APP下载

支原体肺炎儿童与健康儿童血清拉曼光谱检测的差异性研究*

2019-06-21林小平刘晓良苏艳丽

现代检验医学杂志 2019年3期
关键词:曼光谱拉曼磷脂

林小平,刘晓良,余 瑶,赵 芳,苏艳丽

(商洛市中心医院检验科,陕西商洛 726000)

近年来,肺炎支原体肺炎(mycoplasmapneumoniaepneumonia,MPP)在儿童中的发病率呈现出逐渐上升的趋势,尤其是3~7岁的儿童,发病率约为44%,并且患儿的年龄趋于低龄化[1-2],而肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae,MP)是儿童发生MPP的主要原因[3]。目前对MP的实验室诊断方法主要有病原体分离培养技术和核酸检测技术、血清学诊断技术等方法,但是这些检测方法目前都存在一定的局限性[4]。基于现有的MP诊断状况,发展一种高灵敏度和便捷的检测手段,对于该病的早期诊断具有非常实用的医学价值。

拉曼光谱技术分析速度快、所需样品浓度低、无需预处理样品、不破坏样品、灵敏度较高,现已成为生物医学诸多研究领域中的有力武器[5]。本研究检测MPP患儿和健康儿童的血清拉曼光谱信号,研究其差异性,初步探索将拉曼光谱检测技术应用到儿童MPP诊断的可行性。

1材料与方法

1.1 研究对象 选取商洛市中心医院2017年4~12月收治的MPP患儿血清100例作为实验组,年龄在8个月~14周岁。另选取同期正常儿童血清100例作为对照组,所有样本均在早晨空腹抽血分离血清待测。

1.2 仪器 采用HORIBA公司的XploRA PLUS全自动显微拉曼系统。

1.3 方法 根据本课题组优化好的血清样本测试方法,选取血清2.5 μl,点至载玻片上,静置孵育30 min;使用全自动显微拉曼系统检测。测试条件如下:激光波长532 nm,光栅1 800 g/mm,激光功率100%,采集时间25 s,采集次数1次,光谱范围400 cm-1~1 800 cm-1。为了减少电噪音、宇宙射线以及光功率波动等不利因素的影响,每个样本测量3次,取平均值,所得光谱进行归一化处理后用于分析。

2结果

2.1 两组血清的拉曼图谱 见图1。在位移490.47,1 152.93,1 515.33,1 653.34cm-1处两组血清的拉曼光谱峰强弱存在差异性。

图1 两组血清的拉曼图谱(a:健康;b:MPP;c:差异谱)

2.2 拉曼光谱峰强度比较 见图2。与对照组相比,在位移1 152.93与1 515.33cm-1处实验组血清拉曼光谱峰得到了增强,两组之间的差异有统计学意义(t=2.027,2.028,均P<0.05),在位移490.47与1 653.34 cm-1处实验组血清拉曼光谱峰发生了减弱,其中在位移490.47 cm-1处两组之间差异无统计学意义(t=1.260,P>0.05),在位移1 653.34 cm-1处两组之间差异有统计学意义(t=2.137,P<0.05)。

2.3 拉曼谱峰归属 查阅资料,分析后发现血清各拉曼光谱峰大部分归属于酪氨酸、苯丙氨酸、β-胡萝卜素、酰胺Ⅰ、α螺旋、磷脂、N-乙酰基葡萄糖、D-葡萄糖和葡萄糖醛酸等物质。其中在位移1 152.93,1 515.33 cm-1处拉曼峰主要归属于β-胡萝卜素;在位移1 653.34 cm-1处拉曼峰归属于酰胺Ⅰ、α螺旋和磷脂,见表1。

表1 拉曼光谱峰归属(单位:cm-1)[6-8]

*P<0.05

3讨论肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae,MP)是一种原核病原微生物,其大小介于病毒和细菌之间。它是儿童呼吸道感染的重要病原体之一,临床表现复杂多样,发病率逐年上升[9-10]。目前对于MP的检测,无论是病原体分离培养技术、核酸检测技术,还是血清学诊断技术,都存在着一些缺陷[4]:如病原体分离培养技术是诊断MP感染的有效方法,能够直接检测到MP,但是此法检出率低、培养条件严苛、耗时较长、操作复杂, 且在MP感染早期不敏感, 因而临床使用上常受到限制;核酸检测技术虽然敏感性高,但是容易受到污染,假阳性率较高,操作方法复杂,使得目前临床使用受限,大多医院并未广泛应用;血清学诊断技术主要是检测患儿血清中的MP抗体,但阳性结果也不能确诊感染了MP,需要与临床症状结合来进行分析,而部分患者感染MP后不产生抗体或者产生的抗体量特别少,不能被检测出来[11-12]。现有的检测方法的不完善使得MPP的诊断时间延后,影响患者的治疗,因此发展一种灵敏度高、检测时间短、操作简便的MP检测方法具有重要意义。

拉曼效应普遍存在于一切分子中,无论是气态、液态和固态,而且每一种物质的拉曼光谱都只与其自身的分子结构有关,与入射光频率无关。近年来,拉曼光谱技术在物质结构分析和物质定性、定量分析等方面的应用得到了快速发展。血清拉曼图谱已经可以作为一种指纹图谱,来反映不同机体内蛋白质、核酸、脂质等生物分子的差异性,用来推断机体生理变化,进而进行相关疾病的诊断[5]。本课题对MPP患儿和健康儿童的血清研究表明,小儿感染MP后,血清拉曼光谱峰的强弱发生了改变。查阅资料,分析相关拉曼光谱峰的归属,发现造成这种改变的原因可能是MPP患儿血清中β-胡萝卜素水平的升高和酰胺Ⅰ与磷脂水平的降低。据此,可以说明MPP患儿与健康儿童血清拉曼光谱信号存在差异性,这就为血清拉曼光谱检测技术应用于儿童MP检测奠定了相关理论基础。但本实验检测的标本量有待扩大,条件需要进一步优化,而且需要研究血清中β-胡萝卜素、酰胺Ⅰ和磷脂水平与MP的相关性,从而为儿童MP的快速检测提供便利。

猜你喜欢

曼光谱拉曼磷脂
馆藏高句丽铁器的显微共聚焦激光拉曼光谱分析
Preoperative maximal voluntary ventilation, hemoglobin, albumin, lymphocytes and platelets predict postoperative survival in esophageal squamous cell carcinoma
大黄酸磷脂复合物及其固体分散体的制备和体内药动学研究
柚皮素磷脂复合物的制备和表征
基于拉曼光谱的面团冻结过程中水分分布的在线监测
辣椒碱磷脂复合凝胶的制备及其药动学行为
白杨素磷脂复合物的制备及其药动学行为
拉曼效应对低双折射光纤偏振态的影响
各向同性光纤中拉曼增益对光脉冲自陡峭的影响
实用拉曼光谱引论