HPLC法测定妇炎安康胶囊中绿原酸的含量

2019-07-22牟明芳方慧祥

实用妇科内分泌杂志(电子版) 2019年12期

关键词：项下安康绿原

牟明芳，方慧祥

（1.云南省执业药师注册中心，云南昆明 650101；2.曲靖市食品药品检验检测中心，云南曲靖 655000）

妇炎安康胶囊没有对处方中任何一味中药进行含量测定。本文参照中国药典[1]及有关文献[2]，建立了HPLC法测定妇炎安康胶囊中绿原酸的含量的方法,为妇炎安康胶囊的质量标准提升提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

岛津LC-20A型高效液相色谱仪（配有四元泵，自动进样器，VCD检测器，柱温箱，真空在线脱气机，Chemstation化学工作站）（日本岛津公司），METTLER AE240型电子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 材料

妇炎安康胶囊（云南省曲靖市第一人民医院制剂室，批号：20170302，20170501，20170802，规格：0.4 g/粒）。绿原酸对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号：110753-201716，含量：99.3%）。乙腈（德国默克公司）为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液：精密称取绿原酸对照品适量，用50%甲醇制成每1 mL含绿原酸503.781 μg的对照品溶液储备液，精密量取对照品储备液1 ml，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得对照品使用液(质量浓度为50.3781 μg/mL) 。

2.1.2 供试品溶液：取妇炎安康胶囊10粒，混匀，称取约0.6 g（相当于1.5粒的样品），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声（300 W，40 Hz）提取30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

2.1.3 阴性样品溶液：按处方比例及工艺制法，制得不含金银花的阴性样品。按“2.1.2”项下方法制成阴性样品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：依利特C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温为30℃；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(17:83)；流速为1.0 mL/min；检测波长为327 nm；进样量：10 μL。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取“2.1.1”项下的对照品储备液0.2、0.5、1.0、2.5、5.0 mL分别置10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得标准系列。分别取10 μl进样，记录峰面积。以绿原酸的质量浓度(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归，回归方程为y=24942x+1396，r=1.0000(n=5)。结果表明，绿原酸的质量浓度在10.0756～251.8905μg/mL的范围内与对应峰面积呈良好的线性关系。绿原酸对照品、供试品及阴性样品的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4 精密度考察

精密吸取“2.1.1”项下的对照品使用液，在“2.2”项下的色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结果，峰面积RSD为0.16%（n=6）。表明仪器精密度良好。

2.5 专属性考察

吸取“2.1.3”项下的阴性样品溶液，在“2.2”项下的色谱条件测定，结果阴性样品在与对照品保留时间相应位置上，没有相应的色谱峰，表明阴性样品不干扰测定。

2.6 重复性考察

取同一批样品（批号：20170302）6份，按“2.1.2”项下制备，在“2.2”项下的色谱条件测定绿原酸的含量，其含量的RSD为0.97%。

2.7 稳定性考察

取“2.1.2”项下制备的同一样品，室温下放置，分别以0,2,4,8,16,24 h时，在“2.2”项下的色谱条件测定，记录峰面积。结果，RSD为1.09%（n=6）。表明样品24 h内稳定。

2.8 加样回收率考察

取已测定含量的妇炎安康胶囊(批号：20170302)6份，每份约0.3 g，精密称定，精密加入绿原酸对照品储备液1.25 ml，再精密加入50%甲醇23.75 mL，按“2.1.2”项下操作。在“2.2”项下的色谱条件测定，测得绿原酸的加样回收率见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

2.9 样品测定结果

取3批妇炎安康胶囊，按“2.1.2”项下的方法制备，在“2.2”项下色谱条件测定含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

3 讨论

3.1 样品提取方法的选择

对用不同浓度的甲醇（50%、75%、100%）作为提取溶剂，超声和回流两种提取方法，以及在以上基础上提取时间（15、30、45、60分钟）上进行比较，发现当浓度和提取时间均相同时，超声和回流提取效率差异不大，但回流方式杂质偏多，当用50%的甲醇超声提取30分钟时，提取效果较好且杂质少，给分离带来方便。从而确定为本试验的提取方法为50%的甲醇超声提取30分钟。