辣木叶粉对鹌鹑生产性能、免疫功能及血清抗氧化指标的影响

2019-05-23王志刚徐超李霞辉林诗宇杜夏夏冉崇霖舒刚

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2019年2期

王志刚，徐超，李霞辉，林诗宇，杜夏夏，冉崇霖，舒刚

（四川农业大学动物医学院，成都 611130）

辣木（Moringa oleiferaLam.）为辣木科（Moringaceae）辣木属（Moringa）植物，原产于印度，是一种有特殊经济价值且尚未被充分开发的多功能树种，近年来在我国西南地区广泛种植[1]。辣木干叶中粗蛋白含量高达30.3%，并含有19种氨基酸、17种脂肪酸及多种微量元素[2]。辣木叶不仅营养价值较高，而且具有丰富的药理活性，研究表明：辣木叶具有抗氧化[3]、降血糖[4]、降血脂[5]、抗菌[6]等功能。目前，辣木叶的开发利用愈发受到研究者们的重视，其中，将其开发为新型健康功能性饲料和绿色饲料添加剂的研究是一个重点。本文探讨了在鹌鹑养殖饲料中添加不同比例辣木叶粉对鹌鹑生长性能、免疫功能及血清抗氧化指标的影响，主要目的是解决鹌鹑养殖中对抗生素的过度依赖问题，寻求一种高效、安全的饲料添加剂来替代抗生素，为辣木叶粉作为鹌鹑饲料添加剂的应用推广提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料与饲粮

实验用辣木叶由四川通江县石墩子有限公司提供，品种为印度改良种辣木（Moringa oleiferaLam.），将收集的盛产期新鲜辣木叶放于60℃烘箱中烘干，粉碎机粉碎后，过60目筛，备用。基础日粮为玉米-豆粕型日粮，购自眉山金字塔饲料有限公司（四川），其组成和营养成分见表1。

1.2 实验仪器

酶标仪（Thermo公司，美国）；高速冷冻离心机（Thermo公司，美国）；恒温水浴锅（国华电器有限公司）；分析天平（赛多利斯公司，德国）；电子秤等。

表1 基础日粮组成及营养成分Table 1 Composition and nutritional ingredient of basal diet

1.3 实验动物分组与饲养管理

采用单因子完全随机设计，选取7日龄雌性黄羽鹌鹑1 600只（购自眉山佳业鹌鹑养殖专业合作社），分为4个处理组，每组4个重复，每个重复100只，处理组按照0%、2%、4%和8%比例添加辣木叶粉于基础日粮中，即空白组、2%辣木叶组、4%辣木叶组和8%辣木叶组，实验期28 d。饲养方式采用三层立体式笼养，自由采食和饮水，舍内温度、湿度、光照均等严格按照常规饲养管理要求进行，常规免疫。辣木叶粉及各组饲粮主要营养水平见表2。

表2 辣木叶粉及各组饲粮处理组主要营养成分（干物质基础）Table 2 Nutritional composition of diet in M.oleifera leaf powder and each treatment(dry material basis)

1.4 生产性能测定

实验期间观察记录各实验组鹌鹑的生理和精神状况，记录死淘数；准确记录每日每个重复的给料量，分别在鹌鹑7、14、21、28、35日龄时将其空腹处理12 h，于次日早晨以每个重复为单位逐组称量，同时称取每个重复组的剩余饲料量，并计算各周的平均日采食量、日增质量和料质量比。

1.5 免疫指标测定

于实验14、28 d后称量，每个重复随机抽取3只鹌鹑，颈静脉采血，收集后于室温静置2 h，4 000 r/min离心10 min，分离血清，于－20℃条件下保存，待测。随后将鹌鹑处死[按照四川农业大学动物福利与使用委员会的法律和指南（批准号2012—024）执行]，解剖，取胸腺、脾脏和法氏囊，迅速称其鲜质量。

1.5.1 免疫器官指数计算

免疫器官指数=免疫器官鲜质量/g÷活体质量/kg。

1.5.2 新城疫抗体测定

按照GB/T 16550—2008新城疫诊断技术方法，采用血凝和血凝抑制实验测定21和35日龄鹌鹑新城疫抗体效价水平，抗体水平以log2x表示。

1.5.3 血清蛋白和细胞因子测定

测定鹌鹑35日龄时血清总蛋白（total protein,TP）和白蛋白（albumin,Alb）含量。分别按照试剂盒说明，采用考马斯亮蓝法和溴甲酚绿比色法进行测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

按照试剂盒说明，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定鹌鹑35日龄时血清白介素2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ）含量，试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.6 血清抗氧化指标检测

按照试剂盒说明检测血清总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T-SOD）活力、谷胱甘肽过氧化氢酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）活力及丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.7 数据分析

实验数据用SPSS 17.0软件中的方差分析法（ANOVA）进行单因素方差分析，用最小显著差异（least significant difference,LSD）法进行两两比较检验，结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 日粮中添加辣木叶粉对鹌鹑生产性能的影响

