结直肠癌患者血清miR-106b-5p水平及临床意义

邱 敏,李森娟,凌怡庭,沈桂鑫,曹鸿峰

(1.浙江省嘉兴市第二医院肛肠科 314000;2.浙江省人民医院肛肠外科，杭州 310013)

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，发病率和病死率居高不下，早期结直肠癌大多没有明显临床症状，多数患者发现时已为晚期，术后5年生存率较低[1]。结直肠癌的早期诊断缺少灵敏度和特异度较高的指标[2]。miR-106b是miR-106b-25家族成员，在肾癌、食管癌等多种恶性肿瘤中高表达，具有调控肿瘤细胞生长、转化、侵袭、迁移等功能[3-4]，但其在结直肠癌中的意义尚不十分清楚。本文对结直肠癌患者血清miR-106b-5p水平及其意义进行研究，为临床提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择浙江省嘉兴市第二医院肛肠科2015年1月至2017年12月收治的60例结直肠癌患者作为结直肠癌组，同期60例健康体检者作为对照组。60例结直肠癌患者均进行手术治疗，手术前后均进行miR-106b-5p水平测定。纳入标准：结直肠癌患者均为行首次手术治疗，术前未进行放化疗等其他治疗的初诊患者，均经病理学明确诊断为结直肠癌；对照组身体健康，无恶性肿瘤病史。排除标准：糖尿病、高血压、肝肾疾病、心脑血管疾病等慢性疾病史者，严重烟酒嗜好者。结直肠癌组结肠癌24例，直肠癌36例；肿瘤位于左半结直肠45例，右半结直肠15例；患者年龄(59.32±4.35)岁；男42例，女18例；肿瘤直径小于或等于5 cm者26例，肿瘤直径大于5 cm者34例；临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期2例；高分化25例，中分化21例，低分化14例；淋巴结转移22例；远处转移5例；浸润深度：T1 12例，T2 14例，T3 16例，T4 18例。对照组患者年龄(59.45±4.16)岁；男38例，女22例，结直肠癌组和对照组年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂 引物由上海欧易生物医学科技有限公司设计合成，实时荧光聚合酶链反应(PCR)仪器及相关试剂盒购自美国Thermo Fisher公司。

1.3方法 收集患者性别、年龄、临床病理特点及血清癌胚抗原(CEA)水平等临床资料。对照组患者体检当日清晨抽取外周静脉血4 mL，结直肠癌患者抽取术前及术后1周外周静脉血4 mL，3 000 r/min离心10 min，取上清液，提取血清中总RNA，采用反转录试剂盒将RNA反转录合成cDNA，反转录反应条件为37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min，以cDNA为模板，采用荧光定量PCR法测定血清miR-106b-5p水平，miR-106b-5p引物序列为5′-AAA GUG CUG ACA GUG CAG-3′。反应条件为95 ℃ 3 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共50个循环，选U6为内参基因，U6 snRNA引物序列为5′-TTC GTG AAG CGT TCC ATA TTT T-3′。血清miR-106b-5p相对表达量以2-ΔΔCt表示。

2 结 果

2.1血清miR-106b-5p和CEA水平比较 结肠癌组和直肠癌组血清miR-106b-5p、CEA水平高于对照组(P<0.05)，结肠癌组和直肠癌组血清miR-106b-5p、CEA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组患者血清miR-106b-5p和CEA水平比较

a:P<0.05，与结肠癌组比较;b:P<0.05,与直肠癌组比较

2.2结肠癌组和直肠癌组患者手术前后血清miR-106b-5p和CEA水平比较 结肠癌组和直肠癌组患者手术后血清miR-106b-5p和CEA水平均低于手术前(P<0.05)。结肠癌组和直肠癌组之间手术前后血清miR-106b-5p和CEA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3血清miR-106b-5p诊断结直肠癌的ROC曲线分析 血清miR-106b-5p诊断结直肠癌的ROC曲线下面积为0.845(95%CI：0.771～0.954；P<0.01)，血清miR-106b-5p对结直肠癌的最佳诊断阈值为2.08，敏感度为83.7%，特异度为82.1%，见图1。

2.4血清miR-106b-5p水平与结直肠癌临床病理特点的关系 血清miR-106b-5p水平与结直肠癌临床分期、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05)，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移者血清miR-106b-5p水平高；血清miR-106b-5p水平与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、位置无显著相关性(P>0.05)，见表3。

