2 118例住院分娩孕妇乙型肝炎病毒感染血清标志物及病毒载量分析*

唐小敏， 令狐艳， 张丽**， 赵苏晔， 刘淳婷

(1.贵州省疾病预防控制中心， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学 基础医学院， 贵州 贵阳 550025)

病毒性肝炎主要包括甲、乙、丙、丁、戊5种类型，但在临床常见的是乙型肝炎(hepatitis B，HB)和丙型肝炎，二者在全球范围内的感染率较高[1-2]。目前，中国乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染占全球超过1/3，每年新发病例接近10万人 ，近一半HBV感染者是经母婴传播引起[3]。有研究表明，孕妇乙肝病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性者对新生儿HBV感染存在较高的危险[4]。HBV能使感染者受到疾病困扰，还可增加家庭生活负担与经济压力，尤其是新生儿随着年龄的增长，还可引起精神抑郁，影响生活质量。本研究对2 118例孕妇HBV感染血清标志物及HBsAg筛查阳性孕妇的HBV-DNA病毒载量进行检测，分析该地区孕妇感染HBV状况及病毒复制变化特点与主要血清标志物的关系及对新生儿的影响，为阻断母婴传播提供一定的实验室依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

采用随机抽样方法抽取贵州省黔东南州榕江与黎平2个县级医院2014年1月～2015年12月住院分娩的2 118例孕妇(榕江县1 485例、黎平县633例)中筛选出HBsAg阳性孕妇122例，17～41岁、平均(26.4±5.3)岁，文化程度高中(中专)及以下学历为115例(94.26%)、大专学历为3例(2.50%)、本科及以上学历为4例(3.28%)，孕妇无乙肝疫苗(HepB)免疫史或不详为108例(88.52%)。入选标准符合HBsAg筛查阳性、肝功能正常的孕妇，同时排除肝炎活动史或合并其他类型肝炎病毒感染、先兆流产及早产、妊娠高血压、其他内外科严重并发症、抗病毒治疗史。所有入选孕妇均知晓本研究并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1标本采集与处理 采集HBsAg筛查阳性并符合标准的孕妇空腹晨起静脉血5 mL，无溶血、黄疸、血脂等现象，及时分离血清，统一保存于-20 ℃以下，并进行HBsAg、HBeAg及HBV-DNA病毒载量检测；同时采集HBV感染孕妇所生胎儿脐带血4～5 mL，分离血清，保存于-20 ℃以下，用于HBsAg血清标志物检测。

1.2.2HBV血清标志物检测 应用MK3型酶标仪定性检测乙肝病毒抗体，采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测HBsAg与HBeAg，每次检测均设阴性、阳性及空白对照。试剂来源于北京万泰生物药业有限公司，具体操作及结果判断按试剂说明书进行，结果以阴性或阳性形式报告。HBsAg与HBeAg 1项阳性可判定为HBV感染、脐带血HBsAg检测阳性可判定为HBV感染。

1.2.3HBV-DNA病毒载量定量检测 采用PCR荧光探针法(ABI 7500实时荧光定量分析仪及为湖南圣湘生物科技有限公司生产荧光定量PCR试剂)检测HBV-DNA，每次试验设有阴性、阳性对照及定量参考品，并与待测样品同步处理。结果有效性标准：测定值在1.0×105～5.0×1011IU/L的样本，报告相应检测结果；对于>5.0×1011IU/L的样本须标注，如需精确定量，可稀释后再测；对于<1.0×105IU/L的样本处于试剂盒的检测下限。结果判断标准：HBV-DNA≥1.0×105IU/L判断为阳性，HBV-DNA<1.0×105IU/L判断为阴性。HBV-DNA病毒载量阳性可判定为HBV感染。

1.3 统计学处理

病例资料与实验数据录入采用EPI Data 3.1软件系统，采用SPSS 17.0统计软件进行分析数据。计量资料进行正态性检验及集中趋势分析，计数资料采用卡方检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 孕妇血清标志物与HBV-DNA病毒量

