紫杉醇微球-原位凝胶的制备及其局部注射的抗肿瘤药效

詹 颖，杜祎甜，仰浈臻，张春丽，齐宪荣△

(1. 北京大学药学院药剂学系，北京大学药学院分子药剂学与新释药系统北京市重点实验室， 北京 100191； 2. 北京大学第一医院核医学科， 北京 100034)

肿瘤是影响人类健康的重大疾病，如脑胶质瘤是极具侵袭性的脑部肿瘤，患者死亡率高、生存期短[1]；乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，发病率高，侵袭性强，极易复发和转移[2]。对肿瘤的治疗通常包括手术切除、放疗、化疗、光热治疗和免疫治疗等，其各有利弊，外科切除的缺点在于难以根治、容易复发，化疗、放疗对患者产生的毒副作用较大。紫杉醇(paclitaxel，PTX)是经典的抗肿瘤药物，目前已有紫杉醇注射液(商品名：泰素®，Taxol)、紫杉醇白蛋白纳米粒、紫杉醇脂质体等多种剂型应用到临床中，但也面临着给药次数多、存在安全隐患、患者依从性差等问题[3]。微球是一种良好的缓释剂型[4]，可以定向植入，减少全身毒副作用，目前已经上市的微球产品有注射用醋酸亮丙瑞林微球等，用于绝经前乳腺癌或前列腺癌的治疗。随着材料学的发展，有更多生物相容性优良的材料应用到微球制剂当中，其中聚乳酸羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)， PLGA]具有生物可降解性，它作为一种安全的药用辅料被《美国药典》收录，采用PLGA制备的紫杉醇微球(paclitaxel microspheres，PTX/M)在肿瘤治疗中具有良好的前景。

原位凝胶是一种安全方便的新剂型，它以液体的形式给药，进入体内后迅速发生相转变，在给药部位形成半固体储库[5]。微球和凝胶的结合，一方面弥补了微球突释的缺陷，另一方面延长了微球在病灶部位的停留，提高了药物在局部的有效浓度从而获得更好的抗肿瘤效果。Elkharraz等[6]制备了PTX/M和脂质的复合物，通过局部注射的方式治疗脑瘤，可以延长药物在脑部的作用时间。本研究首先选用聚氧乙烯和聚氧丙烯组成的嵌段共聚物泊洛沙姆(Poloxamer)作为温敏凝胶材料，它作为一种无毒、无刺激性药用辅料被《美国药典》收录，并且广泛应用在口服、注射和局部用药物制剂中[7]，Shelke等[8]使用Poloxamer 407作为基质制备了盐酸那拉曲坦的鼻腔给药凝胶，延长了药物在体内的停留时间，避免了反复给药。Pluta等[9]使用Poloxamer 407制备了甲氨蝶呤的温敏凝胶系统，用于实体瘤的治疗。本研究选用PLGA作为微球材料，制备了PTX/M，进一步制备得到载紫杉醇微球的原位凝胶，通过局部注射的方式给药，减少了给药次数，降低了毒副反应，达到了较好的抗肿瘤效果。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1药品和试剂 紫杉醇，北京诺瑞医药技术有限公司；泰素®(Taxol)，美国百时美施贵宝公司；PLGA(75/25，Inherent Viscosity 0.65 dL/g)，LACTEL®Absorbable Polymers；Poloxamer 407和Poloxamer 188，北京风礼精求商贸有限责任公司；高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)所用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.1.2仪器 BP211D电子分析天平，德国Sarto-rius 公司；LC-20A高效液相色谱仪系统，日本Shimadzu公司；3K-15低温高速离心机，德国Sigma公司；CO2细胞培养箱，美国Thermo公司；BT-9300H型激光粒度分布仪，丹东市百特仪器有限公司；Rheometer RS300流变仪，德国Thermo Haake公司。

1.1.3动物 BALB/c裸鼠，雄，6～8周，体重 18～20 g；BALB/c小鼠，雌，6～8周，体重18～20 g，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，北京大学医学部实验动物部清洁级动物房饲养。