表2 结肠癌组和直肠癌组患者手术前后血清miR-106b-5p和CEA水平比较

图1 血清miR-106b-5p诊断结直肠癌的ROC曲线

表3 血清miR-106b-5p水平与结直肠癌临床病理特点的关系

项目nmiR-106b-5p相对表达量tP年龄(岁)1.0070.318 ≤60393.53±0.51 >60213.68±0.62性别0.4160.679 男423.66±0.62 女183.59±0.54肿瘤直径(cm)0.8620.392 ≤5263.57±0.64 >5343.71±0.61临床分期6.274<0.01 Ⅰ～Ⅱ333.12±0.56 Ⅲ～Ⅳ274.19±0.76分化程度0.7620.449 高253.55±0.69 中、低353.69±0.71淋巴结转移9.466<0.01 是224.41±0.74 否382.92±0.48远处转移8.304<0.01 是54.58±0.61 否552.82±0.44浸润深度1.0160.314

续表3 血清miR-106b-5p水平与结直肠癌临床病理特点的关系

3 讨 论

随着生活水平的提高，结直肠癌的发病率有上升趋势，尽管结直肠癌的手术技术不断提高、治疗方法不断进步，仍有不少结直肠癌患者转移和复发，严重影响患者预后，因此寻找结直肠癌有效的早期诊断指标具有重要意义[5]。血清癌胚抗原水平是最早发现的结直肠癌患者的血清标志物，但癌胚抗原特异性比较低，在多数恶性肿瘤中具有不同程度升高，对结直肠癌的诊断价值不大，因此寻找敏感度和特异度比较高的结直肠癌诊断标志物是提高结直肠癌早期诊断水平的重要手段之一[6-7]。近年来，随着对miRNA研究的深入，发现循环血中miRNA在结直肠癌的早期诊断及预后评估等方面具有重要作用[8-9]。

miR-106b位于人类7q22染色体上，可与靶mRNA的3′非翻译区结合，通过抑制mRNA翻译或诱导mRNA降解调节基因表达[10-11]；miR-106b在多种肿瘤中表达水平升高，和恶性肿瘤的细胞生存、肿瘤生长、新生血管生成等关系密切[12-14]，如刘俊丽等[15]研究发现鼻咽癌组织中miR-106b水平高表达，与鼻咽癌病灶内细胞周期和侵袭关系密切；肖长艳等[16]研究发现miR-106b在食管鳞癌中呈高表达，与食管鳞癌的淋巴结转移和不良预后关系密切，可作为食管鳞癌诊断和预后的标志物；邵琳等[17]研究发现miR-106b在卵巢浆液性癌组织中高表达，miR-106b在卵巢浆液性癌的发生发展中具有重要作用，可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭。上述研究表明miR-106b在多种恶性肿瘤中高表达。miR-106b可通过与其靶基因结合调控细胞的增殖、分化及凋亡等过程，如桂连等[18]研究发现miR-106b可通过调控胰岛素分泌细胞(IPCs)诱导分化过程中Ngn3的表达；史文博等[19]研究发现miR-106b可通过靶向调节BTG3的表达调控非小细胞肺癌细胞的增殖和凋亡。结直肠癌为常见的消化道恶性肿瘤，miR-106b与结直肠癌的关系如何尚不十分清楚，本文对结直肠癌患者血清miR-106b-5p水平进行研究，发现结直肠癌患者血清miR-106b-5p水平升高，结直肠癌患者治疗后血清miR-106b-5p水平下降；血清miR-106b-5p诊断结直肠癌的ROC曲线下面积为0.845，敏感度为83.7%，特异度为82.1%；血清miR-106b-5p水平与结直肠癌的临床分期和转移关系密切。miR-106b-5p水平与结直肠癌的临床分期和转移关系密切，考虑可能为miR-106b-5p与其相关的靶基因结合调控结直肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭，从而在结直肠癌的临床分期和转移中发挥重要作用。至于miR-106b-5p通过与哪种靶基因结合调控结直肠癌细胞生长和侵袭，以及通过哪种途径参与结直肠癌细胞的生长和侵袭过程尚需今后在体内外细胞实验中深入研究。

综上所述，miR-106b-5p参与结直肠癌的发生发展，miR-106b-5p有望成为结直肠癌早期诊断的标志物。