CYP1B1基因多态性与紫杉醇不良反应的相关性研究

许秋霞　叶磊　周细萍　陈文发　陈金成　高雅莉

[摘要] 目的 探讨肿瘤患者CYP1B1基因多态性与紫杉醇不良反应的关系。 方法 选择我院2016年1月～2018年5月接受紫杉醇化疗的肿瘤患者52例作为研究对象，检测其CYP1B1基因型，并观察、收集、记录其不良反应发生情况，分析患者的不良反应发生和基因多态性的相关性。 结果 本研究共检测了27个基因位点，仅11个基因位点发生突变，其余16个基因位点均为野生型。其中，在CYP1B1*2/*5/*6/*7（142 C>G）和CYP1B1*2/*6/*7（355 G>T）基因多态性中，野生型基因患者的白细胞减少不良反应发生率高于突变型基因，差异有统计学意义（P<0.05）;其余不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 CYP1B1基因多态性与紫杉醇的不良反应具有一定的相关性。

[关键词] 紫杉醇;基因多态性;CYP1B1;不良反应

[中图分类号] R969          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）15-0039-04

Study on the correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel

XU Qiuxia1   YE Lei2   ZHOU Xiping3   CHEN Wenfa1   CHEN Jincheng1   GAO Yali1

1.Department of Pharmacy， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China; 2.Department of TCM， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China; 3.Department of Pharmacy， Hospital of Quanzhou Taiwanese Investment Zone， Quanzhou   362700， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel. Methods A total of 52 patients with tumor who were given chemotherapy with paclitaxel from January 2016 to May 2018 were selected as the study subjects. The CYP1B1 gene type was detected， and adverse reactions were observed， collected and recorded. The correlation between gene polymorphism and adverse reactions was analyzed. Results A total of 27 gene sites were detected in the study. Only 11 gene sites were mutated， and the other 16 gene sites were wild type. Among the gene polymorphism of CYP1B1*2/*5/*6/*7 （142 C>G） and CYP1B1*2/*6/*7（355 G>T）， the incidence rate of adverse reaction of leukopenia in the patients with wild type gene was higher than that in the patients with mutated gene， and the difference was statistically significant（P<0.05）; the differences in the incidence rates of other adverse reactions were not statistically significant（P>0.05）. Conclusion There is a certain correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel.

[Key words] Paclitaxel; Gene polymorphism; CYP1B1; Adverse reactions

隨着个体化治疗学理念的不断完善，个体药物基因多态性与不良反应相关性的研究越来越受重视，许多成果被应用于临床上，以指导临床合理规范用药。细胞色素酶P450 1B1（cytochrome P450 1B1，CYP1B1）为细胞色素酶P450超家族成员之一，是一种血红素-硫醇盐单加氧酶，主要催化17-β-雌二醇（E2）的羟化作用，参与多种恶性肿瘤的发病过程[1]。CYP1B1基因多态性的改变可能影响癌症的易感和预后，有研究发现CYP1B1基因多态性与紫杉醇的代谢有一定的关系[2]。在临床中，紫杉醇是治疗癌症的基本药物，与其他抗肿瘤药物相似，具有治疗窗窄、毒副作用大的特点。紫杉醇引起的不良反应主要表现为过敏反应、骨髓抑制、神经毒性、消化系统反应、肌肉或关节疼痛反应、心脏毒性、脱发、皮肤毒性反应、液体潴留和血管性水肿等[3]，由于紫杉醇不良反应个体差异的存在，在一定程度上限制了其应用[4]。有文献认为，紫杉醇发生的不良反应与药物代谢酶与转运酶的基因多态性相关[5]。因此，为了减少紫杉醇不良反应的发生，提高其疗效，开展紫杉醇药物基因组学及其应用是有必要的。本文主要研究肿瘤患者CYP1B1基因多态性对紫杉醇不良反应的影响，为临床合理使用紫杉醇提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月～2018年5月我院肿瘤患者52例，其中乳腺癌17例、卵巢癌11例，食管癌11例、胃癌8例、肺癌5例，平均年龄56岁，男19例，女33例，其诊断均经组织病理或细胞学证实。血常规、肝肾功能在正常范围内，心电图及心功能正常，预计生存期>12周。

