孕妇血清可溶性B7-H4水平与胎膜早破早产之间的关系研究*

张慧雅，魏建勋，刘秋霞

(1.西电医院妇产科，西安 710077；2.延安大学附属医院产科，陕西延安 716000)

免疫耐受在女性妊娠过程中扮演着至关重要的角色。T淋巴细胞具有识别外来抗原、使机体产生炎症反应的能力。在女性妊娠期间，特异性免疫耐受反应可以抑制母胎交互作用时T细胞的此类功能，进而阻止母体对胎儿的抗原进行免疫防御的过程[1]。与此同时，母体体内一定程度的炎症反应是确保胎儿成功着床和成功分娩的所需因素。免疫耐受是女性妊娠过程中胎儿正常发育所必需的反应，母体对外来细胞缺乏适当的耐受能力，会诱发妊娠并发症[2]。未足月胎膜早破 (preterm premature rupture of membranes，pPROM)的发生率占妊娠女性人群的2%～3.5%，其与早产相关联，这是影响新生儿发病和死亡的主要因素[3-5]。虽然其发病机理尚不明确，但与感染存在一定关系[6-7]。本研究旨在评估免疫耐受因子[血清可溶性B7-H4(soluble B7-H4， sB7-H4)] 与胎膜早破早产之间的关系。通过分析最终发展为pPROM和PROM的患者在妊娠期为11～13周时血清中sB7-H4的浓度，并将其与正常妊娠女性进行比较，最终通过结果分析来揭示sB7-H4与胎膜早破早产之间的关系。

1材料与方法

1.1 研究对象 选择2008年4月～2015年12月于西电医院妇产科接受产前检查和分娩的女性为研究对象。纳入标准：①年龄18～35岁；②人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)筛查阴性；③患者临床资料完整。排除标准：①狼疮抗凝物阳性、血浆中抗心磷脂抗体≥40 GPL KU/L或血浆中同型半胱氨酸≥25 μg/L；②相关性激素(如绒毛膜促性腺激素)或孕甾酮类药物使用史；③血浆免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)不足，清蛋白或免疫球蛋白过敏史；④抗炎药物或抗凝药物长期服用史；⑤女性子宫异常或双亲染色体异常；⑥其它慢性疾病或糖尿病史。本研究经医院伦理道德委员会审核通过，所有研究对象均签订知情同意书。

研究共纳入41例胎膜早破患者和35例健康妊娠女性。将41例胎膜早破患者分为2组，其中一组为妊娠期<37周时诊断为未足月胎膜早破的患者(pPROM组，n=22)，包括绒毛膜羊膜炎患者7例，非绒毛膜羊膜炎患者15例；另一组为妊娠期≥37周时胎膜破裂自然分娩或行剖宫术的患者(PROM组，n=19)。羊膜破裂的鉴定根据患者临床资料调查、阴道羊水流出性检测、阴道酸碱度(pondus hydrogenii，pH)测定、超声检查和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors -1，IGF-1)及结合蛋白检测等手段进行。35例健康妊娠女性纳入对照组。

1.2 试剂和仪器 抗凝采血管(美国BD公司)；ELISA检测试剂盒(德国BIOZOL公司)；多功能酶标仪(美国MD公司)。

1.3 方法

1.3.1 血样的采集和处理：于受试者肘静脉处采集外周血9 ml，置于枸橼酸钠(浓度为0.129 mol/L)抗凝管中，并贮存于4℃环境中。为避免细胞裂解，样本需在采集后4 h内完成处理并贮存在-80℃，检测(样品在1个月内完成检测)。

1.3.2 血清标本中sB7-H4蛋白定量分析：采用酶联免疫吸附法测定血清中sB7-H4的蛋白浓度，具体操作参照ELISA试剂盒(BIOZOL，Eching，Germany)说明书进行。

2结果

2.1 pPROM组、PROM组和对照组的临床基本资料比较 见表1。pPROM组、PROM组和对照组在妊娠年龄、BMI值和妊娠次数之间比较，其差异均无统计学意义(P>0.05)。pPROM组、PROM组和对照组在分娩时孕周、剖宫产率、新生儿出生体重、5 min Apgar评分、C反应蛋白(C reactive protein，CRP)水平和白细胞(white blood cell，WBC)计数间的差异均有统计学意义(P<0.05)；pPROM组患者血清中sB7-H4浓度高于PROM组患者和对照组女性，其差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 pPROM组、PROM组和健康对照组产妇和新生儿临床基本特征

