多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达及其意义

黄亚丽 马占忠 黄刚

[摘要] 目的 研究多發性骨髓瘤（MM）患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达及其意义。 方法 选择2016年1月～2018年5月在广东省粤北人民医院接受治疗的86例MM患者作为观察组，另选同期诊治的缺铁性贫血患者80例作为对照组。比较两组骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量、血红蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脱氢酶（LDH）水平；分析观察组不同性别及年龄患者CD269、CD317相对表达量，并分析患者骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量与Hb、β2-MG及LDH水平的相关性。 结果 观察组骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。观察组Hb、β2-MG水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05），但两组LDH水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。观察组不同性别及年龄患者CD269、CD317相对表达量比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。根据Pearson相关性分析，结果显示患者骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量分别与Hb、β2-MG呈负相关（P < 0.05），而与LDH无明显相关性（P > 0.05）。 结论 MM患者骨髓细胞中CD269、CD317水平的表达明显升高，Hb、β2-MG水平明显降低，且CD269、CD317相对表达量分别与Hb、β2-MG呈负相关。临床上可进一步监测上述四种指标的表达情况，从而更加全面地反映MM患者的实际病情。

[关键词] 多发性骨髓瘤；骨髓细胞；CD269；CD317

[中图分类号] R733.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2019）05（a）-0103-04

[Abstract] Objective To study the expression and significance of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with multiple myeloma（MM）. Methods A total of 86 patients with MM who were treated in Yuebei People′s Hospital of Guangdong province from January 2016 to May 2018 were selected as the observation group， another 80 patients with iron deficiency anemia during the same period were selected as the control group. The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells， the levels of hemoglobin （HB）， β2-microglobulin （β2-MG） and lactate dehydrogenase （LDH） were compared between the two groups， the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group were compared too. The correlations between the relative expressions of CD269， CD317 and the levels of HB， β2-MG and LDH were analyzed. Results The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells in the observation group were significantly higher than that of the control group （P < 0.05）. The levels of HB and β2-MG in the observation group were significantly lower than that in the control group （P < 0.05）， but there was no significant difference in the level of LDH between the two groups （P > 0.05）. There was no significant difference in the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group （all P > 0.05）. According to Pearson correlation analysis， the results indicated that the relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells were negatively correlated with HB， β2-MG （P < 0.05）， but there was no significant correlation with LDH （P > 0.05）. Conclusion The expressions of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with MM are significantly elevated， while the levels of HB and β2-MG are significantly decreased. The relative expression of CD269 and CD317 are negatively correlated with HB and β2-MG respectively. Clinically， the expression of these four indicators can be further monitored to provide more comprehensive feedback on the actual condition of MM patients.

[Key words] Multiple myeloma； Bone marrow cell； CD269； CD317

多发性骨髓瘤（MM）作为源自浆细胞的一类恶性肿瘤，患者的中位生存期通常是3～5年，且发病率在全体恶性肿瘤中大约占1%，但在造血系统肿瘤中约占10%，且已呈现出逐年增高的进展趋势[1-2]。MM的治疗通常依赖免疫应答反应，这主要是免疫反转性抑制能够强化内源型抗骨髓瘤的活性[3-4]。寻找新型免疫监测指标对MM患者的治疗具有十分重要的意义。CD269属于B细胞成熟性抗原，其也是B细胞表面分子，与B细胞活化因子结合后对肿瘤细胞的增殖具有促进作用。分化抗原簇317（CD317），其又可称作骨髓基质细胞性抗原2，也可作为终末分化型B细胞的一个特异性标志物[5-6]。为此，本研究分析了MM患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达及其意义，旨在为临床诊治提供丰富的数据基础和参考依据，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月～2018年5月在粤北人民医院（以下简称“我院”）接受治疗的86例MM患者作为观察组。纳入标准：①患者均符合中国多发性骨髓瘤诊治指南（2015年修订）中关于MM的诊断标准[7]；②年龄>30岁；③患者或其家属已对本研究充分知情，并已签署同意书。排除标准：①其他类别的血液疾病者；②有感染性疾病或免疫类疾病者；③有其他种类的恶性肿瘤者；④研究期间死亡者。观察组男62例，女24例；年龄31～79岁，平均（61.34±1.04）岁；病程1～15个月，平均（7.35±0.82）个月。另选同期在我院诊治的缺铁性贫血患者80例作为对照组，其中男60例，女20例；年龄32～76岁，平均（61.28±1.21）岁；病程2～14个月，平均（7.40±0.77）个月。两组性别、年龄、病程等一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器与试剂 FACSCalibur型流式细胞仪（美国BD公司）；单克隆抗体、同型对照物、荧光微球、溶血素相关试剂盒均购自美国的BD公司。

1.2.2 标本采集 所有患者入院当日的晨间于无菌操作条件下抽取2 mL骨髓，并给予肝素抗凝，以及4 mL的血液标本。其中，血液标本采用3000 r/min常规离心15 min，离心半径12 cm，分离血清，待用。

