T淋巴细胞亚群检测在口腔扁平苔藓治疗中的应用价值
2019-06-22杨令云
杨令云
口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是继复发性阿弗他溃疡外最常见的口腔粘膜病[1],患病率0.5%~2.2%[2-3],女性多于男性,为中老年人的常见口腔粘膜病。患者病变部位常有粗糙、木涩、烧灼、疼痛不适等症状,由于OLP的病因和发病机制目前尚不明确,其病程迁延,治疗棘手,有癌变危险,对患者身心造成较大危害,因此合理治疗对OLP患者具有重要意义[4]。近年来,随着OLP与T淋巴细胞亚群相关性的研究进展,普遍认为机体免疫失衡在疾病的发生、发展中占有重要地位,机体免疫状态不同,治疗措施迥异[5]。本文通过回顾性研究评估OLP患者外周血T淋巴细胞亚群检测与药物选择的关联,以期为OLP的合理治疗提供参考依据,现报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
纳入2010-03~2017-02在郑州市第一人民医院口腔门诊病理诊断确诊,具有OLP典型黏膜损害及症状的患者367 例。
纳入标准:根据病史、临床表现、病理学检查诊断为OLP;年龄大于18 岁。血常规及肝肾功能检测结果正常,且自愿知情并接受治疗。
排除标准: 近2个月接受免疫治疗,有肝肾及其它严重疾病的患者,妊娠哺乳或有妊娠计划者,依从性差,不能按时接受随访。
1.2 分组
纳入患者均在治疗前进行外周血T淋巴细胞检测,根据外周血T细胞亚群计数的CD4+/CD8+比值的正常值(0.68~2.47)上限将选取的病例分为CD4+/CD8+比值升高组和比值正常及以下组。
1.3 治疗方法
2 组患者均给予口服硫酸羟氯喹片,同时两组糜烂型均在局部糜烂处擦涂曲安奈德软膏; 硫酸羟氯喹片(上海中西制药有限公司,规格0.1 g,批号H19990263)口服,每次0.1 g, 2 次/d, 治疗3 个月; 曲安奈德软膏[香港澳美制药厂,医药产品注册证号HC20120023,规格5 g/支,0.1%(w/w)]外用,早、中、晚餐后,生理盐水漱口后在局部糜烂面上擦涂药膏; 在治疗前及治疗后6 个月进行OLP患者外周血T淋巴细胞亚群检测。观察2 组患者治疗3 个月后的疗效和6 个月后 CD4+/CD8+比值变化及复发情况。
1.4 检测指标
1.4.1 临床判定标准 按照《口腔扁平苔藓诊疗指南(试行)》[6],将OLP分为无症状非糜烂型、有症状非糜烂型、糜烂型。本研究只纳入有症状非糜烂型和糜烂型OLP。对入选患者进行定期复诊,治疗3 个月结束停药时由2 名主治医生以上职称口腔粘膜病专科医师同时进行疗效评估,记录损害部位、范围、疼痛等症状。疗效标准按照2005 年中华口腔医学会粘膜病专业委员会制定的OLP(萎缩型、糜烂型)评价标准[6]; ①显效:患者自觉疼痛完全消失;治疗病变部位充血、糜烂完全消失,白色条纹无或轻微; ②有效:患者自觉疼痛减轻;治疗后病变部位充血、糜烂面积缩小,白色条纹减少; ③无效:患者自觉疼痛无减轻或加重,治疗后病变部位充血、糜烂面积无变化或增加,白色条纹无变化或增加。总有效率=(显效人数+有效人数)/总治疗人数×100%。治疗结束6 个月时复查随访显效患者了解是否复发。
1.4.2 血清T淋巴绝对计数检测 367 例纳入患者药物治疗前与治疗6 个月后进行外周静脉血采集,采集量2 ml,标本以EDTA作为抗凝剂,使用美国BD公司生产的FACSCantoII流式细胞仪进行CD3+、CD4+、CD8+、 CD4+/CD8+T细胞亚群检测,所用试剂为碧迪医疗器械(上海)有限公司提供的配套试剂: ①抗体CD3-FIC/CD8-PE/CD45-PercP/CD4-APC:CD3-FIFC/CD16+56-PE/CD45-PercP/CD19-APC四荧光抗体;②Trucount tube(内含数量已知的Beads);③FACS Lysing Solution(溶血素)(10×,使用前蒸馏水稀释成1×)。