1.2 实验方法

1.2.1PTX/M的制备 通过乳化溶剂挥发法[6，10]制备不同粒径大小的PTX/M。称取适量PLGA溶于5 mL二氯甲烷，400 r/min磁力搅拌使其充分溶解，而后加入40 mg PTX分散在其中；在转速分别为1 600、1 000和600 r/min的条件下，将得到的有机相缓慢滴加至50 mL含20 g/L聚乙烯醇[poly (vinyl alcohol)，PVA]的水相溶液中进行乳化，继续搅拌半小时后将转速降为400 r/min，搅拌过夜使二氯甲烷挥发完全；最后用去离子水将微球洗涤、冻干。

1.2.2微球粒径和形态的测定 使用激光粒度分布仪测定微球的粒径大小和分布。将适量微球加入含0.02%(体积分数)吐温80的溶液中并稀释至适宜浓度，涡旋，使其分散均匀待测。通过扫描电镜(scanning electron microscope，SEM)观察微球的形态，将双面胶带粘附于铜锭上，取适量冻干后的微球样品置于其上，涂布均匀，喷金后选取适当倍数进行观察。

1.2.3包封率和载药量的测定 采用HPLC测定微球中PTX的含量。取新鲜制备的PTX/M混悬液适量，离心后用0.5%(体积分数)甲醇溶液洗涤微球两次，乙腈破乳，此时测得的PTX浓度记作Cencap，洗涤之前测得的PTX浓度记作Ctotal，计算PTX/M中PTX的包封率(encapsulation efficiency，EE)和载药量(drug loading，DL)：EE =Cencap/Ctotal×100%，DL =Wencap/ (WPTX+WPLGA) ×100%，式中Wencap、WPTX、WPLGA分别代表包封的PTX质量、初始PTX和PLGA的质量。

1.2.4PTX/M的体外释放 将适量PTX/M分散于磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffer solution，PBS)中，在100 r/min、37 ℃的恒温摇床中连续释放1个月，分别在第2、5、10、20、30天取1 mL释放液，1 000 r/min离心4 min后取上清，HPLC检测PTX浓度。测得释放第i天的PTX浓度记作Ci，释放前的PTX浓度记作C0，计算累积释放百分率：Accumulated release percent=∑Wi/W0×100%，式中Wi为测得的释放液中PTX的质量(i=2,5,10,20,30)，W0为释放前微球中PTX的质量。另外，收集释放结束时的微球样品进行SEM拍照，观察此时微球的形态。

1.2.5原位凝胶的制备 通过冷置溶解法制备原位凝胶。称取适量Poloxamer 407和Poloxamer 188于烧杯中，加入一定量的生理盐水，4 ℃静置过夜，即得空白凝胶(blank gel)。PTX/M gel的制备方法与其类似，将PTX/M分散在生理盐水中，按相同的方法制备即可。

1.2.6相转变温度的测定 采用试管翻转法测定原位凝胶的相转变温度。将制得的空白凝胶或PTX/M gel溶液从4 ℃取出，置于透明玻璃试管中，使用水浴从4 ℃开始升温，2 min升高1 ℃，并在每摄氏度平衡3 min，仔细观察并记录试管中溶液失去流动性时的温度，作为相转变温度(T)。每个样品平行测定3次。

1.2.7凝胶的流变学性质 使用流变仪对凝胶的模量进行测定。先选择Oscillation(f)模式，即振荡(频率)模式，频率用f表示，再选择应力传感模式，恒定τ=1.00 Pa，频率取点范围0.01～10 Hz，对数取点。取3 mL样品于样品台上，降低旋转头至Gap=1.00 mm，恒温后自动开始测试。

1.2.8凝胶的溶蚀与释放 取空白凝胶、PTX/M gel溶液各1 mL置于已知重量的玻璃小瓶中，PTX/M gel中PTX/M的浓度为4 g/L，37 ℃恒温使其充分成胶。加入1 mL PBS(37 ℃预热)作为释放介质，在37 ℃、100 r/min恒温摇床中震荡，每隔30 min取出全部释放介质，对剩余凝胶迅速称重，然后补充新鲜介质1 mL。相邻时间点样品的重量反映了凝胶的溶蚀情况，计算凝胶的累积溶蚀百分率：Accumulated dissolution percent = (m0-mt)/m0×100%，式中m0指凝胶初始重量，mt指t时刻剩余凝胶的重量。另外，用HPLC测定释放介质中PTX/M的浓度，绘制凝胶释放曲线和溶蚀曲线，并考察它们的相关性。

