水中涕灭威、克百威和甲萘威的测定柱后衍生—液相色谱法

赵祺平 韩 梅 李慧慧 李 明

（1.淮河流域水资源保护局淮河流域水环境监测中心 蚌埠 233001 2.枣庄市水文局 枣庄 277100）

1 前言

目前氨基甲酸酯类农药的测定方法主要有酶抑制法、气相色谱法、液相色谱法、气质联用法、液质联用法和柱后衍生—液相色谱法。食品、农作物中氨基甲酸酯类农药测定方法较多，但关于水体中氨基甲酸酯类农药的测定研究较少，只有个别早期文献有所报道。因此，研究建立一种快速、简便、可靠的水体中氨基甲酸酯类农药分析方法，显得尤为必要。

2 实验部分

2.1 仪器和试剂

仪器：安捷伦1100液相色谱仪（配置荧光检测器）；Pickering Pinnacle PCX柱后衍生仪；色谱柱：C18，150mm×4.6mm×5μm。

试剂：甲醇（色谱纯）；二氯甲烷（色谱纯）；四硼酸钠溶液：称取7.6g十水四硼酸钠溶于800mL水中，用水定容至1000mL；水解试剂：称取2.0g氢氧化钠溶于800mL水中，再缓缓加入0.5g聚丙烯酸钠，轻轻搅拌使其溶解，用水定容至1000mL，该溶液使用前需用微孔滤膜过滤，并用氦气脱气或在线脱气；反应试剂：称取0.10g邻苯二甲醛溶于10mL甲醇中，再将其加入1000mL四硼酸钠溶液中，混合均匀后用微孔滤膜过滤，用氦气脱气或在线脱气，再加入2.0g 2-（二甲胺基）乙硫醇盐酸盐，混匀；涕灭威、克百威和甲萘威标准溶液：市售有证标准物质配制。

2.2 仪器条件

流动相：甲醇和水，梯度淋洗条件如表1所示。水解试剂和反应试剂泵速均为0.30mL/min；水解温度：100℃；水解线圈体积：0.50mL；荧光检测器激发波长：330nm，发射波长：465nm。

2.3 实验方案

2.3.1 高浓度水样——基体改进剂选择

当水样浓度较高时，利用荧光检测器的高灵敏性，可采取直接进样测定。实验过程中发现，进样量超过10μL时，色谱峰峰型变宽或拖尾，甚至影响目标物分离度，主要原因可能是大体积水相进样造成的基体影响。因此，该实验采用甲醇对样品基体进行改进。基体改进方法：用纯水配制的标准溶液作为样品，取一100mL容量瓶，用样品润洗三遍，加入15.0mL甲醇，再加样品至刻度，用滤膜过滤后测定。基体改进后进样量可增加至100μL。

2.3.2 低浓度水样——固相萃取法

水样中待测物浓度较低时，应固相萃取浓缩后进样。依次用10mL甲醇和10mL水活化固相萃取柱，在活化过程中应确保小柱中填料表面不露出液面。量取100mL水样，以小于5mL/min的流速（约1～2滴/s）通过固相萃取柱。再用10mL实验用水淋洗小柱，去除小柱上保留较弱的杂质，用真空泵抽干小柱。用一定体积的洗脱液以约3mL/min（约1滴/s）的流速洗脱富集后的小柱，收集洗脱液于浓缩管中。将上述洗脱液浓缩至1mL以下，用甲醇定容至1mL，转移入样品瓶中过滤，待测。

（1）萃取柱选择

分别选用不同型号的固相萃取小柱Agilent Bond Elut C18柱、Agilent Bond Elut C8柱、CNW Poly-Sery HLB和Waters Oasis HLB柱进行研究，规格均为500mg/6mL。二氯甲烷做洗脱液，洗脱体积为10mL，按上述固相萃取步骤处理水样，比较目标物的回收率。

（2）洗脱液选择

使用条件（1）中选择的最佳萃取柱，分别用二氯甲烷、甲醇以及二氯甲烷/甲醇（1+1，V/V）三种溶剂做洗脱液，洗脱体积为10mL，比较目标物的回收率。

洗脱液体积选择

选用条件（1）和（2）的萃取柱和洗脱液，改变洗脱液体积分别为：2.00mL、5.00mL、8.00mL、10.0mL、15.0mL，比较目标物的回收率。

2.3.3 方法检出限测试

在最佳实验条件下，配制一定浓度的目标物混标溶液，高浓度溶液采用直接进样法平行测定11次，低浓度溶液采用固相萃取法平行测定11次，分别计算标准偏差，按照MDLi=Si×t(n-1，0.99)计算检出限。

