纤支镜毛刷常规脱落细胞学与液基细胞学在肺癌病理诊断中的应用对比

潘登，应静，吴奇林，祝杭燕，周俊杰

（宁波市临床病理诊断中心，浙江 宁波 315021）

肺癌早期诊断困难，确诊时很多已是中晚期，无法进行手术，大大降低了患者的生存率。随着病理技术的快速发展，纤维支气管镜微创且高效，已被广泛运用于肺癌的早期诊断。传统涂片制片后有残余大量的血细胞粘液等杂质，造成阅片困难，严重影响病理诊断。最早运用于宫颈细胞学检查的薄层液基制片技术能提高细胞样本的检查质量和癌变细胞的检出率[1]，现已被广泛运用于各类非妇科细胞学样本的诊断中。本研究通过利用薄层液基制片技术处理纤支镜毛刷样本，对照相应活检或大体组织学标本结果，并对比传统涂片制片结果，探讨其在肺癌病理诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年1月-2017年12月宁波市临床病理诊断中心同时行常规脱落细胞涂片、液基细胞学检查且具有常规组织学结果的纤支镜毛刷标本1902例，其中男1420例，女482例，年龄（62.5±10.8）岁。

1.2 方法 （1）取样。临床医生通过纤支镜毛刷取样，将毛刷直接放入装有20mL PreservCyt保存液（美国豪洛捷公司产品）的保存瓶中，送检至本中心处理制片。同时开展常规脱落细胞涂片，非妇液基细胞检查的样本由临床医生取样后先直接涂片2张，再将毛刷放入装有固定液的保存瓶中。涂片由95%酒精固定10-15分钟后放入一次性玻片盒，随后送至本中心进行HE染色。（2）纤支镜毛刷液基细胞制片。在液基细胞室将保存瓶中的样本倒入50mL离心管1500-2000转离心5-10分钟，弃上清液，加入30mL PreservCyt清洗液，放置于震荡器上混匀5分钟，再次1500-2000转离心5-10分钟，弃上清，将细胞转移至Preserv Cyt保存瓶中加入新的保存液静置15分钟。直接将保存瓶放入新柏氏全自动细胞检测仪Thinprep2000（美国豪洛捷公司产品）上制片并进行HE染色。（3）病理诊断。细胞学样本先由初级细胞学诊断医生进行初筛阅片，再由副主任医师复片，疑难病例由多人讨论会诊并结合临床情况给出细胞学病理报告。组织学标本由2人及以上组织学病理医生阅片后给出病理报告。

1.3统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 纤支镜毛刷液基细胞学与常规脱落细胞学结果比较 将纤支镜毛刷细胞学结果分为三类，阴性：诊断为涂片中未找到癌细胞；阳性：诊断为找到癌或癌疑细胞；其他：诊断为不能明确或找到非典型性细胞或异形细胞。组织学活检病理结果也分为三类，阴性：良性病变，如炎症，增生，息肉等；阳性：癌、其他恶性肿瘤、可疑癌；其他：不典型增生或异形。液基细胞学诊断的敏感度为52.78%（654/1239）、特异度为 89.80%（546/608）、 准确度为75.39%（1434/1902）；常规脱落细胞涂片法诊断的敏感度为 37.13%（460/1239）、特异度为 92.11%（560/608）、准确度为 63.62%（1210/1902）。 液基细胞学的敏感度 （χ2=25.34，P＜0.01） 和准确度 （χ2=11.21，P＜0.01）明显优于常规脱落细胞涂片，在特异性上差异无统计学意义（χ2=0.03，P=0.87）。详见表1。液基细胞学和常规脱落细胞学对应组织学分型诊断结果详见表2-3。

表1 纤支镜毛刷液基细胞学与常规脱落细胞学结果比较（n）

2.2 纤支镜毛刷液基细胞学与常规脱落细胞学分型诊断的准确性比较 以2015年WHO肺部肿瘤分类[2]为依据，结合实际组织学诊断结果对1902例标本进行分析，发现对腺癌的诊断，液基细胞学的敏感度高于脱落细胞学（P＜0.01），特异度低于脱落细胞学 （P＜0.01），准确度两者差异无统计学意义（P＞0.05）；对鳞癌的诊断，液基细胞学在敏感度、特异度和准确度上均高于脱落细胞学（均P＜0.01）；对非小细胞肺癌的诊断，液基细胞学特异度和准确度高于脱落细胞学（均P＜0.01），准确度两者差异无统计学意义（P＞0.05）；对小细胞肺癌的诊断，液基细胞学敏感度和准确度均高于脱落细胞学（P＜0.05和P＜0.01），特异度两者差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表4。

