利用色谱法测定食品中可溶性磷酸盐含量

文/钱娟娟

采用色谱法测定可溶性磷酸盐含量 // 由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的Aminex HPLC柱，通过离子调节分配层析技术，在特定的色谱条件下，将可溶性磷酸盐以PO43-形式被检测出来，并用外标法定量。

磷酸盐常被作为重要的食品配料和功能添加剂，然而膳食中磷酸盐食量过多，会降低人体对钙的吸收，造成缺钙。同时，磷酸盐又是引起水体富营养化的关键因素之一，是评价水体水质的重要指标。所以对于可溶性磷酸盐的测定显得尤为重要。目前实验室广泛采用的测定磷酸盐的方法——钼锑抗分光光度法，虽然操作简单，但其络合物稳定时间短，检测限高，灵敏度低，不利于样品中微量磷的测定。

为了提高检测灵敏度，降低检测限，本方法采用由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的Aminex HPLC 柱，通过离子调节分配层析技术（包括离子排阻、离子交换、正相和反相分配、分子量排阻和配体交换），在特定的色谱条件下，将可溶性磷酸盐（包括H2PO4-、HPO42-、PO43-）以 PO43-形式被检测出来，并用外标法定量。

表1 仪器分析条件。

表2 标准曲线的七个梯度浓度配制方法。

实验部分

仪器与试剂

1.仪器

高效液相色谱仪,分析条件，如表1所示。

2.试剂

磷酸二氢钾：GB/T 1274-2011

高纯水： MILLI-Q超纯水器制备

实验步骤

1.制作标准曲线

称取0.0266g分析纯磷酸二氢钾（99%），用适量水溶解后转移至100ml容量瓶中，定容后混匀，称为磷酸二氢钾标准母液。取7个1.5ml的离心管分别编号为 1、2、3、4、5、6、7，按表2所示，将磷酸二氢钾标准母液稀释成7个浓度梯度。

2.绘制标准曲线

将上述标准系列置于离心机中离心，从低至高浓度依次进样，进样体积为20ul，得到不同浓度磷酸盐的色谱图，如图1所示。记录7个梯度的磷酸盐浓度（以PO43-计，g/L）对应的峰面积数值，如表3所示，以磷酸盐的浓度（以PO43-计，g/L）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图2所示。

图1 磷酸根的色谱出峰图。

图2 利用七个浓度梯度绘制成磷酸根含量的标准曲线。

表3 七个浓度梯度对应的色谱峰面积。

表4 10组加标回收率数据本实验测定的加标回收率。

表5 6组相对标准偏差数据本实验测定的相对标准偏差。

标准曲线的相关系数R2达到0.9994，符合线性要求，从而得到磷酸盐浓度（以PO43-计，g/L）的计算公式如下：

Y = aX + b

式中：

Y —— 峰面积

X ——磷酸盐的浓度（以PO43-计，g/L）

a —— 119426

b —— 0

3.样品测定

称量一定量的样品，加高纯水溶解，在100ml容量瓶中定容，混匀。（控制稀释后样品中的PO43-浓度不超过标准曲线的最大测量范围）将稀释后的样品离心，取上清液，进色谱分析得到结果。

结果与讨论

1.准确度验证

向10个不同的样品中添加一定量的标准样品，色谱分析得到结果，计算加标回收率，回收率为96.67%～100.67%，平均值为98.67%，都在可接受的范围内，证明该实验方法符合要求的准确度，如表4所示。

2.精密度验证

6个样品分别重复进样6次，色谱分析得到结果，计算相对标准偏差，六组相对标准偏差数据本实验测定的相对标准偏差为0.1%～0.34%，平均值为0.19%，证明该实验方法符合要求的精密度，如表5所示。

结论

本实验利用色谱仪灵敏度高、检测限低、精密度高的特点，建立了一种色谱法测定食品中可溶性磷酸盐，操作简单方便、用时短，并且通过准确度和精确度实验，验证了该方法的可行性。 ■