由表3可知：2%辣木叶组和4%辣木叶组15日龄、21日龄、28日龄鹌鹑体质量均显著高于空白组和8%辣木叶组（P＜0.05）；4%辣木叶组35日龄体质量显著高于空白组（P＜0.05）；8%辣木叶组和空白组相比各阶段体质量均无显著性差异（P＞0.05）。平均日采食量方面，8%辣木叶组在7～14日龄显著低于其他各组（P＜0.05），在15～21日龄显著低于2%辣木叶组和4%辣木叶组（P＜0.05）。平均日增质量方面，2%辣木叶组在7～14、15～21、22～28日龄和7～35日龄均显著高于空白组（P＜0.05）；4%辣木叶组在实验期各个阶段均显著高于空白组（P＜0.05）。料质量比方面，2%辣木叶组在7～14、15～21、22～28日龄和7～35日龄均显著低于空白组（P＜0.05）；4%辣木叶组在实验期各个阶段均显著低于空白组（P＜0.05）；8%辣木叶组在7～14、15～21和7～35日龄均显著低于空白组（P＜0.05）。

表3 添加辣木叶粉对鹌鹑生产性能的影响（n=1 600）Table 3 Effects of M.oleifera leaf powder on production performance of quails(n=1 600)

2.2 日粮中添加辣木叶粉对鹌鹑免疫器官指数的影响

由表4可知，各实验组与空白组相比，免疫器官指数均有增长趋势。在21日龄时，4%辣木叶组和8%辣木叶组脾脏指数显著高于空白组（P＜0.05）；8%辣木叶组法氏囊指数显著高于空白组和2%辣木叶组（P＜0.05）；各实验组与空白组相比胸腺指数均有不同程度的提高，但无显著性差异（P＞0.05）。在35日龄时，4%辣木叶组和8%辣木叶组脾脏指数显著高于空白组（P＜0.05）；4%和8%辣木叶组法氏囊指数均显著高于空白组（P＜0.05）；8%辣木叶组胸腺指数显著高于空白组和2%辣木叶组（P＜0.05）。

2.3 日粮中添加辣木叶粉对鹌鹑新城疫抗体水平的影响

由表5可知，各实验组新城疫抗体水平与空白组相比均有不同程度的提高。21日龄时，8%辣木叶组显著高于空白组（P＜0.05）；2%、4%辣木叶组与空白组相比差异不显著（P＞0.05）。35日龄时，4%辣木叶组和8%辣木叶组显著高于空白组（P＜0.05）；2%辣木叶组与空白组相比差异不显著（P＞0.05）。

表4 添加辣木叶粉对鹌鹑免疫器官指数的影响（n=48）Table 4 Effects of M.oleifera leaf powder on the immune organ indices of quails(n=48) g/kg

表5 添加辣木叶粉对鹌鹑新城疫抗体水平的影响（n=48）Table 5 Effects of M.oleifera leaf powder on Newcastle disease antibody level of quails(n=48)

2.4 日粮中添加辣木叶粉对鹌鹑血清蛋白含量和细胞因子的影响

由表6可知：各实验组与空白组相比血清总蛋白含量均无显著性差异（P＞0.05）；实验组与空白组相比血清白蛋白含量有提高的趋势，但组间无显著性差异（P＞0.05）；各实验组白介素2和γ-干扰素含量与空白组相比均有提高的趋势，其中，4%辣木叶组和8%辣木叶组白介素2和γ-干扰素含量都显著高于空白组（P＜0.05）。

表6 添加辣木叶粉对鹌鹑血清蛋白和细胞因子的影响（n=48）Table 6 Effects of M.oleifera leaf powder on serum proteins and cytokines of quails(n=48)

2.5 日粮中添加辣木叶粉对鹌鹑血清抗氧化能力的影响

由表7可知，各实验组与空白组相比，血清抗氧化能力均有不同程度的增强。21日龄时，4%辣木叶组和8%辣木叶组总超氧化物歧化酶活力均显著高于空白组（P＜0.05），且丙二醛含量显著低于空白组（P＜0.05）；8%辣木叶组总抗氧化能力显著高于空白组（P＜0.05）；各组谷胱甘肽过氧化物酶活力无显著性差异（P＞0.05）。35日龄时，4%辣木叶组和8%辣木叶组总抗氧化能力均显著高于空白组（P＜0.05）；2%、4%、8%辣木叶组丙二醛含量均显著低于空白组（P＜0.05）；各实验组谷胱甘肽过氧化物酶含量与空白组相比均有提高，但无显著性差异（P＞0.05）。

表7 添加辣木叶粉对鹌鹑血清抗氧化指标的影响（n=48）Table 7 Effects of M.oleifera leaf powder on serum antioxidant indexes of quails(n=48)

