四种梅毒血清学检测方法在梅毒抗体不确定样本的分析及评价*

王欣俞，赵晋文，张延海，高雅婷，孙 斌，高德禄，魏殿军，郭奕阳

(1.河北燕达医院检验科，河北廊坊 066251；2.中国人民解放军第三○九医院检验科，北京 100091；3.河北医科大学第四医院检验科，石家庄 050000)

梅毒是一种全球流行的传染病，被列为《中华人民共和国传染病防治法》乙类防治管理的病种及《性病防治管理办法》中5种重点防控性病之一[1]。有研究表明，男男性行为人群中HIV与梅毒共感染率高达50%～70%[2]，梅毒的诊断主要根据病史、临床表现和实验室血清学检测。梅毒螺旋体抗体血清检测是目前临床常用的检测方法[3]，在梅毒的诊断方面起到重要的作用[4]。选择不同的检测方法，由于敏感度和特异度不同，可能造成漏检或者误诊，严重影响就诊者的身心健康，并导致医疗纠纷[5]。本研究对经化学发光微粒子免疫检测法(chemiluminescence micropartide immunoassay，CMIA)梅毒螺旋体抗体筛查的不确定标本进行梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验(treponema pallidum-western blot，TP-WB)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA)及快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagin，RPR)法检测比对及分析评价，现报道如下。

1材料与方法

1.1 研究对象 回顾性纳入2018年1月～2019年1月期间，河北燕达医院27 831例经CMIA法梅毒螺旋体抗体筛查样本，其中选取检测结果S/CO比值在1～10.0内反应性的不确定标本190例为研究对象，其中男性76例，女性114例，平均年龄45±17岁。

1.2 试剂和仪器 CMIA检测法试剂盒及ARCHITECT i2000仪器(美国雅培公司)；TPPA检测法试剂(日本富士公司的瑞必欧珠式会社)；TP-WB检测试剂盒(德国欧蒙公司)；RPR试剂(上海科华公司)。

1.3 检测方法 抽取患者空腹静脉血5 ml，3 000 r/min离心10 min，血清样本加样，-20℃保存。CMIA法：采用CMIA检测梅毒特异性抗体，仪器测得样本发光值，计算反应物浓度，依据临界值对结果进行判断，S/CO≥1为梅毒螺旋体抗体反应性，S/CO<1为非反应性。RPR法：取50 μl血清滴加反应卡片，加50 μl抗原悬液，微量旋转仪器震动卡片8 min后观察结果。TPPA法：在25 μl待测血清中加入100 μl稀释液混匀，吸取25 μl混合液滴加微孔板，再加稀释液25 μl倍比稀释，重复上述操作，混匀静止2 h后观察结果。TP-WB法：采用重组梅毒螺旋体基因蛋白抗原，通过含电泳转移硝酸纤维素膜分离的梅毒螺旋体抗原检测膜条置于全自动免疫印迹仪EUROBlotMasterll检测，通过EUROLineScan软件读取反应结果。以上所有操作和结果判定均严格按照作业指导书进行，实验同时设置阴性和阳性质控。

1.4 观察指标统计 CMIA，RPR，TPPA和TP-WB检测梅毒螺旋体抗体的结果；对比梅毒检测方法中CMIA，RPR和TPPA法的灵敏度、特异度、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值。

2结果

2.1 四种方法检测梅毒螺旋体抗体的结果 见表1。以TP-WB检测结果为标准，检出56例阳性，134例阴性；47例样本CMIA与TPPA的结果不一致，CMIA检测均阳性，TPPA检测47例阴性、143例阳性。2例样本TPPA检测阴性，经TP-WB确证阳性；56例样本CMIA与TP-WB的结果不一致，CMIA检测均阳性，经TP-WB确证56例阳性，134例阴性；2例样本RPR检测阳性，经TP-WB确证阳性。

表1 CMIA，RPR，TPPA和TP-WB检测 梅毒螺旋体抗体的结果(n)

2.2 TP-WB检测在初筛梅毒抗体不确定样本的诊断价值 见表2。1

表2 三种梅毒检测方法结果比较

90例弱反应性结果进行不同试验方法学的比对，以TP-WB阳性结果为真阳性进行分析，最终56例阳性，134例阴性。TP-WB与CMIA阳性符合率为29.5%(56/190)；CMIA与TPPA阳性符合率为75.3%(143/190)；TPPA结果与WB-TP-IgG阳性符合率为28.4%(54/190)，误诊率为66.42%(89/134)，漏诊率为3.57%(2/56)，阴性预测值为95.74%(45/47)，RPR现正感染阳性预测值100%(2/2)、阴性预测值为100%(188/188)。

3讨论梅毒是由苍白梅毒螺旋体引起的一种具有复杂临床表现的慢性接触性传染病，传播途径多、传染性强，对社会和人类健康造成极大的危害。2015年国家卫生健康委员会发布《全面控制艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作》通知[2，6]。

目前，我国梅毒血清学检测策略有2种：非特异性梅毒螺旋体血清试验、梅毒螺旋体抗原血清试验[7]。非特异性梅毒螺旋体血清试验常选用RPR或甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test，TRUST)[8]；本项目实验室方法CMIA，TPPA及TP- WB为特异性梅毒螺旋体抗原血清试验。

CMIA法易于批量样本自动化检测，具有高效率、无携带污染。TPPA法检测判定以产生可见的红色凝集反应，即免疫凝集反应[9]。TP-WB法检测使用重组梅毒螺旋体基因蛋白抗原(TpN47，tmpA，TpN17，TpN15)的IgG抗体，是目前较为公认的梅毒特异性抗体确证方法[10]。熊继红等[11]对雅培CMIA法结果S/CO值≥10无需复查可直接发出结果，准确率达到100%；张晓红等[12]对843份TPPA试验阳性标本中，S/CO值≥10时100%为阳性。实验室工作人员在梅毒检测结果强反应性时，检测结果直接签发，为临床提供诊断依据。而弱反应性结果时，有学者报道[13]，梅毒检测试验方法学不同厂家存在特异性差异。我们的课题研究中，梅毒检测弱反应性结果需特异性较高的TP-WB检测方法学进行鉴别诊断。CMIA检测方法灵敏度高，特异性低；RPR检测可以排除梅毒活动性感染；TPPA检测方法的阴性预测值可以排除阴性结果；TP-WB检测方法可以为临床诊断提供实验室结果的确证。

综上所述，实验室梅毒血清方法学的检测存在局限性，多种因素可导致检测结果的假阳性，目前还没有一种试验方法能完全满足临床需求，对于检测弱反应性结果不一致的标本应首选用免疫印迹法检测确证，避免临床诊断中漏诊或者误诊发生。