1.2.9凝胶的通针性与体内滞留时间 使用1 mL注射器将台盼蓝标记的生理盐水与凝胶溶液同时注射到37 ℃水浴中，拍照观察。另外使用BALB/c小鼠，在其背部注射100 μL台盼蓝标记的凝胶溶液，在第2、4、6、12、24和48 h分别处死小鼠，观察凝胶的滞留情况。对照组小鼠注射等量台盼蓝标记的生理盐水。

1.2.10体内抗U87 MG肿瘤药效的研究 建立人源U87 MG的皮下肿瘤模型，待裸鼠的肿瘤体积长至100 mm3左右时将其随机分成3组，每组6只，按以下方案给药：(1)对照组,生理盐水；(2)PTX/M gel组,PTX给药剂量20 mg/kg；(3)Taxol组,PTX给药剂量5 mg/kg。给药当天记作第1天，Taxol组的荷瘤裸鼠从第1天起每周尾静脉给药100 μL，其余各组均为第1天瘤旁单次给药100 μL。实验期间每两天记录肿瘤的生长情况和裸鼠体重，计算肿瘤体积：Tumor volume (mm3)= 0.5×a×b2，a和b分别代表肿瘤的长径和短径。另外，处死裸鼠后解剖取其心、肝、脾、肺、肾，用于HE染色，并计算脏器指数：Organ coefficient = organ weight (g) / net body weight (g)×100%。

1.2.11体内抗4T1肿瘤药效的研究 建立鼠源4T1的皮下肿瘤模型，待小鼠的肿瘤体积长至100～200 mm3时将其随机分成3组，每组10只，按以下方案给药：(1)对照组,生理盐水；(2)PTX/M gel组,PTX给药剂量20 mg/kg；(3)Taxol组,PTX给药剂量5 mg/kg。给药当天记作第1天，Taxol组的荷瘤小鼠从第1天起每周尾静脉给药100 μL，其余各组均为第1天瘤旁单次给药100 μL。实验期间每两天记录肿瘤的生长情况和小鼠体重，计算肿瘤体积。另外，小鼠死亡后取其肺组织置于Bouin’s固定液中固定24 h，观察肺转移情况。

1.2.12预防4T1肿瘤术后复发的研究 建立鼠源4T1的皮下肿瘤模型，待小鼠的肿瘤体积长至100～200 mm3时进行手术切除肿瘤，切除的肿瘤体积占肿瘤总体积的90%左右，同时按以下方案给药：(1)对照组，生理盐水；(2)PTX/M gel组，PTX给药剂量20 mg/kg；(3)Taxol组，PTX给药剂量5 mg/kg。手术及给药当天记作第1天，Taxol组小鼠从第1天起每周尾静脉给药100 μL，其余各组均为第1天瘤腔内单次给药100 μL。实验期间观察肿瘤复发情况，记录复发后肿瘤大小和小鼠生存期。

1.3 统计分析

利用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，所有数据用均数±标准差表示。对多组数据采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，两两比较采用LSD法，P<0.05时为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 微球的性质与表征

通过乳化溶剂挥发法得到3种不同粒径的PTX/M，记作PTX/M 16、PTX/M 10和PTX/M 06，分别代表搅拌速度为1 600、1 000和600 r/min时制得。图1为不同微球的粒径分布图，表1是对不同微球的粒径、比表面积(specific surface area，SSA)、包封率和载药量的比较。由此可知，搅拌速度是影响微球大小的主要因素，随着转速的降低，微球的粒径呈现增大的趋势，同时伴随着微球比表面积的减小以及PTX/M包封率和载药量的增大。

Blue line represents cumulative distribution and red line reresents difference distribution.图1 PTX/M 16(A)、PTX/M 10(B)和PTX/M 06(C)的粒径分布Figure 1 The particle diameter distribution of PTX/M 16 (A), PTX/M 10 (B), PTX/M 06 (C)

表1 PTX/M 16、PTX/M 10和PTX/M 06粒径、比表面积、包封率和载药量的比较Table 1 Comparison of particle diameter, SSA, EE, DL among PTX/M 16, PTX/M 10 and PTX/M 06

