HPLC法测定补肾强身片中5种化学成分的含量

叶晓娅，李华丽，薛晓会

(平顶山市食品药品检验所，河南 平顶山467000)

补肾强身[1]片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由淫羊藿、菟丝子、金樱子、女贞子和狗脊(烫)5味中药组成。2017年我单位中药室承担河南省此品种的药品价格倒挂专项检验，涉及18个地市、36批样品，基本上涵盖了在河南市场上流通的厂家。在检验过程中发现的问题主要是有些厂家产品的性状、鉴别与标准有一定差异，如产品性状不仅含有标准上规定的灰至棕灰色，还有棕褐色、棕色等；针对金樱子、女贞子的理化反应鉴别和淫羊藿苷的薄层色谱鉴别，结果所显示的颜色也有差异，这给结果判定带来了一定的困扰。另外由于标准只能定性，不能定量，对制剂检查有一定的制约，不能全面反映制剂的质量。现有的文献报道多是关于淫羊藿苷[2]、金丝桃苷[3]、原儿茶酸[4]的单一成分的含量测定，但中药复方制剂采用单一成分含量控制略显不足，还有研究采用UPLC法同时测定6种成分[4]，UPLC是近年来发展起来的新型液相色谱仪，有出峰时间短、分离效果好的特点，但较一般的液相色谱仪价格更为昂贵，色谱柱填料粒径要求比较微小，易堵、造价高，还有压力高对仪器的有些部件易产生损坏，而常规液相色谱仪使用更加普遍、经济。因此，本研究采用HPLC法同时测定补肾强身片中5种药材所含有的5个化学成分的含量，经方法学考察均符合规定，为本研究制剂质量分析建立了可行的控制方法，为进一步完善补肾强身片的质量标准提供了参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

戴安U3000高效液相色谱仪；戴安VWD-3100紫外检测器；Acclaim C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱温为35℃；XS-105电子分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)。

1.2 对照品与药品

待检补肾强身片共涉及12个厂家，从每个厂家取样一批，其中一个厂家有薄膜衣和糖衣片两种制剂规格，共计13个样品。因有的厂家样品含量不佳，故对厂家名称不予公布，仅以代号表示。对照品原儿茶酸(批号110809-201205)、绿原酸(批号110753-201817)、金丝桃苷(批号11121-201708)、特女贞苷(批号110126-201605)及淫羊藿苷(批号110737-200415)均购自中国食品药品检定研究院，含量分别为99.9%、96.8%、95.1%、93.3%和100%。

1.3 试剂

乙腈(Merck)为色谱纯；水为哇哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性实验

采用Acclaim C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相。线性梯度洗脱：95%B(0 min)，85%B(8 min)，85%B(18 min)，72%B(30 min)，65%B(38 min)，55%B(45 min)，95%B(45.1 min)，95%B(58 min)；检测波长(0～11 min)260 nm、(11～16 min)330 nm、(16～28 min)360 nm、(28～34 min)224 nm、(34～58 min)270 nm；流速为1.0 mL·min-1，柱温为35 ℃，进样量为10 μL，HPLC色谱见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷，对照品质量分别为15.82、11.22、10.84、11.74、10.87 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液(分别含原儿茶酸0.1564 mg·mL-1、绿原酸0.108 6 mg·mL-1、金丝桃苷0.103 1 mg·mL-1、特女贞苷0.109 5 mg·mL-1、淫羊藿苷0.102 4 mg·mL-1)；取混合对照品储备液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取供试品内容物1.0 g，精密称定重量，置50 mL棕色量瓶中，加入70%乙醇水约40 mL，超声处理30 min，放冷，用70%乙醇水定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。

注：1. 原儿茶酸；2. 绿原酸；3. 金丝桃苷；4.特女贞苷；5.淫羊藿苷

2.3 标准曲线的制备

精密吸取混合对照品溶液0.5、1、5、10 μL及混合对照品储备液5、8、10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，并以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标进行回归计算，结果表明各化学成分在相应浓度范围内线性关系良好，见表1。

表1 五种化学成分线性关系和线性范围

2.4 精密度实验

取补肾强身片(批号：15121821)，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，连续进样6次，测定，以相应色谱峰的峰面积计算RSD，结果原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的RSD(n=6)分别为0.72%、0.42%、0.51%、0.21%、0.29%，表明所用方法的精密度良好。

2.5 重复性实验

取补肾强身片(批号：15121821)，按照2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各6份，进样测定，结果原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷平均含量(n=6)分别为0.332 mg·g-1、0.561 mg·g-1、0.733 mg·g-1、1.29 mg·g-1、1.20 mg·g-1，RSD分别为0.32%、0.94%、0.51%、0.28%、 0.37%，表明所用方法的重复性良好。

2.6 加样回收率实验

取同一批号(15121821)样品适量，研细，取1.0g，共6份，精密称定。分别精密加入混合对照品溶液3 mL，按照“2.2.1”项下方法制备所需溶液，在上述色谱条件下测定，计算回收率。结果原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的平均回收率(n=6)分别为103.1%、96.7%、97.0%、101.9%、98.2%，RSD分别为1.3%、2.5%、0.8%、1.0%、1.6%。

2.7 样品的测定

取13个样品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，记录峰面积，按外标法计算。结果见表2。

表2 12个厂家13批样品中原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的含量 (mg·g-1)

注：当S/N≤3时，结果为“未检出”。

3 结论

本研究用HPLC法同时测定补肾强身片中原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的含量，可基本全面反映制剂质量，方法简单，结果准确可靠，可用于本研究制剂的质量控制。

4 讨论

本次试验样本有限，结果差异较大，这与药材的产地、品种、等级或制剂工艺和辅料的不同等各方面因素有关，亦可能因为质量标准中缺少量的控制，企业未按规定的处方量投料，仅仅按照部颁标准的检验项目有区别投料，或对投料的药材未进行有效控制，例如在2015年我所检验的红花注射液专项，这个标准未更新前没有“羟基红花黄色素A”的含量测定，我们按照新标准测定了在标准更新前生产的这个成分的含量，有少部分是不达标的，但是执行新标准后，这个成分的含量测定全部测定达标(仅针对我所样品)，因此中药制剂质量标准提高对药品质量的监控是一项非常重要的任务，另外结合中药材原料的监管和中药生产厂家的飞行检查，可从根本上保障中药制剂的质量。