自体富血小板血浆注射改善眶周皮肤老化的临床研究

罗梦瑶 李广帅 刘中阳 张泽伟 程凤娟

[摘要]目的：观察皮下注射自体富血小板血浆（Autologous platelet-rich plasma，PRP）改善眶周皮肤老化的临床疗效。方法：将获取的自体富血小板血浆（PRP）均匀注射（单次）至志愿者眶周皮下，使用VISIA图像分析系统对治疗前后不同阶段的皮肤相关特征进行检测，将所得分值进行对比分析，并计算其差异性。结果：治疗前、治疗后30d、60d皱纹、纹理、斑点检测值比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后30d、60d毛孔检测值与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.05），但是治疗后30d与60d比较，差异无统计学意义（P>0.05）。紫外线色斑检测值治疗前后比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：自体富血小板血浆（PRP）注射可以改善眶周皮肤老化状态，提升皮肤年轻化，操作方便，值得临床推广。

[关键词]自体富血小板血浆;皮下注射;眶周皮肤老化;临床疗效;VISIA图像分析系统

[中图分类号]R622    [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2019）06-0094-03

Abstract： Objective  To observe the clinical effect of subcutaneous injection of autologous platelet-rich plasma （PRP） on periorbital skin aging. Methods  The obtained autologous platelet rich plasma （PRP） was uniformly injected （single time） into the periorbital subcutaneous area of the patients. VISIA complexion analysis system was used to detect the skin related characteristics at different stages before and after treatment. The test results were compared and analyzed， and the differences were calculated. Results  There were significant differences in wrinkles， textures and spots between 30 and 60 days after treatment and before treatment（P<0.05）. There were significant differences in pore detection values between before and after treatment at 30 and 60 days（P<0.05）. However， there was no significant difference between 30 days and 60 days after treatment（P>0.05）. There was no significant difference in ultraviolet spot detection before and after treatment（P>0.05）. Conclusion  PRP injection can improve periorbital skin aging， promote skin rejuvenation， and is easy to operate， which is worthy of clinical promotion.

Key words： platelet-rich plasma（PRP）; subcutaneous injection; periorbital skin aging; clinical effect; VISIA complexion analysis system

面部皮膚老化可分为光老化和自然老化，其临床表现为皮肤变薄、弹性下降、萎缩松弛、细纹与色素沉着等。同时眶周及眼睑部皮肤是全身皮肤中较为薄弱的部分容易出现细纹、色素沉着、松弛等表现[1]，常需进行多种治疗。临床上常用的抗衰老治疗有肉毒素注射[2]、点阵激光[3]、强脉冲光[4]、微针注射胶原蛋白[5]、小分子透明质酸填充[6]、PPDO线埋植[7]等。近年来随着再生医学的发展，临床研究发现自体富血小板血浆（Autologous platelet-rich plasma，PRP）能提供大量浓集的生长因子促进皮下胶原再生，从而延缓皮肤衰老，促进面部年轻化，但大部分研究仅采用临床量表评估，缺乏更加客观的评价指标，本实验中对20例皮肤老化者行自体富血小板血浆注射后效果良好，并通过VISIA图像分析系统在治疗前后不同阶段所获数据进行比对分析，现将结果报道如下。

1  资料和方法

1.1 一般资料：本组实验选取健康志愿者20例纳入免费治疗，全部为女性，年龄39～50岁，平均年龄44.1岁，Fitzpatrick分型Ⅲ～Ⅳ型皮肤，Dr.Glogau皮肤老化分级法[8]Ⅱ级。临床表现：不同程度的细纹，色斑，皮肤松弛毛细血管扩张等，志愿者均合并上述一种及两种以上皮肤老化表现。纳入标准：①平素体健，无高血压、糖尿病，冠心病等系统性疾病，无传染病、血液性疾病、精神性疾病、活动性疾病及严重的皮肤病，局部皮炎，皮肤溃疡感染等;②实验前静脉血血小板计数位于（100～300）×109/L正常值之内;③采血前6个月未使用任何影响血小板及血液系统功能的药品及保健品;④近1年未接受任何面部美容治疗包括脂肪填充、肉毒素注射、透明质酸注射、微针注射，眼眶部整形外科手术等;⑤不在妊娠期、哺乳期、备孕期，无不良嗜好（如：吸烟、嗜酒、吸毒等）;⑥平素对护肤品无严重过敏史。医师已经将治疗过程及其可能存在的不良反应告知本人，均表示理解并同意全程参与治疗，且签署知情同意书。本实验经伦理委员会研究并审核通过。