3 结果与讨论

3.1 基体改进剂

对比加入基体改进剂前后色谱图（图1和图2）可以看出，纯水配制的标准溶液直接样100μL时，目标物的色谱峰前拖尾并出现肩峰，峰型变宽，三种物质无法分离；基体改进后，进样100μL，色谱峰明显变窄变强，平行测定6次，保留时间偏差在±0.3min，峰面积RSD为3.83%。因此，高浓度溶液直接进样，加入甲醇改进基体，可增大进样体积，提高方法灵敏度和检出限。

3.2 固相萃取条件

3.2.1 萃取柱选择

涕灭威、克百威和甲萘威在四种不同固相萃取柱下萃取的回收率如图3所示，结果表明两种HLB柱对三种目标物的萃取效率较高，而采用C18柱进行萃取，涕灭威保留效果最差，回收率不超过40%，C8柱居于C18柱和HLB柱之间，由于氨基甲酸酯类化合物部分组分有一定极性，C18柱对其保留能力较弱，而HLB柱填料为亲水亲酯型聚合物，很好地解决了极性有差异的多组分物质的回收率问题。两种HLB柱对目标物的萃取效率差异较小，该实验选用CNW Poly-Sery HLB作为固相萃取柱。

3.2.2 洗脱液选择

用Poly-Sery HLB作为固相萃取柱，目标化合物在不同洗脱液洗脱下，回收率见图4所示，从图中可以看出，甲醇作为洗脱溶剂回收率较高。选用甲醇做洗脱液，平行测定6次，相对标准偏差为5.42%，说明甲醇洗脱稳定性好。

表1 流动相梯度淋洗表

图1 纯水配制的标准溶液进样100μL色谱图

图2 基体改进后进样100μL色谱图

表2 实际水样测定表（n=6）

图3 固相萃取柱的选择图

图4 洗脱剂的选择图

图5 洗脱剂体积的选择图

3.2.3 洗脱液体积选择

改变洗脱液体积，三种目标物的回收率如图5，从图中可以看出，三种目标物回收率均随洗脱剂体积增加而增大，当洗脱剂体积大于10mL时，回收率没有显著提高，为缩短浓缩时间，该实验选择10mL洗脱液体积洗脱。

3.3 方法检出限

在最佳实验条件下，高浓度水样直接进样测定，涕灭威、克百威、甲萘威的检出限分别为0.25μg/L、0.25μg/L、0.11μg/L；低浓度水样经固相萃取浓缩后进样测定，涕灭威、克百威、甲萘威的检出限分别为0.005μg/L、0.005μg/L、0.002μg/L。

3.4 方法精密度

分别配制高浓度、低浓度的混标水溶液各6组，高浓度溶液采用直接进样法平行测定，涕灭威、克百威和甲萘威的相对标准偏差分别为6.84%、5.03%和4.14%；低浓度溶液经固相萃取浓缩后平行测定，涕灭威、克百威和甲萘威的相对标准偏差分别为12.7%、10.7%和11.2%。

3.5 实际水样测定

实验室分别对淮河流域地表水、地下水和饮用水样品进行低、中、高三种浓度（分别为0.100μg/L、1.00μg/L和10.0μg/L）的加标回收率测定，三种水样本底浓度均低于检出限，回收率如表2所示。结果表明，地表水中涕灭威、克百威和甲萘威的加标回收率范围分别为72.0%～91.1%、91.0%～103.0%、78.0%～109.0%，地下水中涕灭威、克百威和甲萘威的加标回收率范围分别为76.0%～94.5%、83.0%～96.4%、84.0%～103.0%，饮用水中涕灭威、克百威和甲萘威的加标回收率范围分别为74.0%～101.0%、79.0%～102.0%、96.0%～111.0%。

4 结论与建议

根据本文建立的方法，高浓度水样可加入基体改进剂后直接进样，精密度为4.14%～6.84%，检出限为0.25μg/L；低浓度水样采用固相萃取法浓缩后测定，精密度为10.7%～12.7%，检出限为0.005μg/L。实际水样的测定，地表水、地下水和饮用水的加标回收率分别为72.0%～109.0%、76.0%～103.0%和74.0%～111.0%。本方法精密度好、准确度高、检出限低，可用于地表水、地下水和饮用水水体中痕量涕灭威、克百威和甲萘威的测定。

2017年发布的《地下水质量标准》（GB/T 14848-2017）新增了涕灭威和克百威毒理学有机物指标，其Ⅰ类水质标准限值均为0.05μg/L，目前尚无适用于地下水中测定涕灭威的标准方法。本方法用于地下水中涕灭威的测定回收率高，精密度好，检出限低，满足《地下水质量标准》对涕灭威的限值要求，且该方法要求的仪器简单易得，可大规模推广应用，建议相关部门采纳■