2.2 紫杉醇微球的体外释药行为

PTX从微球中的累积释放百分率如图2所示，释放初始阶段(0～2 d)药物存在轻微的突释现象，这是由于吸附在微球表面的游离药快速释放导致，之后很长一段时间内PTX的释放表现平稳、缓慢。在第30天时，PTX/M 16、PTX/M 10、PTX/M 06的累积释放百分率分别为43.34%±12.45%，33.56%±3.33%，19.89%±2.23%，对于三批不同的PTX/M，粒径越大，微球中的PTX释放越慢，这与其具有较小的比表面积有关。综合考虑PTX/M的包封率和释放特性，本研究选用PTX/M 10进行后续实验。

PTX, paclitaxel; PTX/M, paclitaxel microspheres. Data are presented as the (n=3).图2 PTX/M 16、PTX/M 10和PTX/M 06中PTX的体外累积释放曲线Figure 2 Percentage of accumulated release of PTX from PTX/M 16, PTX/M 10 and PTX/M 06, respectively

2.3 微球的扫描电镜照片

图3A、B是新鲜制备的PTX/M分别放大500倍和2 000倍的SEM照片，由图可见微球呈规则的圆球形，分散性良好，少粘连。图3C、D是释放30 d时微球分别放大500倍和2 000倍的SEM照片，此时由于PLGA发生降解[11]，微球失去了完整的面貌，彼此粘连，内部结构暴露。

图3 新鲜制备的PTX/M(A、B)和降解30 d后的PTX/M(C、D)扫描电镜照片Figure 3 SEM micrographs of PTX/M (A, B) and degraded PTX/M after 30 days (C, D)

2.4 相转变温度

当Poloxamer 407浓度为17.5%(质量分数)时，不同浓度的Poloxamer 188对凝胶相转变温度的影响如表2所示，可见当Poloxamer 407浓度一定时，相转变温度会随着Poloxamer 188浓度的增加呈现升高的趋势；与同浓度的空白凝胶相比，PTX/M gel相转变温度较低，这可能与微球在凝胶中与Poloxamer彼此接触有利于其交联有关；当Poloxa-mer 188浓度为2.6%(质量分数)时，基本能满足体外注射的需求。

表2 Poloxamer 188浓度的改变对凝胶相转变温度的影响Table 2 Phase transition temperature of gel when the concentration of Poloxamer 188 was changed

PTX/M, paclitaxel microspheres.

2.5 凝胶的流变学性质

流变仪对凝胶的测试结果如图4所示，G′代表弹性模量，G′′代表损耗模量，当二者的lgG不再变化时，此时的G′为样品的弹性模量值。空白凝胶在25 ℃和37 ℃时的lgG′分别为3.83和4.31，弹性模量分别为6.7×103Pa和20×103Pa，PTX/M gel在25 ℃和37 ℃时的lgG′分别为3.63和4.25，弹性模量分别为4.2×103Pa和18×103Pa。由此可见，当温度升高时，不论是空白凝胶还是PTX/M gel都发生了相转变，从“柔软”的流动态凝胶溶液变成了“坚固”的半固体凝胶，弹性模量因此增大；与同一温度下的空白凝胶相比，PTX/M gel的弹性模量略低，这可能与PTX/M在凝胶中占据了一定的位置空间，对整体的凝胶系统起到了一定稀释作用有关。

2.6 溶蚀与释放

凝胶的溶蚀行为如图5所示，在相同的时间内，PTX/M gel比空白凝胶的累积溶蚀百分率大，这一方面与载药会降低凝胶的相转变温度有关，因为凝胶化过程是一个可逆的过程，越容易发生凝胶化的样品溶液也就越容易发生逆凝胶化；另一方面与凝胶的弹性模量有关，从流变实验数据可知，与空白凝胶相比，微球的加入会降低凝胶的弹性模量，因此，在37 ℃和100 r/min的恒温摇床条件下，弹性模量较低的凝胶，更容易受外界作用力的影响，使其内部的网格结构遭到破坏，从而发生溶蚀现象。

图4 空白凝胶和PTX/M gel在25 ℃、37 ℃时的模量变化Figure 4 Modulus of blank gel and PTX/M gel at 25 ℃, 37 ℃

PTX/M gel的释放曲线以及“释放-溶蚀”相关性考察如图6所示，PTX/M gel中PTX/M因为自身的重量在溶液形成半固体凝胶之前有一定的沉降，所以在凝胶中不能完全分布均匀，凝胶底部中分散的微球比凝胶顶部多，因此,可以看到随着凝胶的溶蚀，PTX/M的释放速率后期高于前期，如果不考虑微球沉降带来的影响，PTX/M gel的累积释放百分比和累积溶蚀百分比基本上呈线性相关，说明凝胶中PTX/M的释放主要是通过凝胶溶蚀来实现。