1.2 仪器和材料：瑞士瑞珍PRP制备套装Ⅲ型（Type Ⅲ RegenACR?-C Classic，RegenLab瑞士REGEN LAB SA公司，国食药监械字2014第3661397号）;离心机（瑞珍LC-04C专用离心机，REGEN LAB SA公司），VISIA皮肤检测仪（美国 CANFIELD）、佳能数码相机、利多卡因乳膏（北京紫光制药）、络合碘、一次性无菌换药包（山东威高洁瑞），三通转换接头（贝朗），无菌生理盐水（四川科伦），医用冰袋。

1.3 治疗方法

1.3.1 检测条件：20例女性志愿者在测试前均彻底洁面，室内休息30min后等待检测。VISIA皮肤检测仪（美国）检测并记录（正位、左右斜侧45°）斑点、皱纹、纹理、毛孔，紫外线色斑共计5项指标得分值。

1.3.2 治疗操作：①眶周涂抹利多卡因乳膏并保鲜膜封包1h;②自体富血小板血浆制备，本实验中均采用瑞士瑞珍PRP制备套装Ⅲ型（Type Ⅲ RegenACR?-C Classic），包含1个蝴蝶针头，1个采血固定器，1支 RegenTHT 管（内含抗凝剂和分离凝胶），2个鲁尔针管1ml和5ml，1个转移针头，3个30G针头，1个27G针头，1个长度80mm转移用套管针头，1个转移用配件。首先使用套盒中采血针静脉穿刺，采血管将自动采集所需体积的血液约8ml，然后放入瑞珍LC-04C专用离心机中进行离心（离心机参数设置：时间12min;离心力 3 100rpm），待离心机停止，静置2min后将制备管从离心机中取出;反复倒置采血管，再次悬浮，细胞储存在上层清液中，每支采血管可获得约4.5ml PRP;利用转换器导入1ml或5ml注射器中待用（见图1）;③眶周区域富血小板血浆（PRP）注射：常规消毒铺巾，采用退针注射技术，将套盒所带30G长针头与1ml注射器连接固定，针头全长伸入皮下层，经皮可见针头位置变化，退针注射，见局部皮下轻轻隆起即可（边注射边以盐水纱布轻轻按压止血）。注射途径交织成网格状均匀弥散分布。治疗后以生理盐水纱布湿敷，并以软冰持续冷敷2h以上，24h后可洗脸，外用护肤品，日常注意防晒。

1.4 疗效评价：应用VISIA皮肤检测仪在治疗后30d、60d对志愿者的左、右面颊和前正面进行检测，检测仪自动生成绝对分值（绝对分值代表了出现在选定区域的皮肤特征检测值的面积和强度，分值越低则皮肤老化特征越低）与治疗前进行对比并进行统计学处理。

1.5 统计学分析：选择斑点、皱纹、纹理、毛孔、紫色斑共5项作为本次分析指标，采用SPSS 20.0软件对计量资料进行重复方差分析和t检验，P<0.05认为差异有统计学意义，P<0.01代表有极显著的统计学差异。

2  结果

2.1 VISIA 检测结果：治疗前、治疗后30d、60d皱纹、纹理、斑点检测值比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后30d、60d毛孔检测值与治疗前比较，差异有统计学意义（P<0.05），但是治疗后60d与30d比较，差异无统计学意义（P>0.05）。紫外线色斑检测值治疗前后比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。典型病例见图2～3。

2.2 不良反应情况：在所有接受治疗的志愿者中，未见针眼感染。所有志愿者在治疗后即刻至2h内红肿明显，后逐渐缓解，24h后部分志愿者针眼可见轻度瘀血，1周逐渐消退。在实验观察期间，均未见志愿者在治疗后有皮下结节，皮肤炎症等表现。同时，所有志愿者治疗后即刻完成视觉模拟评分法（Visual analogue scale，VAS）评分[9]，所得平均值为5分。

