猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征混合感染的PCR诊断

王松梅

河南省通许县动物卫生监督所，河南通许 475400

猪瘟（CSF）又称“烂肠瘟”，是一种病毒性传染病，致病原为猪瘟病毒（CSFV），具有很强的传染性，不同年龄、品种和性别的猪都易感，猪感染后高热，呼吸困难，皮肤表面有出血点，在养猪生产中有很高的发病率，虽然我国目前使用的猪瘟兔化弱毒疫苗在一定程度上控制了猪瘟的流行，但猪瘟感染的情况仍时有发生[1]。猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称“蓝耳病”，也是一种病毒性传染病，致病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），主要引起怀孕母猪流产、死胎和木乃伊胎以及新生仔猪的高死亡率。PRRSV具有免疫抑制性，猪感染PRRSV后病猪的免疫力降低，很容易发生混合感染和继发感染，且对常规疫苗的免疫接种不产生免疫应答[2]。本文针对2018年11月某猪场发生的1例疑似2种病原混合感染的病例进行了临床和实验室诊断，最终通过PCR确诊为CSF和PRRS混合感染，诊治过程如下。

1 临床特征

该饲养场共有育肥猪450头，发病猪为2月龄育肥猪，病猪发病突然，体温升高，高热稽留，精神沉郁，嗜睡，食欲不振，呼吸困难，皮肤潮红、有点状出血点，耳朵呈蓝色，发病后曾用抗生素治疗无效，发病猪一般在5 d内死亡，剖检病死猪可见全身淋巴结肿大、出血，脾脏梗死，肾脏表面有出血斑点，肺有弥漫性炎症，心脏表面有出血点，膀胱、胆囊也有点状出血。通过临床症状和病理剖检，初步判断为疑似CSF与PRRS混合感染，无菌取发病死亡猪的淋巴结、肾脏、脾脏等病料组织送实验室检测。

2 实验室诊断

将采集的病料研磨处理，离心取上清液作为检测样品，利用病毒基因组提取试剂盒（购自北京百泰克生物科技有限公司）提取核酸，参照蒋成砚等[3]的方法分别合成CSFV和PRRSV的特异性检测引物。以提取的检测样品核酸为模板，分别利用CSFV和PRRSV检测引物对其进行一步法RT-PCR扩增（一步法RT-PCR扩增体系和扩增程序详见表1），扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳观察显示扩增片段的大小分别为 603 bp（PRRSV）和 508 bp（CSFV），这与蒋成砚等[3]的报道结果相符，说明发病猪为CSF和PRRS混合感染，通过实验室PCR检测对病例进行了确诊。

表1 一步法RT-PCR扩增体系和扩增程序

3 防控措施

疫情确诊后，病猪应及时隔离饲养，病死猪全部深埋并无害化处理，病猪的粪便也做好无害化处理，猪场全部用3%氢氧化钠彻底消毒处理，对发病猪应用CSF与PRRS高免血清进行治疗，同时应用抗生素治疗，防止继发感染。对猪场内健康猪群接种CSF疫苗，间隔1周后接种PRRS疫苗，通过一系列的防控措施，猪场疫情得到有效控制，没有新发和死亡病例。

4 讨论

本次疫情的发生可能与气温骤降导致猪抵抗力下降有关，通过观察，养殖场的饲养管理比较混乱，没有按照免疫程序进行常规免疫接种。随着规模化养殖业的发展，疾病表现形式更加复杂和多样化，如果饲养管理不到位，猪场很容易发生猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪圆环病毒等疾病的混合感染[4]。CSF和PRRS的防控还是以疫苗免疫为主，由于PRRSV有很强的免疫抑制性，所以CSF和PRRS疫苗的免疫接种不能同时进行，此外也要做好其他常见疫病疫苗的免疫接种工作。发生疫情时，应对疑似感染猪及时隔离饲养，根据临床症状做出初步诊断，确诊要利用实验室的检测方法，PCR方法是疾病的快速诊断方法，通过对核酸片段的特异性扩增，可以实现对临床病料的快速诊断，是目前应用最广泛的实验室检测方法。鉴于此，本研究采用实验室PCR检测方法，确诊为CSF和PRRS混合感染，确保了诊断结果的准确和可靠。多病原混合感染使疾病的临床表现更加复杂，为了防止混合病原感染情况的发生，规模养殖场要做好养殖饲养管理，保持环境美化和清洁，加强相关疾病的检验检疫，冬季注意猪舍的防寒保暖，避免拥挤和潮湿，低温和不良的饲养环境会造成猪的抵抗力下降。只有加强平时的饲养管理，定期进行疫苗的免疫接种，才能保持群体的免疫水平，控制疾病的暴发和流行，减少由疫病造成的养殖经济损失。