1.4.3 方法 ①取2 只Tnru Count Tube,编号A和B; ②用反向加样法在Tube中加入50 μl充分混匀的抗凝全血,注意不要碰到试管底部的微球(Beads); ③取20 μl CD3/CD8/CD4/CD45/CD4抗体加入到A管中,取20 μl CD5/CD16+56/CD45/CD19标记的抗体加入B中,注意不要碰到血,涡旋混匀,室温避光放置15~20 min; ④取出加入450 μl 1×FACS溶血素,充分混匀,避光放置15 min; ⑤24 h上机用FACSCCanto.Climical软件获取2 500 个淋巴细胞进行检测,上机前应充分混匀。
1.5 统计学处理
数据统计分析应用SPSS 19.0中文版,组间比例差异采用χ2检验, 2 组均值比较采用T检验,检验水准α=0.05。
2 结 果
2.1 OLP病例依据CD4+/CD8+比值分组情况
选取符合标准的OLP病例367 例,CD4+/CD8+比值升高的病例136 名,其中男性56 名、 女性80 名、有症状无糜烂型71 名、 糜烂型65 名。 其余231 例CD4+/CD8+比值正常或降低患者作为对照组,其中男性73 名、女性158 名、有症状无糜烂型178 名、糜烂型53 名。病程3 个月~5 年不等, 2 组病例的基本特征分布差别无统计学意义(表 1)。
表 1 OLP病例基本特征及CD4+/CD8+比值分组
Tab 1 Basic characteristics of OLP cases and the CD4+/CD8+grouping
变 量比值升高组比值正常及以下组χ2/TP值性别[n(%)] 男56(36.76)77(33.33)2.250.13 女80(73.24)154(77.67)年龄(岁) 41.2±4.540.8±4.40.930.35病程(年) 3.58±0.293.61±0.310.620.54类型[n(%)] 糜烂型65(0.48)96(0.42)1.350.26 非糜烂型71(0.52)135(0.58)
2.2 临床疗效比较
治疗结束3 个月时,CD4+/CD8+比值升高组中有111 例治疗结果为显效,占81.62%,有效病例19 例,占13.97%,无效6 例,占4.41%,治疗总有效病例133 例,有效率95.59%。CD4+/CD8+比值正常及以下组病例治疗显效、有效及无效分别为139 例、25 例和67 例总有效病例164, 有效率70.99%。 2 组间显效率和总体有效率差异有统计学意义(P<0.01)(表 2)。比值升高组的疗效优于正常及以下组。
表 2 OLP病例2 组治疗效果 [n(%)]
Tab 2 Treatment effect of the 2 groups of OLP
[n(%)]
2.3 免疫学检查结果
比值升高组治疗6 个月时的CD4+/CD8+比值下降,治疗前、后CD4+/CD8+比值比较,差异有统计学意义(T=25.81,P<0.01)(表 3)。
比值正常及以下组治疗6 个月时CD4+/CD8+比值无明显变化,治疗前、后CD4+/CD8+比值比较,差异无统计学意义(T=1.15,P>0.05)(表 4)。
表 3 CD4+/CD8+比值升高组治疗前后血清T细胞亚群变化
Tab 3 Changes of serum T cell subsets of the cases with increased ratio of CD4+/CD8+before and after treatment
时间CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+治疗前745±65.2521±34.2207±31.12.52±0.13治疗后1 900±55.11 108±74.8748±81.11.48±0.47①
注: ①治疗前后比较,P<0.01
表 4 CD4+/CD8+比值正常及以下组治疗前后血清T淋巴细胞亚群变化
Tab 4 Changes of serum T lymphocyte subsets in the cases with normal and lower CD4+/CD8+ratio before and after treatment
时间CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+治疗前1 300±137.1579±25.4623±113.20.93±0.21治疗后912±151.1360±74.8500±81.10.89±0.51