122例HBsAg筛选阳性孕妇中HBsAg阳性119例、阴性3例，3例HBsAg阴性孕妇中有2例HBeAg阳性，有1例HBsAg、HBeAg及HBV-DNA均阴性。由于HBsAg、HBeAg及HBV-DNA中任1项阳性可视为HBV感染，因此，榕江与黎平2个县级医院2014年1月～2015年12月住院分娩的2 118例孕妇中HBV感染率为5.71%(121/2 118)。榕江县与黎平县HBsAg、HBeAg及HBsAg+HBeAg阳性率比较，差异均有统计学意义(χ2=23.34,P<0.001；χ2=12.27,P<0.001；χ2=9.35,P=0.002)，见表1。榕江县与黎平县孕妇HBV感染HBV-DNA病毒载量阳性率分别为43.33%(26/60)和49.18%(30/61)，两者比较差异无统计学意义(χ2=0.42,P=0.519)。

表1 孕妇HBV感染血清标志物检测(n,%)Tab.1 Detection on serum markers of pregnant women with HBV infection

(1)与黎平县比较，P<0.05

2.2 HBV感染孕妇HBV-DNA病毒载量

121例孕妇中44例HBV-DNA≥1.0×106IU/L、占36.36%，32例HBV-DNA≥1.0×109IU/L、占26.45%；其中榕江县HBV-DNA≥1.0×106IU/L、占33.33%(20/60)，黎平县HBV-DNA≥1.0×106IU/L、占39.34%(24/61)。具体构成比见表2。

表2 两县HBV感染孕妇HBV-DNA病毒载量构成(n,%)Tab.2 Proportion of HBV-DNA viral loads in pregnant women with HBV infection in two counties

2.3 HBV感染孕妇血清标志物与病毒载量

121例中HBsAg、HBeAg双阳性的孕妇，HBV-DNA≥1.0×106IU/L、占96.77%(30/31)；HBsAg阳性及HBeAg阴性的孕妇中HBV-DNA<1.0×106IU/L、占85.23%(75/88)，孕妇不同HBV感染模式下不同HBV-DNA病毒载量的孕妇比例比较，差异有统计学意义(P<0.001)。HBsAg及HBeAg双阳性与HBsAg阳性及HBeAg阴性的孕妇HBV-DNA≥1.0×106IU/L人数比较，差异有统计学意义(χ2=66.80,P<0.001)。见表3。

表3 孕妇HBV标志物与HBV-DNA关系Tab.3 Relationship between HBV Markers and HBV-DNA in pregnant women

2.4 新生儿脐带血HBV感染情况

121例HBV感染孕妇所生新生儿中37例HBsAg阳性，其中男婴18例、女婴19例，新生儿脐带血阳性率为30.58%，不同感染模式和HBV-DNA病毒载量孕妇所生新生儿HBsAg阳性情况见表4。统计学分析结果显示，母亲HBV血清标志物HBsAg和HBeAg双阳性(Fisher’sExactTest,P=0.007)、母亲HBV-DNA≥1.0×106IU/L(χ2=5.17,P=0.023)与新生儿脐带血HBV感染有关，差异有统计学意义。

表4 新生儿脐带血HBV感染率比较Tab.4 Comparison of HBV infection rates of umbilical cord blood in newborns

3 讨论

乙型肝炎病毒感染呈全球范围内的分布，不同国家与地区其流行特征与感染强度不同。2006年我国乙肝血清流行病学调查发现1～59岁人群HBsAg携带率为7.18%[5]，5岁以下儿童的HBsAg携带率不到1%[6]，但同期调查发现贵州地区1～4岁儿童HBsAg携带率为2.77%，高于全国平均水平[7]。HBV主要传播形式包括母婴垂直传播、性接确及血液传播，但母婴传播是新生儿感染HBV最主要的形式[8]。有文献报道贵州省孕妇HBV感染率为3.08%[9]；HBV感染孕妇所生新生儿脐血HBsAg阳性率为41.56%，可能会存在较高的母婴传播风险[4]。本研究结果显示，调查的少数民族地区孕妇HBsAg阳性率为5.71%，高于2014年全国1～29岁人群水平(2.60%)[10]，也高于贵州省2014～2015年孕妇的HBsAg阳性率(2.87%)[9]，但与贵州部份少数民族人群HBsAg阳性率(5.86%)相比较差异不大[11]，这可能与该地区育龄期妇女，由于文化程度偏低(HBV感染孕妇中94.26%为高中以下学历)，对乙肝病毒危害性认识不足，缺乏主动HepB免疫接种的意识有关，这与针对贵州省少数民族地区乙肝防治现况调查结果相一致[12]。

