配方奶粉结果的精密度和差异性进行了比较。叶酸新、旧方法的结果精密度分别为3.05%～4.23%和2.78%～4.59%；泛酸新、旧方法的结果精密度分别为1.75%～4.99%和1.10%～4.05%。2 个项目新旧方法的结果精密度接近，分别测得的叶酸、泛酸结果差异无统计学意义（P＞0.05）。通过本文的比对数据，希望能在加速实验、稳定性实验或者产品配方配比方面为检测机构和乳品企业提供一些数据支持。