2.4 2 组停药后复发率比较
治疗结束6 个月时对2 组治疗有效病例进行复查随访。结果显示CD4+/CD8+比值升高组130 例治疗效病例中有6 例复发,复发率4.62%,而比值正常及以下组有43 例复发,复发率26.22%, 2 组间比较差异有统计学意义(χ2=30.69,P<0.01)(表 5)。
3 讨 论
OLP病因尚不明确,但可能与遗传因素、自身免疫、感染、精神因素有关[7],发病机制目前认为是自身细胞毒性CD8+T细胞介导的上皮基底细胞凋亡引发[8], 目前药物治疗仍为主要的治疗方法, 诊疗指南推荐使用糖皮质激素及免疫抑制药物等,如全身使用泼尼松、羟氯喹、沙利度胺、转移因子、维A酸等[6]。有学者[9]指出,OLP患者存在细胞免疫缺陷,不同临床类型OLP患者的免疫功能不同。严昌建[10]、牟婧等[11]应用他克莫司、地塞米松免疫抑制剂通过抑制IL-6、 IL-8和TNF-α表达调整机体免疫达到治疗效果。苏葵等[12]通过胸腺肽对OLP患者相关细胞因子的影响研究,运用胸腺肽对31例确诊的OLP患者治疗取得了满意效果。在OLP治疗临床实践中,免疫抑制剂与免疫增强剂都能取得可靠的临床疗效,关键点在于及时的对OLP患者进行机体免疫状况的评估,并针对性进行机体免疫调节,就成为临床治疗OLP的关键点。
表 5 2 组停药后复发率比较
Tab 5 Comparison of recurrence rate between the 2 groups after drug withdrawal
分组有效复发复发率(%)比值升高组13064.62比值正常及以下组1644326.22①
注: ①组间比较,P<0.01
羟氯喹具有抑制促炎症细胞因子产生和抑制T细胞介导的免疫活化作用等[13]。曲安奈德软膏能在病损部位迅速达到有效浓度,增强免疫抑制剂的效果且不良反应轻,两者联合免疫抑制作用可增强[14]。
本研究通过观察136 例CD4+/CD8+比值升高,机体免疫功能亢进的OLP患者,有针对的选择使用口服具有免疫抑制作用的羟氯喹片(糜烂型外用曲安奈德软膏),使临床治疗效果明显提高,有效率明显高于比值正常及以下组,且治疗后6个月的OLP复发率也明显低于比值正常及以下组。
随着对T淋巴细胞亚群的深入研究,淋巴细胞亚群在相关疾病的诊疗中的作用日趋显著[15],越来越多的免疫检测应用于OLP的治疗和预后判断,使用最多的是T淋巴细胞亚群的检测。T淋巴细胞来源于骨髓的淋巴样干细胞,在胸腺中发育分化和成熟并分化为CD4+T细胞和CD8+T细胞[16],其中CD4+细胞为辅助T细胞(helpef T cell,Th),在细胞免疫中发挥主要作用,CD8+T细胞为细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell,Tc/CTL)是一类具有杀伤活性的效应细胞。正常状态下T细胞各群维持一定比例,尤其是CD4+/CD8+的比值稳定和平衡是机体发挥正常免疫功能的关键因素[15]。CD4+/CD8+比值可直接反应细胞免疫状态和两者之间相互平衡关系[17],当体内T细胞数量、比例发生异常改变时,就会出现免疫功能紊乱,T细胞亚群平衡失调可能是OLP的重要致病因素[18],临床观察发现[19]可通过调节T淋巴细胞分类比值,改善机体免疫状态来治疗OLP。本文观察研究表明OLP患者外周血T淋巴细胞CD4+/CD8+比值升高,机体免疫功能亢进,进行针对性的免疫抑制治疗后,OLP患者临床症状达到明显改善,且比值升高组治疗后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数CD4+/CD8+比值得到明显改善。反之,使用免疫抑制剂治疗,则效果不佳。
OLP病损多呈慢性迁延、反复波动的过程[7]。治疗6个月时复查评估除关注OLP患者主、客观症状外,还需关注患者T淋巴细胞亚群特别是CD4+/CD8+比值变化、肝肾功能以及视网膜情况,并对患者进行自身免疫状况的再评估,根据患者免疫状况选择调整治疗用药。
综上所述,通过OLP患者外周血T淋巴细胞亚群检测,评估患者机体免疫状态,有助于指导临床治疗及预后评价。