代森联中杂质ETU的高效液相色谱分析方法研究

王 琴，武 鹏，石凯威，吴进龙*

(1.湖南加法检测有限公司，湖南 长沙 410017；2.农业农村部农药检定所，北京 100125)

1 前言

代森联(metiram)是一种乙撑二硫代氨基甲酸盐(EBDCs)，可作为保护性杀菌剂而被广泛应用于蔬菜水果在斑点落叶病等的防治[1]。随着对代森联产品的深入研究，人们发现在其生产及施用过程中会产生一种代谢产物——ETU[2]。与此同时，ETU同时也是代森联产品中的主要杂质，具有致癌、致畸及致突变的作用，引起研究者们的较大关注[3]。虽然目前已有相应的国家标准对生产中ETU含量进行严格的控制[4，5]，但为了更好地实现ETU含量测定，我们对ETU的分析方法进行了进一步的探究，并通过试验确定了ETU的最优分析测定条件，该方法操作简便、快速、准确，具有较好的精密度、准确度。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 甲醇：色谱纯；乙腈：色谱纯；水：超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；磷酸；ETU标样：已知质量分数，99.5%(由农业农村部农药检定所提供)；试样：60%吡唑醚菌酯·代森联水分散粒剂(由某公司提供)。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1100，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：250mm×4.6mm(id)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C185μm填充物。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(甲醇∶乙腈∶水)=(0.9∶0.7∶98.4，0～6min；90∶0∶10，6.01～14min；0.9∶0.7∶98.4，14.01～20min)(V/V)；流量：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：233nm；进样体积：5μL；保留时间：ETU约4.7min。

ETU标样和试样中ETU的高效液相色谱图(图1、图2)。

图1 ETU标样高效液相色谱图

图2 试样中ETU的高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取0.01g(精确至0.000 1g)ETU标样于100mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)定容至刻度，超声波振荡5min使标样溶解，冷却至室温，摇匀。用移液管移取上述溶液3mL于另一50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取0.3g(精确至0.000 1g)试样于50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀释至刻度，超声波振荡5 min使试样溶解，冷却至室温，摇匀，过滤，注：试样溶液应现配现用。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中ETU峰面积分别进行平均。试样中ETU的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

好不容易等来一辆车，却是人满为患。此时会犹豫，上还是不上？这么久没来车了，也许后面的车很快就会跟上来。上吧，至少上了就有希望；可是，这么多人，说不定后面的车比这一辆还快呢。纠结。

(1)

式中：

ω1——试样中ETU的质量分数，%；

A2——试样溶液中，ETU峰面积的平均值；

m1——ETU标样的质量，g；

ω——ETU标样的质量分数，%；

A1——标样溶液中，ETU峰面积的平均值；

100/3——标样溶液的稀释倍数。

3 结果与讨论

3.1 波长的选择 通过Agilent 1100高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得ETU的紫外波长扫描图(图3)。从图中可以看到ETU最大吸收波长在233nm处，在该波长处，灵敏度较高，干扰较少，故检测波长确定为233nm。

图3 ETU紫外吸收谱图

3.2 溶剂的选择 从同一样品平行称取3份试样约0.3g，分别用50mL甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3种不同溶剂溶解试样，过滤。同时，称取3份相同的ETU标样约0.01g，用上述方法配置3个标样溶液。对上述每个溶液连续进针进行分析，考察ETU峰面积随时间的变化，结果(图4、图5、表1和表2)。

试验结果显示，(1)ETU标样溶液中的ETU峰面积的相对变化率呈正态分布，且变化很小，说明ETU在选定的测定条件下是稳定的；(2)在甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3种溶剂中试样中ETU的峰面积总体均呈增加趋势(0～16h)，说明试样溶液中溶解有代森联，代森联在逐步分解产生ETU；(3)不同溶剂样品溶液ETU面积变化情况是显著不同的，0.5h时，甲醇(13.36%)、水(5.24%)、磷酸水(pH 4.0)(5.03%)，这种规律的变化可能是由于不同溶剂对代森联的溶解度的不同所引起的，也可能是由于代森联在不同溶剂中的分解速度不同造成的。综合以上结果，我们选择磷酸水(pH 4.0)作为最佳的溶样溶剂。

3.3 分析方法的线性相关性试验 通过上述实验确定色谱分析条件后，我们进行了分析方法的线性相关试验。在一定质量范围内，配制ETU标样母液，按照浓度递增的顺序分别移取不同体积ETU标样母液进行稀释。以ETU质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，测得ETU线性方程为y=47 582.704 6x-0.023 594 9，相关系数R为1.000 00。结果表明ETU在测试的质量浓度范围内线性关系较好。

3.4 分析方法的精密度试验 从同一样品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得ETU的标准偏差为0.005，变异系数为4.45%(表3)。

图4 在不同溶剂(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))条件下试样中的ETU峰面积随着时间的变化图(0～16h);

图5 在不同溶剂(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))条件下ETU标样峰面积随着时间的变化图(0～16h)

表1 0～16h内，试样中的ETU在不同溶剂(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面积的相对变化率(%)

表2 0～16h内，ETU标样在不同溶剂(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面积的相对变化率(%)

表3 分析方法的精密度试验结果

3.5 分析方法的准确度试验 采用已知质量分数的ETU试样(0.11%)中称取5个试样，分别加入一定量的ETU标样(99.5%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得平均回收率为93.53%(表4)。

表4 分析方法的准确度试验结果

4 结论

建立了高效液相色谱法检测60%吡唑醚菌酯·代森联水分散粒剂中杂质ETU的分析方法。详细研究了3种不同的溶样的溶剂对分析方法的影响，试验结果表明，相对于甲醇和水，选择磷酸水(pH 4.0)作为最佳溶剂，ETU在测试浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有操作简便、快速的特点，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法。