18%四氟·嘧菌酯悬乳剂的高效液相色谱分析

2019-06-20俞霖洁吴航俊孙小波庞雯斐唐利斌林梦佳

现代农药 2019年3期

俞霖洁，吴航俊，孙小波，庞雯斐，唐利斌，林梦佳

（浙江省化工研究院有限公司，杭州 310023）

四氟醚唑（tetraconazole）属三唑类杀菌剂，主要用于防治小麦白粉病、锈病，玉米丝黑锈病，苹果斑点落叶病和葡萄白粉病等[1]。嘧菌酯（azoxystrobin）是先正达公司于1997年上市的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，用于防治白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病等，目前国内外登记防治的植物病害有400多种[2]。四氟醚唑和嘧菌酯复配，既可减少单剂成分用量，降低药害风险，又可以提高病害防治效果。

目前四氟醚唑的检测方法主要为气相色谱法[3-4]，嘧菌酯的检测方法主要为气相色谱法[5]和液相色谱法[6]，四氟醚唑和嘧菌酯复配制剂的分析方法尚未见报道。本试验采用Inertsil ODS-3色谱柱和二极管阵列检测器，建立了四氟醚唑和嘧菌酯同柱分离测定的高效液相色谱法。该方法操作简便、快速，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，可为企业产品质量控制和质检机构质量检测提供参考。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Dionex U3000高效液相色谱仪（热电），具二极管阵列检测器、自动进样器和Chromeleon 7.0色谱处理工作站；色谱柱：Inertsil ODS-3不锈钢柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇（色谱纯），临海市浙东特种试剂有限公司；水：2次蒸馏水；四氟醚唑标准品（≥98.5%）、嘧菌酯标准品（≥98.9%）、18%四氟·嘧菌酯悬乳剂（8%四氟醚唑＋10%嘧菌酯），杭州宇龙化工有限公司提供。

1.2 色谱条件

流动相：甲醇＋水（体积比为80∶20）；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：225 nm；进样量：5 μL；保留时间：嘧菌酯约4.4 min、四氟醚唑约5.5 min。典型的标样及18%四氟·嘧菌酯悬浮剂样品液相色谱分离图见图1、图2。

图1 嘧菌酯、四氟醚唑标样液相色谱图

图2 18%四氟·嘧菌酯悬乳剂液相色谱图

1.3 溶液配制

1.3.1 标样溶液的配制

称取约15 mg（精确至0.000 2 g）四氟醚唑标样和20 mg嘧菌酯标样于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容，充分摇匀，静置，备用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取约0.2 g（精确至0.000 2 g）18%四氟·嘧菌酯悬乳剂样品，置于100 mL容量瓶中，先用约5 ml水溶解样品，再用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤后待用。

1.4 测定步骤

1.4.1 测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标准溶液。计算各针相对响应值，待相邻2针的相对响应值小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.2 计算

将测得的2针试样溶液以及试样溶液前后2针标样溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）的峰面积分别进行平均。试样中四氟醚唑（嘧菌酯）的质量分数w（%）按下式计算。

式中：A1为标样溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）峰面积的平均值；A2为试样溶液中四氟醚唑（嘧菌酯）峰面积的平均值；m1为标样的质量，g；m2为试样的质量，g；p为标样中四氟醚唑（嘧菌酯）的质量分数，%。

2 结果和讨论

2.1 检测波长的选择

通过二极管阵列检测器的光谱数据采集功能，获得四氟醚唑与嘧菌酯的紫外吸收曲线。四氟醚唑在200～230 nm处有较强的吸收，嘧菌酯在200～270 nm处有较强的吸收。由于悬乳剂配方比较复杂，为兼顾2种有效成分的吸收强度与比例，减小溶剂、助剂等杂质干扰，经比对分析，最终确定以225 nm作为检测波长。在此波长下四氟醚唑和嘧菌酯峰形良好，紫外吸收比例合适，基本不受杂质干扰。

2.2 流动相的选择

分别选用了甲醇＋水、甲醇＋乙腈＋水、乙腈＋水为流动相进行试验。试验结果表明，以甲醇＋水（体积比为80∶20）、甲醇＋乙腈＋水（体积比为40∶40∶20）、乙腈＋水（体积比为75∶25）为流动相时，均能将2种成分有效分离，获得的峰形尖锐对称。其中，以甲醇＋水（体积比为80∶20）流动相获得的目标物峰形最为理想，分离效率最高，且用时较短。最终确定甲醇＋水（体积比为80∶20）为流动相。

2.3 线性关系的测定

分别称取四氟醚唑和嘧菌酯标准品约10 mg（准确至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解，稀释，定容，摇匀。用移液管分别准确移取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 mL上述溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释，定容，摇匀。在上述液相色谱操作条件下进行测定。以四氟醚唑（嘧菌酯）质量浓度为横坐标，四氟醚唑（嘧菌酯）峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。计算得四氟醚唑线性回归方程为y=21.669x-0.174 2，相关系数为0.999 5，嘧菌酯线性回归方程为y=60.798x-1.051 4，相关系数为0.999 9。试验结果表明，四氟醚唑和嘧菌酯在测定的质量浓度范围内具有良好的线性关系。

2.4 方法精密度的测定

任意称取一个18%四氟·嘧菌酯悬乳剂在上述方法下重复测定5次，分别获得四氟醚唑和嘧菌酯的标准偏差和变异系数，结果见表1。

由表1可知，样品中四氟醚唑质量分数为7.85%，标准偏差为0.010，变异系数为0.16%；嘧菌酯质量分数为9.46%，标准偏差为0.015，变异系数为0.06%。结果表明该分析方法精密度良好。

表1 方法的精密度实验测定结果

2.5 方法准确度的测定

在已知含量的18%四氟·嘧菌酯悬乳剂样品，分别准确加入一定量四氟醚唑和嘧菌酯标样溶液，根据称取样品量和加入标样量计算出四氟醚唑和嘧菌酯的理论含量。按照上述色谱操作条件操作，分析结果见表2。四氟醚唑回收率为98.49%～100.98%，平均回收率为99.99%，嘧菌酯回收率为99.23%～100.37%，平均回收率为99.23%，均满足常量分析要求，方法准确度良好。