烟酸的体外抗氧化活性研究

厉彦翔 常江 张苗苗

摘 要：目的：研究煙酸的体外抗氧化活性。方法：采用分光光度计法分析烟酸对羟基自由基和DPPH自由基的清除作用，并探讨烟酸对脂质过氧化物的抑制作用和铁离子的还原能力。结果：烟酸能够清除羟基自由基和DPPH自由基，并且具有较强的脂质过氧化物抑制和铁离子还原能力。结论：烟酸具有一定的体外抗氧化活性。

关键词：烟酸;体外;抗氧化活性

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2019.17.012

随着我国经济和饲料工业的迅速发展，各类饲料及食品添加剂的使用也日益增加。烟酸（niacin），属于B族维生素，是机体维持生理功能的必须营养素[1]。除了作为机体必须的营养素外，烟酸具有全面的调血脂作用，而近年来烟酸作为营养药物、食品及家畜饲料添加剂中的主要成分更是受到广泛的关注[2-3]。烟酸的营养支持及机体代谢调节作用基础目前尚未完全揭示，其是否具有抗氧化活性目前研究甚少。本文以烟酸为研究对象，研究其体外抗氧化活性，以期为饲料及食品添加剂烟酸的营养支持作用提供一定的理论基础和依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）;MS204TS型分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）;恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）。

1.2 材料

烟酸（NA）、1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）、1，10-菲罗啉均购自美国Sigma-Aldrich公司;L-抗坏血酸（维生素C）、H2O2、硫酸亚铁、乙醇、硫代巴比妥酸、三氯乙酸均为分析纯。

2 方法

2.1 烟酸对羟基自由基清除能力的测定

取2.1mM1，10-菲罗啉溶液1mL置入试管中，加入2mL磷酸盐缓冲溶液（PBS）和1mL双蒸水混匀，再加入1mL硫酸亚铁溶液混匀，最后加入1mL H2O2溶液，37℃温育60min，在536nm波长下测定吸光度，为A（损）;用1mL蒸馏水代替H2O2，测的吸光度值为未损伤管A（未）;用不同浓度样品溶液代替双蒸水，测出的吸光度为A（样）。

清除率（%）=[A（样）-A（损）]/[A（未）-A（损）]×100

2.2 烟酸对DPPH自由基清除能力的测定

取不同浓度样品溶液2mL和DPPH·溶液2mL加入到试管中摇匀、室温静置30min，在517nm波长处测定吸光度值Ai;在2mL DPPH·标准溶液中加入2mL无水乙醇，震荡混合，在517nm波长处测定吸光度值A0;试管中加入2mL不同浓度的样品溶液和2mL无水乙醇，摇匀、避光放置30min后，在517nm波长处测定吸光值Aj。

清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%

2.3 烟酸对脂质过氧化物抑制作用的测定

新鲜鸡蛋去卵清，卵黄用等体积的PBS缓冲液配制成1：1的卵黄悬液，同方向匀速搅拌10min，再用PBS稀释成1：25的卵黄悬液。吸取卵黄悬液0.2mL，分别加入0.1mL不同浓度样品溶液，0.2mL 25mM硫酸亚铁溶液，加入1.5mL PBS缓冲液，在37℃水浴下反应30min，加1mL 20%三氯乙酸，混匀3500r/min离心15min，取上清液2mL，加1mL 0.8%硫代巴比妥酸溶液，沸水浴15min冷却后532nm下测定吸光度值，以0.1mL蒸馏水代替样品作为空白对照管。

清除率=（A0-A）/A0×100%

其中，A0为空白对照管吸光度，A为样品吸光度。

2.4 烟酸还原铁离子能力的测定

在试管中加入0.5mL样品溶液，2.5mL的PBS缓冲液和2.5mL铁氰化钾溶液，震荡均匀，50℃水浴20min，流水冷却，然后加入2.5mL三氯乙酸溶液。混匀后，用3000r/min离心10min。吸取上清液2.5mL置于新的离心管中，再加入2.5mL蒸馏水和0.5mL三氯化铁溶液，混合均匀后，用紫外分光光度计在700nm波长下测定吸光度。

3 结果

3.1 烟酸对羟基自由基清除的影响

机体过量的自由基则会引起蛋白质变性、酶失活、多糖降解、DNA链断裂、生物膜结构损伤、细胞解体乃至机体病变和死亡。从图1结果可知，随着烟酸浓度增加，其对羟基自由基的清除率逐渐增大。当烟酸浓度为0.5mg/mL时，羟基自由基清除率为21.83%，表明烟酸具有一定的清除羟基自由基的作用。

3.2 烟酸对DPPH自由基清除的影响

DPPH自由基溶液在517nm处有强吸收，每个DPPH分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物使溶液的典型紫色变浅。图2表明，随着烟酸浓度的增加，其对DPPH自由基的清除率增大，揭示烟酸具有一定的体外抗氧化活性。

3.3 烟酸对脂质过氧化物抑制作用的影响

随着烟酸浓度的增加，烟酸对卵黄脂蛋白体系中脂质过氧化作用抑制率也随之增加，其抑制作用与烟酸浓度呈现一定的量效关系。图3表明，烟酸对卵黄脂蛋白脂质过氧化物有较好的抑制作用，最大抑制率为61.02%。

3.4 烟酸还原铁离子能力的测定

在该反应过程中，Fe3+可被抗氧化物质还原成为Fe2+后在700nm波长下具有强吸收。因此，吸光度越大表明样品还原能力越强。图4可见，随着烟酸浓度的增加，体系吸光度越大，表明烟酸具有一定的还原力。

4 讨论

羟基自由基、过氧化氢及超氧阴离子自由基等是生物体内主要的活性氧自由基，由它们引发的体内脂质过氧化是机体衰老、动脉粥样硬化、心血管疾病及肿瘤发生的重要原因。本文从烟酸对羟基自由基和DPPH自由基的清除作用，对脂质过氧化物的抑制作用和铁离子的还原能力四个方面对烟酸的体外抗氧化进行了研究。结果表明，烟酸能够清除羟基自由基和DPPH自由基，并且具有较强的脂质过氧化物抑制和铁离子还原能力。

因此，烟酸具有一定的体外抗氧化活性，可能作为潜在的抗氧化剂，可能为揭示烟酸作为食品及饲料添加剂营养支持作用提供一定的理论基础和依据。

参考文献：

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[2]D Andrea E，Hey SP，Ramirez CL，et al.Assessment of the roleof niacin in managing cardiovascular disease outcomes：a systematicreview and meta-analysis[J].JAMA Netw Open，2019，2（04）：e192224.

[3]Bruckert E，Labreuche J，Amarenco P.Meta-analysis of the effectof nicotinic acid alone or in combination on cardiovascular eventsand atherosclerosis[J].Atherosclerosis，2010，210（02）：353-361.

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