表2 液基细胞对应组织学分型诊断结果比较（n）

3 讨论

利用纤支镜毛刷取样检查作为肺癌早期诊断方法，具有操作简便、创伤小、取材范围大的特点，现已被广泛的运用于临床[3]。早期细胞学检查运用传统涂片法直接将样本涂片固定后染色，由于受血液、粘液等杂质影响，常造成背景模糊，细胞重叠严重，细胞形态结构不清晰，有效细胞数量少，严重影响病理医生阅片，容易出现漏诊误诊[4-5]。且由于本身技术限制，涂片后毛刷直接被丢弃，大量残留在毛刷上的样本无法保留，无法进行进一步检查。液基细胞学检查，可以完整的保留几乎所有样本，通过前期样本处理，可均匀的平铺成直径20mm圆形细胞层，细胞舒展，背景干净，便于诊断。且剩余样本可用于免疫组化和基因检测，减少了患者再次取样的麻烦。有研究表明液基细胞学检查相比传统涂片可明显提高样本的满意度与检出率[6]。但同样由于样本前期处理影响，液基细胞制片无法保留传统涂片中近似组织结构的形态，给诊断造成一定的困难。

对本次统计的1902例样本中，发现液基细胞学与常规脱落细胞学其特异度较高，而敏感度均相对偏低。可能原因为纤支镜毛刷刷检时未刷到病变样本，或刷检得到的病变细胞较少，且由于仪器统一取样，制片时的细胞量仅为所有样本的1/5，造成病理医生在阅片时无法找到足量诊断为阳性的依据，出现阴性诊断，或仅能描述性的诊断为找到非典型性或异形细胞，这与国内外众多研究基本一致[7-8]。当同时进行脱落细胞学与液基细胞学检查时，其取样时先将细胞涂于玻片上，再将剩余的毛刷样本放入非妇液基细胞保存液中，也有可能造成液基制片时有效细胞量不足。

表3 常规脱落细胞学对应组织学分型诊断结果比较（n）

表4 液基细胞学与常规脱落细胞学对主要肺癌类型的诊断价值（%）

本组诊断的结果显示，液基细胞学诊断的敏感度为52.78%、特异度为89.80%、准确度为75.39%；常规脱落细胞学诊断的敏感度为37.13%、特异度为92.11%、准确度为63.62%。液基细胞学在敏感度、特异度和准确度上均明显优于常规脱落细胞学。

肺癌的分型诊断对其后续治疗具有重要作用[9]，发现对腺癌的诊断，液基细胞学的敏感度高于脱落细胞学 （P＜0.01），特异度低于脱落细胞学 （P＜0.01），准确度两者差异无统计学意义（P＞0.05）；对鳞癌的诊断，液基细胞学在敏感度、特异度和准确度上均高于脱落细胞学（均P＜0.01）；对非小细胞肺癌的诊断，液基细胞学特异度和准确度高于脱落细胞学 （均P＜0.01），准确度两者差异无统计学意义（P＞0.05）；对小细胞肺癌的诊断，液基细胞学敏感度和准确度均高于脱落细胞学 （P＜0.05和P＜0.01），特异度两者差异无统计学意义（P＞0.05）。 总的来说，液基细胞学在诊断肺癌主要分型上优于脱落细胞学。这与液基细胞学制片前期处理掉了样本中的粘液、血细胞等杂质，使细胞更加清晰的平铺于玻片上有关，解决了常规脱落细胞红细胞过多、细胞重叠、背景杂质过多的问题。液基细胞学检查在制片过程中无挤压，细胞不易发生蜕变，细胞形态更加完整清晰，细胞核异型性明显，可以清楚地观察到核膜核仁特点，为最终诊断提供重要依据，且由于全自动制片染色，减少了人为因素造成的染色深浅等问题，使不同批次间的样本能保持基本一致的染色效果，便于医生的判读。

综上所述，液基细胞学技术解决了常规脱落细胞学背景杂乱，或由固定不及时等原因造成细胞核蜕变，最终造成诊断困难的问题，大大提高了肺癌检查的敏感度和准确度，并为肺癌分型诊断提供了重要依据，但由于纤支镜毛刷取样无法取到等问题造成的漏诊仍较难避免。建议采用液基细胞学技术处理纤支镜毛刷样本的同时，采用联合脱落细胞学筛查的方法，以便取得较科学的结论。随着液基细胞学标准化、规范化的操作技术不断普及与发展，其必将在肺癌早期筛查诊断中体现重要价值。