乙型肝炎病毒是嗜肝性双链DNA病毒，由核壳和外层脂蛋白膜构成，核壳由HBcAg和双链DNA及DNA聚合酶组成，外层脂蛋白膜含有HBsAg[13]，检测HBsAg常作为乙型肝炎病毒诊断的主要指标，HBsAg阳性能表明有感染但不能说明有病毒复制或其传染性强弱[14]，就必须依靠HBV-DNA检测以确定病毒是否有复制及传染性高低；同时少数病例HBV五项血清标志物检测为阴性[15]，但通过病毒载量检测，可检出HBV-DNA并有升高趋势，因此可判断此类肝炎为“隐匿性乙肝”[16]，能排除漏诊病例，保护新生儿健康。当HBV-DNA大于1.0×106IU/L时，表明HBV病毒处于活动或复制时期[17-18]；本研究显示，121例孕妇HBV-DNA>1.0×106IU/L，占到了36.36%，其中有32例>1.0×109IU/L，占到了26.45%，表明这部分感染孕妇正处于病毒复制或活动期，需要进行抗病毒治疗与围产期保健。同时，研究发现HBsAg与HBeAg双阳性与HBsAg阳性、HBeAg阴性且病毒载量>1.0×106IU/L的孕妇相比较，统计学有差异(P<0.05)，可表明HBeAg阳性与高载量HBV-DNA 有关联。

本研究结果显示，该地区新生儿脐带血阳性率为30.58%，其中，HBsAg阳性合并HBeAg阳性孕妇中，致新生儿脐带血阳性率为45.16%，高于HBsAg阳性且HBeAg阴性的孕妇(23.86%)。HBV-DNA作为围产期传播HBV的重要危险因素，母亲病毒载量>1.0×106IU/L引起婴幼儿HBV感染率高于病毒载量<1.0×106IU/L的母亲。30例HBsAg与HBeAg双阳性且病毒载量≥1.0×106IU/L的孕妇，所生13例新生儿脐带血HBsAg检测为阳性，脐带血阳性率达到了43.33%，表明新生儿感染易发生在HBeAg为阳性且含有较高病毒载量水平的母亲，同时也表明HBeAg阳性是HBV复制及传染性高低的一个重要因素。

本次研究由于抽样区域范围小，人群可能缺少代表性，可能对少数民族地区评价存在着结果偏倚。本研究中有77例HBV-DNA≤1.0×106IU/L的孕妇，所生新生儿脐带血HBsAg阳性率为23.38%，由于没有对新生儿进行随访并开展母婴阻断后的血清标志物检测，不能证明新生儿是否真正的引起HBV感染；对婴幼儿脐带血HBsAg检测阳性也有可能是由于HBsAg和HBeAg不是完整的病毒颗粒，可通过胎盘屏障引起假阳性结果[19]，也可能存在脐血被污染；同时，有文献研究发现脐带血HBsAg或HBV病毒载量阳性，经后期随防发现大部分新生儿并未感染HBV，表明婴幼儿病毒来自于母亲体内，而不是自身产生[20]。

综上所述，开展少数民族地区孕妇血清标志物及病毒载量检测，有助于了解该地区孕妇乙型肝炎病毒的感染状况和流行趋势，有效地实施抗病毒治疗及母婴传播阻断，对优生优育，提高民族健康素质都有着重要意义。