PTX/M, paclitaxel microspheres. Data are presented as the (n=3).图5 Blank gel和PTX/M gel的体外累积溶蚀百分率Figure 5 Accumulated erosion of blank gel and PTX/M gel

PTX/M, paclitaxel microspheres. Data are presented as the (n=3).图6 PTX/M从PTX/M gel中的累积释放百分率(A)和溶蚀-释放相关曲线(B)Figure 6 Percentage of cumulative release of PTX/M from PTX/M gel (A) and correlation between PTX/M gel release and dissolution (B)

2.7 通针性与体内滞留时间

对凝胶的通针性考察结果如图7所示，台盼蓝标记的生理盐水在注射后立即扩散，而凝胶溶液在注射后立即形成了半固体状凝胶，随后沉积在玻璃小瓶的底部。对凝胶体内滞留时间的考察结果如图7C所示，与注射等量台盼蓝标记的生理盐水组相比，凝胶在注射部位缓慢消除，存留时间可达48 h，生理盐水在注射后的2 h基本消除完全。

2.8 抑制U87 MG肿瘤生长效应和安全性评价

各组荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况如图8A所示，对照组裸鼠肿瘤体积生长迅猛，治疗初期PTX/M gel组的疗效与Taxol组相当，治疗后期Taxol组在给药后的2～3 d裸鼠肿瘤体积出现回弹；从总体的趋势来看，PTX/M gel组一次给药对肿瘤生长的延缓效果与Taxol组多次给药的效果相当,甚至更优。图8B～D分别为各组裸鼠的相对体重变化、主要脏器的脏器系数和HE染色，可以看出，Taxol组裸鼠在治疗期间体重下降较多，说明Taxol造成了一定的毒副作用。通常脏器系数增大表示脏器充血、水肿或增生肥大等,脏器系数减小表示脏器萎缩及其他退行性改变，三组裸鼠的脏器系数无显著性差异,主要脏器的HE染色未发现肿瘤转移。

2.9 抑制4T1肿瘤生长效应和安全性评价

各组荷4T1瘤小鼠的肿瘤生长情况如图9A所示，对照组小鼠肿瘤体积增长最快，其次是Taxol组，PTX/M gel组在给药前期对4T1肿瘤生长的延缓作用与Taxol组相差不大，后期PTX/M gel组药效明显优于其他组。由此可见，PTX/M gel具有较好的缓释作用，能够实现在肿瘤部位持续缓慢释放PTX，并且PTX/M gel局部一次给药的疗效优于 Taxol 静脉多次给药。图9B～D分别为对照组、PTX/M gel组、Taxol组内各只小鼠的肿瘤生长曲线。

图9E是各组小鼠的相对体重变化，Taxol组小鼠在第3次给药后体重出现了明显的下降，这是由注射Taxol引起的毒副作用，其他组安全性相对良好。

图9F是对各组小鼠不同程度肺转移的统计，将肺部长出肉眼可见瘤的小鼠记作重度转移，将肺转移结节数≥15的小鼠记作中度转移，将肺转移结节数<15的小鼠记作轻度转移。由图可知，重度转移：Taxol组> 对照组> PTX/M gel组；中度转移：对照组> PTX/M gel组> Taxol组；轻度转移：PTX/M gel组>对照组和Taxol组。

2.10 防肿瘤术后复发的药效评价

用无瘤率(tumor free)来评价小鼠的术后复发情况，肿瘤切除后的当日，各组的无瘤率均为100%，当肿瘤再次长出并且体积超过50 mm3时，视作该小鼠出现了复发，对各组的无瘤率进行统计，结果如图10A所示，PTX/M gel组小鼠发生肿瘤复发的时间明显晚于对照组和Taxol组。图10B～D分别为对照组、PTX/M gel组和Taxol组小鼠术后肿瘤的生长情况，可以看出PTX/M gel组小鼠的肿瘤复发时间晚、肿瘤生长缓慢，说明即使复发后PTX/M gel组小鼠的肿瘤相比于其他组也得到了更好的控制。图10E是术后小鼠的生存曲线，总的来看PTX/M gel组小鼠的存活期比其他组更长。图10F是肺转移情况，重度转移：Taxol组>对照组>PTX/M gel组；中度转移：对照组和PTX/M gel组>Taxol组；轻度转移：PTX/M gel组>对照组>Taxol组。