2.2 sB7-H4浓度对患者临床结局的预测 见表2。sB7-H4浓度在区分pPROM组与对照组时，其最佳临界值为13.01 ng/ml、特异度为96.5%、敏感度为62.1%；血清中sB7-H4浓度的增加(每ng/ml水平)会提高pPROM发生的风险，其优势比(odds ratio， OR)为1.52(95% CI：1.09～1.88，P=0.001)。

表2 PROM组和pPROM组与对照组相比较ROC曲线分析结果

2.3 急性绒毛膜羊膜炎和非绒毛膜羊膜炎pPROM患者的sB7-H4浓度比较 患有pPROM并伴有急性绒毛膜羊膜炎的患者，其妊娠早期血清中sB7-H4的浓度高于非绒毛膜羊膜炎pPROM患者，但差异无统计学意义(P>0.05)；两组患者在妊娠年龄、BMI值、妊娠次数、流产次数、pH值、WBC计数间的差异均无统计学意义(均P>0.05)；两组患者在分娩时孕周、新生儿出生体重、5 min Apgar评分、CRP水平间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。

3讨论本研究表明妊娠期<37周即发展为pPROM的患者、妊娠期≥37周后发展为PROM的患者与健康妊娠女性相比，pPROM患者妊娠早期血清中sB7-H4的浓度较高，其差异有统计学意义(P<0.05)；此外，本研究还发现急性绒毛膜羊膜炎pPROM患者中妊娠早期sB7-H4的浓度处于较高水平。综上，本研究结果显示对于妊娠早期女性，其血清中sB7-H4的浓度可用于预测发展为pPROM的可能性。

目前相关研究已表明pPROM的发生与女性妊娠期间免疫耐受功能紊乱相关联[8]。本研究中pPROM组妊娠早期血清中过高的sB7-H4浓度表明在此阶段这些女性的免疫系统活性显著增加。在女性怀孕的前三个月内，抗炎性Th2细胞占主导地位，主要用于维持正常的胎儿发育；反之，在此期间内如果Th1细胞占主导地位，母体的免疫系统活性增加，胎儿的正常发育就很可能会受负面影响[9]。sB7-H4在免疫系统中的功能尚不明确，XIE等[10]针对老鼠模型的研究表明sB7-H4作为诱饵分子可以阻断细胞相关性B7-H4的抑制功能，导致T细胞介导的自身免疫反应增强。但也有研究显示sB7-H4作为T细胞负调节分子可以抑制宿主的免疫力，使肿瘤可以逃脱免疫系统的监控[11-12]。ILIAN等[13]的研究表明不同来源的sB7-H4具有不同的结构和功能。此外，相关报道也显示对于分娩期间的产妇，羊膜破裂同免疫反应向Th1转换相关联。B7-H4抑制Th1免疫反应[14]，这可用于解释本研究中所观测到的pPROM组患者血清中sB7-H4浓度升高。目前对于围产期的分娩动因研究显示，分娩的发动与促炎症因子的表达具有相关性，如IL-6和IL-8因子[15-16]；JENESSA等[12]还观测到IL-6和IL-10因子可以刺激巨噬细胞中B7-H4的表达，以维持慢性感染条件下母体足够的免疫耐受。这可用于解释发展为pPROM的患者其血清中sB7-H4浓度处于较高水平这一研究结果，尤其是急性绒毛膜羊膜炎pPROM患者。因此，免疫系统活性对妊娠期母体及胎儿具有一定程度的适应性，主要用于维持正常的胎儿发育和产妇分娩。

对妊娠期间免疫进程和免疫系统活性更深层次的研究，有助于制定新的治疗策略以预防胎儿早产。探寻生物标记分子既有助于识别有早产风险的高危患者，也有助于确定适当的早产预防策略。尽管如此，目前尚无有效的生物预测分子可以减少无分娩症状女性的早产或延迟分娩。本研究中女性妊娠早期sB7-H4的浓度在区分pPROM组和对照组之间表现出较高的特异度和敏感度，这表明sB7-H4可作为潜在的生物标记分子用于预测妊娠期间免疫系统活性的增加和妊娠并发症发生的风险。鉴于本研究的局限性，对于sB7-H4作为预测pPROM发生风险的标记分子尚需更多的前瞻性研究，以便更好地应用于临床，以采取相应的治疗措施减少早产的发生。