高效液相色谱法测定酮康唑曲安奈德乳膏中酮康唑的含量
2019-07-06谭汇雄
谭汇雄
酮康唑曲安奈德乳膏是肇庆市皮肤病医院的自拟制剂, 具有抗真菌、抗炎、抗过敏、止痒等作用［1］。因乳膏基质差异较大, 2015 版《中国药典》二部收载方法操作繁琐, 经试验且有基质干扰, 不适用于此制剂［2,3］。为了更好地控制产品质量, 作者以高效液相色谱法测定此制剂中的酮康唑含量, 能较好地排除基质干扰, 且操作简单、结果准确, 现具体报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
1.1.1 仪器 日本岛津LC-15c 高效液相色谱仪；SPD-15c检测器；LCsolution 15C 工作站；FA1004 分析天平。
1.1.2 试药 酮康唑对照品(中国食品药品检定研究所, 批号：100294-201203)；酮康唑曲安奈德乳膏(肇庆市皮肤病医院, 批号：2180408、20180409、20180410)；甲醇为色谱纯；水为超纯水, 其余试剂为分析纯。
1.2 测定方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱：Wondasil C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)色谱柱；流动相：0.01 mol/L 磷酸氢二钾∶甲醇(30∶70)并用1%磷酸调节pH 至6.0；流速：1.0 ml/min；检测波长：240 nm；进样量：20 μl；理论板数按酮康唑峰计算≥2500。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取酮康唑20 mg 置于 50 ml 量瓶中, 加适量75%乙醇使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取10 ml 置100 ml 量瓶中, 加75%乙醇至刻度, 摇匀即得。
1.2.3 供试品溶液的制备 精密称取供试品约1 g, 置于50 ml 量瓶中, 加75%乙醇适量, 置80℃水浴中加热约2 min, 超声15 min, 放冷至室温, 用75%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 精密量取10 ml, 置于100 ml 容量瓶中, 加75%乙醇至刻度, 摇匀, 用0.45 μm 的微孔滤膜过滤, 即得［4］。
1.2.4 空白溶液的制备 按处方比例制成空白样品, 按“1.2.3”项下方法制备。
2 结果
2.1 系统适用性试验 分别测定对照品溶液、供试品溶液、空白溶液。见图1。对照品出峰位置无干扰峰, 酮康唑峰与其他峰分离度高, 证明该方法下空白基质无干扰。
图1 空白(A)、对照品(B)、供试品(C)色谱图
2.2 线性关系考察 精密称取酮康唑对照品47.25 mg, 置于100 ml量瓶, 用75% 乙醇稀释至刻度, 摇匀, 分别精密吸1、2、4、6、8 ml置于50 ml容量瓶中, 用75%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 依法测定色谱峰面积, 以酮康唑进样浓度(mg/ml)为横坐标, 峰面积为纵坐标, 计算回归方程, 结果表明酮康唑进样浓度在0.00945～0.0756 mg/ml 范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=3.08839e-8X-0.000432931(r=0.9997)。
2.3 重复性试验 取样品(批号：180408)配制供试品溶液5 份, 分别测定, 结果平均含量为100.2%, RSD 为0.8%(n=5)。
2.4 回收率试验 精密称取酮康唑对照品18.80 mg, 置于50 ml 量瓶, 加75%乙醇至刻度, 分别精密吸取4、5、6 ml, 按处方比例加入空白基质置于50 ml 量瓶中, 加75%乙醇至刻度, 依法测定, 平均加样回收率为99.9%, RSD 为0.9% (n=9)。
2.5 样品含量测定 取3 个批号的样品, 按“1.2.3”项下方法制备样品溶液, 分别测定含量, 结果见表2。
表2 酮康唑曲安奈德乳膏中酮康唑含量测定结果(n=3)
3 讨论
酮康唑曲安奈德乳膏是复方乳膏制剂, 因基质成分复杂, 而且基质与药物完全分离困难, 两种主药成分为酮康唑和醋酸曲安奈德, 所以排除酮康唑和醋酸曲安奈德相互之间的干扰及排除药物与基质间的干扰是建立含量测定方法需要首先解决的难题。曾有相关研究中的色谱条件试验同时测定两主药成分的含量, 结果存在基质干扰［5-10］。
在本研究中, 作者采用高效液相色谱法, 色谱柱为Wondasil C18；流动相：0.01 mol/L 磷酸氢二钾溶液：甲醇(30∶70), 并用1%磷酸调节pH 至6.0；流速：1.0 ml/min；检测波长：240 nm。结果显示, 酮康唑在0.01～0.08 mg/ml 范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997), 平均回收率为99.9%, RSD 为0.9%(n=9)。
综上所述, 本研究在参考相关研究的基础上对色谱条件进行了摸索, 酮康唑出峰时间随着pH 的降低而提前, 选择pH 为6.0 时, 出峰时间控制在12 min 左右, 能与其他峰较好分离, 方法操作简单、灵敏, 对控制酮康唑曲安奈德乳膏的质量具有重要作用。