图7 台盼蓝标记的生理盐水(A)和凝胶溶液(B)注射到37 ℃水浴中的变化；台盼蓝标记的原位凝胶不同时间点时在小鼠皮下的停留情况(C)Figure 7 Changes of saline (A) and gel (B) labeled with trypan blue were injected into water at 37 ℃; Photographs of gel injected into the back of the mouse for 2 h, 4 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h and control for 2 h (C)

Data are presented as the (n=6).图8 A，荷U87 MG肿瘤裸鼠的肿瘤生长曲线(*P=0.02，**P=0.002，与对照组比较)；B，裸鼠的相对体重变化；C，主要脏器的脏器指数(Normal组为没有荷瘤的裸鼠的脏器系数[12])；D，主要脏器的HE染色(100×)Figure 8 A, tumor growth curve of U87MG-bearing mice (*P=0.02, **P=0.002, vs. Control); B, relative body weight curve; C, percent of organ relative weight (Normal represents the organ index of normal nude mice[12]); D, HE staining of major organ tissues (100×)

Data are presented as the (n=10).图9 A，荷4T1肿瘤小鼠的肿瘤生长曲线(*P=0.003，与对照组比较)；B～D，对照组、PTX/M gel组和Taxol组内各只小鼠的肿瘤生长曲线；E，小鼠的相对体重变化；F，小鼠肺转移的统计Figure 9 A, tumor growth curve of 4T1-bearing mice (*P=0.003, vs. Control); B-D, tumor growth curve of each mouse in Control, PTX/M gel, Taxol groups; E, relative body weight-time curve of mice; F, proportion of different degrees of lung metastasis in mice

3 讨论

本研究制备了3种不同粒径大小的PTX/M，体外释放曲线显示粒径越小的微球释放得越快，这与其具有较大的比表面积有关，但同时粒径越小，微球对药物的包封率和载药量越低，因此，本研究选取中位粒径为(32.24±1.09) μm的PTX/M 10进行后续实验。本研究制备了PTX/M gel，当Poloxamer 407、Poloxamer 188的浓度分别为17.5%、 2.6%时，其相转变温度为33 ℃，基本能满足体外注射的需要。通过标记台盼蓝，可以发现凝胶在小鼠体内的滞留时间达48 h，而体外释放特性显示PTX/M在释放开始的0～2 d有轻微的突释现象，因此，凝胶能较好地弥补微球突释的缺陷，使药物的释放趋于平稳、缓慢。

PTX/M gel在U87 MG肿瘤和4T1肿瘤的治疗中均显示了较好的药效。由于微球和凝胶的缓释作用，使得PTX/M gel只需要给药一次就能达到Taxol给药三次的效果，甚至优于Taxol，并且降低了毒副作用。在防4T1肿瘤术后复发的研究中，因为PTX/M gel在瘤腔部位形成了储库，缓慢释放的PTX能够杀伤术后残留的肿瘤细胞，所以该组小鼠出现复发的时间比对照组和Taxol组都晚，即使在复发后肿瘤体积也得到了更好的控制。4T1是极易发生转移的肿瘤[13]，通过对小鼠的肺转移情况进行统计，发现无论是否经历手术，小鼠均发生了不同程度的转移，PTX/M gel组小鼠发生轻度肺转移的比例较多，而Taxol组发生重度转移的比例最多，这可能因为Taxol组给药次数多、毒副作用大，使得小鼠状态差、免疫功能下降，所以当Taxol在体内完全消除以后，机体难以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，而PTX/M gel组因为PTX的长期释放，对肿瘤细胞的转移起到了一定程度上的阻碍作用。

图10 A，小鼠术后的无瘤率；B～D，对照组、PX/M gel组和Taxol组的小鼠术后肿瘤生长曲线；E，小鼠术后的生存曲线；F，小鼠不同程度肺转移的统计Figure 10 A, tumor free rate after surgery in different drug-administered groups; B-D, tumor growth curve of each mouse after surgery in control, PTX/M gel, Taxol groups; E, survival curve of mice with surgery; F, proportion of different degrees of lung metastasis in mice