3 讨论

3.1 添加辣木叶粉对鹌鹑生产性能的影响

辣木叶中含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质等，将其作为饲料添加剂用于畜禽生产保健的实验已有不少报道[7]。习欠云等[8]报道，用辣木叶粉逐步替代达到8%的饲粮对蛋鸡的生产性能、蛋品质、蛋黄营养成分、血清生化指标等均无不良影响。李树荣等[9]报道，用添加辣木叶粉的饲粮饲喂狄高鸡，对促进体质量增加和降低料肉比方面效果显著，且添加量以10%～15%为最佳，但同时发现，辣木叶作为添加剂，狄高鸡的前期生长速率比后期要慢许多。本实验表明，日粮中添加不同比例的辣木叶粉对鹌鹑的平均日采食量无显著影响，添加2%和4%辣木叶粉可显著提高鹌鹑的体质量和平均日增质量，显著降低各个日龄阶段的料质量比。这可能是因为辣木叶粉中丰富的营养物质促进了幼期鹌鹑肠道的生长发育，从而提高了鹌鹑的消化吸收功能。但是本实验也发现，当辣木叶粉添加量提高至8%时，鹌鹑采食量、平均日增质量有一定的降低，特别是在鹌鹑7～21日龄阶段。这与李树荣等[9]的报道类似。笔者认为，对于消化系统发育尚不完善的幼鹌鹑而言，过多的辣木叶粉添加量导致饲料中粗纤维增多，影响其对饲料中营养物质的消化吸收，随着鹌鹑的生长，机体消化吸收能力增强，这种负面的影响也逐渐消除。

3.2 添加辣木叶粉对鹌鹑免疫功能的影响

免疫器官的发育情况和功能强弱直接决定了禽类的免疫水平，免疫器官指数是反映免疫器官生长发育状况的重要指标[10]。据报道，植物糖苷类可提高肉鸡免疫器官质量和指数[11]。本实验表明，添加不同水平辣木叶粉对鹌鹑21日龄和35日龄时免疫器官指数均有一定的增长趋势，特别是添加4%和8%辣木叶粉对脾脏指数和法氏囊指数提高效果显著，说明辣木叶粉有促进鹌鹑免疫器官发育成熟的作用。研究表明，多种中药对新城疫抗体水平有增强效果[12]。刘建平等[13]报道，将辣木和葛花多糖提取物通过饮水喂给白羽肉鸡，显著提高了41日龄时禽流感和新城疫抗体滴度。本实验表明：添加不同水平辣木粉对新城疫抗体水平均有不同程度的提高，这可能是因为辣木中的黄酮类化合物具有抗菌、消炎、清除自由基等作用，提高了新城疫抗体的合成能力，从而增强了机体的特异性免疫功能。

细胞因子是细胞在刺激应答时产生的小分子物质，在免疫反应中发挥重要作用[14]。白介素-2在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用，γ-干扰素具有抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖和免疫调节等作用[15]。VONGSAK等[16]发现，在辣木叶的乙醇提取物中含有的槲皮素3-O-葡萄糖苷、绿原酸和山柰酚3-O-葡萄糖苷有抑制中性粒细胞氧化反应的作用，并且能够抑制中性粒细胞的趋化性迁移、调节人体吞噬细胞的免疫反应，这说明辣木叶有调节细胞活性的功能。本实验表明：添加辣木叶粉对血清白介素-2和γ-干扰素含量均有提高作用，且与辣木叶粉添加量呈量效关系，其中添加4%、8%辣木叶粉与空白组相比提高显著。这可能是因为辣木叶中的黄酮和多糖类化合物通过调节免疫细胞的活性，提高了血清中免疫细胞因子的含量，从而对机体的非特异性免疫功能起到了增强的作用。

3.3 添加辣木叶粉对鹌鹑血清抗氧化能力的影响

辣木叶含有大量的抗氧化物质，如抗坏血酸、类胡萝卜素、多酚和黄酮类物质，是有很强活性的天然抗氧化物质[17]。梁鹏等[18]报道，在辣木茎叶中提取的多糖组分对羟自由基及超氧阴离子均有清除作用，半数抑制率分别是7.252 8和2.501 1 mg/mL。RATSHILIVHA等[19]报道，辣木叶的醇提取物有一定的自由基清除能力，半数抑制率为34.72～109.62 μg/mL。DAS等[3]报道，辣木叶提取物能有效减轻由高脂食物饲喂小鼠引起的肝损伤，同时显著增加体内抗氧化指数及较好地抑制脂质过氧化情况。本实验表明，添加不同水平辣木叶粉能提高鹌鹑血清中总超氧化物歧化酶活力和总抗氧化能力，降低丙二醛含量，且与辣木叶粉添加量存在量效关系。以上结果说明，辣木叶粉对鹌鹑部分血清抗氧化指标产生了积极的影响，从而增强了鹌鹑的抗氧化能力，提高了机体的抵抗力和抗衰老能力。