1.2 仪器与试剂

LongGene梯度PCR仪，GIS-1600凝胶成像系统（上海天能科技有限公司），WFH-201-B紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司），DYY-6C恒流电泳仪（北京市六一仪器厂），DYY-Ⅲ288型板式水平电泳槽（北京市六一仪器厂），ABI3730型DNA测序仪（美国ABI公司），血液基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化有限公司），EXTaq MIX（日本TaKaRa公司），PCR引物序列（上海迈浦生物科技有限公司），Hi-Di Formamide（美国ABI公司），琼脂糖、硼酸、溴化乙锭（上海生工生物），DNA ladder marker：DL 2000、DL 2000 plus（上海生工生物），紫杉醇注射液（Hospira Australia Pte Ltd）

1.3 治疗方案

所有患者应用紫杉醇化疗方案，给药剂量为150～175 mg/m2，连续3 h静脉滴注给药，每21天为1个周期，共治疗2～4个周期。

1.4 观察指标

药物不良反应评价参照WHO观察抗肿瘤药物急性及亚急性毒性反应分级标准。包括血液系统（白细胞、粒细胞、血紅蛋白、血小板）、胃肠道（胆红素、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、恶心呕吐、腹泻）、肾、膀胱（尿素氮、肌酐、蛋白尿、血尿）、肺、发热、过敏、皮肤反应、脱发、感染、心脏节率、心功能、神志、周围神经、便秘、疼痛等方面的毒副反应。

1.5 CYP1B1基因型检测

滴注结束后采集静脉血2 mL于乙二胺四乙酸二钠抗凝管中，按照天根血液提取试剂盒，提取血液DNA，紫外分光光度计测OD值，检测DNA浓度和纯度，保证DNA浓度>50 ng/mL;保存于-20℃备用。引物由上海迈浦生物科技有限公司合成，每管1OD，引物稀释时，加入每OD纳摩尔数×（100 μL）的灭菌双蒸H2O，得到终浓度为10 μmol/L的引物，-20℃保存备用。PCR反应体系20 μL，含Premix Taq 10 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，模板1 μL，ddH2O 7 μL。PCR反应体系20 μL，含Premixtaq 10 μL，DNA模板40 ng，上下游引物各0.2 μmol/L。PCR反应条件：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，64℃退火30 s（-0.5℃ percycle）、72℃延伸30 s，循环15次，94℃变性30 s，57℃退火30 s、72℃延伸30 s，循环20次，72℃延伸10 min，PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，割取大小对等的目的条带，按照天根回收试剂盒（DP214-03）纯化回收。采用sanger法进行测序，测序平台ABI 3730xl，用DNA Sequencing analysis软件分析测序结果。

1.6统计学方法

应用SPSS19.0软件进行统计分析，基因型分布遗传平衡吻合度检验使用Hardy-Weinberg遗传平衡检验方法进行检验，CYP1B1各位点不同基因型与紫杉醇不良反应的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 52例肿瘤患者CYP1B1基因型及分布频率

本研究共检测了CYP1B1*2（142C>G）、CYP1B1*2（355G>T）、CYP1B1*3（4326C>G）、CYP1B1*4（4390A>G）、CYP1B1*5（142C>G）、CYP1B1*5（4326C>G）、CYP 1B1*6（142C>G）、CYP1B1*6（355G>T）、CYP1B1*6（432 6C>G）、CYP1B1*7（142C>G）、CYP1B1*7（355G>T）CYP1B1*7（4326C>G）、CYP1B1*7（4360C>G）、CYP1 B1*11（171G>C）、CYP1B1*12（182G>A）、CYP1B1*13（501_502insT）、CYP1B1*14（841G>T）、CYP1B1*15（863_864insC）、CYP1B1*17（4096_4108del）、CYP1B1*18（4125G>T）、CYP1B1*19（4168C>T）、CYP1B1*20（4191G>A）、CYP1B1*21（4201G>A）、CYP1B1*22（4232_4241 dup）、CYP1B1*23（4342C>T）、CYP1B1*24（4377delG）、CY P1B1*25（4437C>T）27个基因位点，所有的基因位点均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（P>0.05），群体基因遗传平衡，样本来自同一蒙德尔群体，其分布频率见表1，结果表明52例肿瘤患者仅CYP1B1*2（142C>G）、CYP1B1*2（355G>T）、CYP1B1*3（4326C>G）、CY P1B1*5（142C>G）、CYP1B1*5（4326C>G）、CYP1B1*6（142C>G）、CYP1B1*6（355G>T）、CYP1B1*6（4326C>G）、CYP1B1*7（142C>G）、CYP1B1*7（355G>T）、CYP1B1*7（4326C>G）11个基因位点有发生突变，其余16个基因位点均为野生型。