1.2.3 CD269、CD317相对表达量测定 制备并收集其骨髓细胞悬液，并将细胞数调节到（0.5～1.0）×106个/mL，通过四色流式分析法测定胞膜抗原，将100 μL样本分别添加不同组合的抗体20 μL，另制备同型对照管，混匀，避光条件下放置20 min，待溶血后，采用流式细胞仪测定，应用CellQuest Pro软件选择10 000个细胞进行分析，应用CD45/SSC及CD138联合设门统计细胞群中CD269、CD317阳性率及表达强度，其中膜抗原阳性率>20%记为阳性。

1.2.4 血红蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脱氢酶（LDH）水平的测定 采用日本希森美康公司的XE2100型血液分析仪测定血清中Hb水平；采用6700型全自动生化分析仪测定β2-MG及LDH水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；相关性采用Pearson相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量比较

观察组骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 两组Hb、β2-MG及LDH水平比较

观察组Hb、β2-MG水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）；两组LDH水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 观察组不同性别及年龄患者CD269、CD317相对表达量比较

观察组不同性别及年龄患者CD269、CD317相对表达量比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。见表3。

2.4 患者骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量与Hb、β2-MG及LDH水平的相关性分析

Pearson相关性分析发现，患者骨髓细胞中CD269、CD317的相对表达量分别与Hb、β2-MG呈负相关（P < 0.05），且与LDH无明显的相关性（P > 0.05）。见表4。

3 讨论

MM属于恶性浆细胞类疾病，我国此病的年发病率高达1.3/10万～5.0/10万，也是发病率位居前列的血液型恶性肿瘤[8-9]。有报道[10]指出，MM患者群体中，男性占比较女性高，且发病年龄以老年为主，随着我国老龄化程度的加剧，MM的发病率可能会迎来更加快速的增长。在病理学机制中，MM主要是因患者骨髓内存在的浆细胞发生异常性增殖，使球蛋白出现异常性分泌的一类B淋巴细胞不断克隆性增殖的恶性肿瘤。当前治疗MM的方式较多，比如化疗和自体骨髓抑制，以及造血干细胞的移植和生物学疗法等，但其产生的整体疗效却不令人满意[11]。为更好地寻找治疗MM的临床方案，对此病进行分子学层面的深入研究十分必要。CD269是與B淋巴细胞有关刺激因子的一种受体，CD317属于Ⅱ型跨膜蛋白，以往二者在炎症性疾病或免疫性疾病中存在较多的研究报道。但近年来有报道[12-13]指出，二者在机体中的表达与恶性肿瘤的发病具有密切的关系。

本研究發现，观察组骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量均明显高于对照组（P < 0.05），提示MM患者骨髓细胞中CD269、CD317表达明显升高。CD269作为B细胞刺激因子的重要受体，其参与了此种刺激因子调控机体中恶性B细胞的主要增殖过程，同时参与了MM细胞的分化和增殖，最终在MM的一系列病理生理反应中产生了重要的作用[14-15]。因此，机体骨髓细胞中的CD269水平明显升高。CD317是终末B细胞的自身限制型抗原，其在肿瘤细胞亦或是可分泌免疫球蛋白的已成熟B细胞中表达，可作为晚期B细胞已成熟的重要特异性标记[16]。同时，CD317能够调控机体中免疫应答反应而产生抗炎和抗病毒等作用，进而参与肿瘤细胞的免疫反应，其在MM患者骨髓细胞中的表达水平明显升高。本研究结果还发现，观察组Hb、β2-MG水平明显低于对照组（P < 0.05），但两组LDH水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05），提示MM患者机体中Hb、β2-MG水平明显下降，且LDH水平无明显变化。其中β2-MG是一类相对分子质量比较低的蛋白，也是细胞膜的完整组织相容型抗原，其因在电泳时处在β2区带而得名。在机体血清中的β2-MG能经过肾小球的毛细血管壁，自由滤过，且几乎全部被人体的近端肾小管进行重吸收和分解[17-18]。但对MM患者而言，随着瘤细胞的不断增生和细胞周转的加速，最终可致使β2-MG水平下降。MM患者大都合并贫血症状，这主要是由骨髓瘤细胞的浸润和其自身的生物学特性而引起，Hb作为患者机体是否贫血的重要判断指标，其在MM患者机体中的水平明显下降。LDH作为一类糖酵解酶，其通常在心肌和骨骼肌及肝肾等细胞中具有广泛的存在，特别是在红细胞中的含量十分丰富。本研究两组患者LDH水平差异不大，原因可能是MM患者的肿瘤细胞量显著升高，而机体的红系造血功能受到抑制，最终使得LDH水平变化不大[19-20]。同时，本研究观察组不同性别及年龄患者CD269、CD317相对表达量比较，差异无统计学意义（均P > 0.05），提示性别、年龄的差异与MM患者CD269、CD317表达无明显关系。笔者考虑原因主要可能是CD269、CD317的表达主要与患者的病情及症状有关，而性别、年龄的差异并不会直接影响到患者的病情及症状，故其差异并不十分明显。此外，Pearson相关性分析发现，患者骨髓细胞中CD269、CD317相对表达量分别与Hb、β2-MG呈负相关（P < 0.05），且与LDH无明显相关性（P > 0.05），这也再次证实了MM患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达与Hb、β2-MG密切相关，但与LDH无明显关系。分析原因，主要是因为MM患者机体内的病理变化致使瘤细胞不断增生，细胞周转随之加速，且细胞功能发生变化，最终通过一系列的信号传导途径干扰了CD269、CD317的表达及Hb、β2-MG的水平[21]。