3  讨论

保持皮肤健康和年轻化，是人类社会长期追求的目标。随着医学水平的发展，越来越多的技术得以用来改善面部皮肤老化这一难题。眶周以眼部为中心，老化明显，但其抗衰治疗措施也因其皮肤薄弱和解剖位置受到限制，近年来学者一直在探索更为安全的治疗方式。自体富血小板血浆自上世纪90年代以来广泛应用于创伤愈合[10]，之后在其他医学领域也有大量的临床证据[11]。现有的国内外文献报道其含有多种生长因子，能诱导蛋白再生的过程，从而促进细胞和基质增殖，胶原形成，实现对人体组织的修复[12]，而被广泛应用于医学美容领域[13]。传统获取自体富血小板血浆（PRP）的方法较多，因转速和离心时间不同，致使获取的浓度和稳定性存在差异[14]。目前国内外市场已经开发了几种血小板制备套盒[15]，本实验中使用瑞士瑞珍PRP制备套装Ⅲ型提取技术，利用其专利分离凝胶，经过一次离心，即可获取自体富血小板血浆，操作简单快捷，便于临床推广应用。离心后分为3层，最上层黄色澄清液体为自体富血小板血浆（PRP），中间层上缘为细胞沉淀层、中间层为分离胶层，最底层为红细胞层（见图1）。本次研究中观察到30d、60d后皱纹VISIA检测值较治疗前均有统计学差异，VISIA检测截图比较可见皱纹数量逐渐减少，深度变浅，皮肤匀质性即纹理均有提高，皮肤细小皱纹变化明显，即自体富血小板血浆可以通过促进成纤维细胞、原母细胞增殖和胶原生成来增加真皮弹性[16]和厚度，治疗皱纹。同时它能刺激透明质酸的合成[17]，增强皮肤保湿能力，提高皮肤光泽度，改善色素沉着[18]。但在本次研究中治疗前后志愿者紫外线色斑检测值比较，差异无统计学意义，可能与样本量及治疗次数较少，且实验期间正值夏季，可能与志愿者防晒不严格有关，未来有待进一步研究。

VISIA图像分析系统[19]是皮肤科、整形美容外科和护肤品行业应用最广泛的成像分析设备。其使用标准的白炽灯、紫外线（UV）和交叉偏振光，生成一系列的高分辨率图像，对志愿者的左、右面颊及正面进行检测，共检测斑点，皱纹 ，纹理，毛孔，紫外线，棕色，红色区域、紫色斑（卟啉）8项生理指标，检测系统自动生成分值（特征计数、百分位数）作为分析指标，提供客观数据，便于统计学处理，较传统的医师量表分析更加准确。在本研究中則选取色斑、皱纹、纹理、毛孔、紫色斑为主要检测指标，是参考皮肤老化分级[8]和主要特征为依据。但VISIA并非最佳检测仪器，有研究也表明ANTERA 3D? CS[13]在检测皱纹及毛孔等项目时，优势更为明显。

本实验研究的局限性在于参与人数较少，没有对照组，随访时间相对较短。笔者建议应当在更大样本量的临床试验中重复这项研究的概念，理想的方法是反复多次注射，在更长的皮肤代谢周期中观察自体富血小板血浆（PRP）对改善眶周皮肤老化的作用，同时志愿者接受多项无创面部检测，如CK皮肤镜、ANTERA 3D? CS[20]等综合分析。此外，还需要更多的研究来阐明每次治疗面部不同区域所需的最佳剂量、注射次数、时间间隔、以及治疗的长期有效性等。综上所述，与其他皮肤修复疗法相比，自体富血小板血浆（PRP）皮下注射是一种有效的可以促进组织再生的治疗方法，相比人工合成的填充剂其来源于自体组织，无免疫反应，再生能力强，安全性更高等优势。提取技术操作简单，希望在未来能有大样本数据支持其在面部年轻化的临床作用，为抗衰治疗提供更多方案。

（作者贡献声明：感谢程凤娟实验操作;刘中阳、张泽伟数据整理、统计学分析;李广帅教授研究指导、论文修改、经费支持。）

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[收稿日期]2018-12-25

本文引用格式：羅梦瑶，李广帅，刘中阳，等.自体富血小板血浆注射改善眶周皮肤老化的临床研究[J].中国美容医学，2019，28（6）：94-98.