综上所述，MM患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达明显升高，Hb、β2-MG水平明显降低，且CD269、CD317相对表达量分别与Hb、β2-MG呈负相关，临床上进一步监测上述四种指标的表达情况，从而更加全面地反映MM患者的实际病情。

[参考文献]

[1] 杨阳.补肾强骨方治疗多发性骨髓瘤的临床效果[J].临床医学研究与实践，2018，3（2）：120-121.

[2] 赵玲俊，高松，李晓.沙利度胺对多发性骨髓瘤患者外周血Th17与Treg细胞比值及IL-17、IL-35表达水平的影响[J].中国实验血液学杂志，2018，26（1）：187-191.

[3] 黄琦，沙辉，陈龙，等.多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病患者血浆lncRNA MALAT1、LincRNA-p21和GAS5的表达水平及其诊断意义[J].吉林大学学报：医学版，2018，44（2）：339-345.

[4] 陈曦，蔡真.疫苗治疗多发性骨髓瘤的研究进展[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2017，24（3）：311-316.

[5] 朱婕，张磊，张葆康，等.多发性骨髓瘤患者血清IL-6、IL-6R、MCL1的检测分析及与预后的关系[J].检验医学与临床，2018，15（6）：792-794.

[6] 陈颖，杨清.多发性骨髓瘤SET结构域蛋白相关靶向药物抗肿瘤作用机制的研究进展[J].现代药物与临床，2018，33（4）：997-1001.

[7] 中国医师协会血液科医师分会，中华医学会血液学分会，中国医师协会多发性骨髓瘤专业委员会.中国多发性骨髓瘤诊治指南（2015年修订）[J].中华内科杂志，2015，54（12）：1066-1070.

[8] Okazuka K，Ishida T，Sato K，et al. Carfilzomib，lenalidomide，and dexamethasone therapy for refractory and relapsed multiple myeloma：a single-center study of 29 patients [J]. Rinsho Ketsueki，2018，59（6）：698-700.

[9] 林凡莉，周俊，叶丽，等.SDF-1、CXCR4表达及MVD与多发性骨髓瘤预后的关系[J].肿瘤，2017，37（11）：1179-1187.

[10] 赵继伟，洪少杰.57例中青年多发性骨髓瘤的临床特点[J].现代医院，2018，18（2）：264-267.

[11] 刘玉霞，胡国瑜，袁朝晖，等.CD269和CD317在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义[J].现代检验医学杂志，2018，33（2）：58-61.

[12] Frigyesi I，Adolfsson J，Ali M，et al. Robust isolation of malignant plasma cells in multiple myeloma [J]. Blood，2014，123（9）：1336-1340.

[13] 袁青，陈绍水.循环微小RNA在多发性骨髓瘤中的应用[J].国际肿瘤学杂志，2018，45（1）：53-55.

[14] Staudinger M，Glorius P，Burger R，et al. The novel immunotoxin HM1.24-ETA′ induces apoptosis in multiple myeloma cells [J]. Blood Cancer J，2014，13（4）：219-220.

[15] 譚奎，沈婵娟，张玲，等.多发性骨髓瘤患者骨髓CD269和CD317基因的差异性表达研究[J].现代检验医学杂志，2017，32（6）：64-66.

[16] 周惠玉，孙伟才，张福军，等.β2-MG、Cys-C、uNGAL、uMA、uCr、uMA/Cr检测对多发性骨髓瘤早期肾功能损害的诊断价值[J].国际医药卫生导报，2018，24（2）：181-184.

[17] Chen KH，Wada M，Pinz KG，et al. A compound chimeric antigen receptor strategy for targeting multiple myeloma [J]. Leukemia，2018，32（2）：402-412.

[18] Harada T，Ozaki S. Targeted therapy for HM1.24 （CD317） on multiple myeloma cells [J]. Biomed Res Int，2014，1（2014）：965 384-965 385.

[19] 纪伟，吴洪坤，周琳，等.多发性骨髓瘤非编码RNA的研究进展[J].检验医学，2018，33（3）：264-268.

[20] Ishiguro T，Kawai S，Habu K，et al. A defucosylated anti-CD317 antibody exhibited enhanced antibody-dependent cellular cytotoxicity against primary myeloma cells in the presence of effectors from patients [J]. Cancer Sci，2010， 101（10）：2227-2233.

[21] 吴迪，余艳丽，刘芳，等.多发性骨髓瘤伴非骨旁髓外病变临床分析[J].现代肿瘤医学，2018，26（4）：591-594.

（收稿日期：2018-08-29 本文编辑：王 蕾）