女宝胶囊气相特征图谱

郭美玲，王艺纯，孙丹，张红梅

1.吉林省药品检验所，吉林 长春 130033；2.中国人民解放军空军航空大学，吉林 长春 130000；3.吉林大学第一医院二部 药学部，吉林 长春 130000

女宝胶囊是由人参、川芎、红花、桃仁等45味中药材制成的中药成方制剂。具有调经止血、温宫止带、逐瘀生新的功效；用于治疗月经不调、行经腰腹疼痛、四肢无力、带下、产后腹痛等症[1]。全国共有43家生产企业、43个批准文号。女宝胶囊的现行国家药品标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第五册，标准号为WS3-B-0888-91，该标准中只收载性状和检查项，检验标准极低、检验指标控制不全，远不能满足中药现代化质量控制的要求。目前也有对女宝胶囊中丹皮酚、丹参酮ⅡA[2]、芍药苷[3]、延胡索乙素[4]等成分进行含量检测以及薄层色谱[6]研究的报道。尚未见对女宝胶囊中挥发油类成分的研究。为了对女宝胶囊质量进行整体、综合性控制，参照相关文献[3-8]，建立了处方中6味挥发油类含量高的植物药材的特征图谱，并对特征峰进行指认。

关于女宝胶囊品种的研究性文献较少，其中鉴别主要采用薄层色谱法(TLC)，而含量测定项主要采用高效液相色谱法(HPLC)。为对女宝胶囊的挥发油类成分进行整体、综合性控制，本研究以桂皮醛为参照物，采用气相色谱法对处方中的多种组分进行分离分析，建立了豆蔻、砂仁、荆芥穗、白术、肉桂、炮姜的特征图谱检查方法，并对特征峰进行指认，为女宝胶囊的质量评价提供了可靠依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 7890B气相色谱仪、FID检测器、柱温箱；BS 124S电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)。

1.2 试药

桂皮醛对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110710-201418)；正己烷(天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯)；无水硫酸钠(北京化工厂，分析纯)；水为超纯水。

女宝胶囊129批。

2 方法与结果

2.1 色谱柱的选择及系统适用性试验

本实验考察了HP-5(柱长为30 m，内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)和DB-FFAP毛细管柱(柱长为30 m，内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)两根色谱柱，结果DB-FFAP色谱条件下均能使供试品溶液很好分离，且各色谱峰保留时间适中。故选用DB-FFAP毛细管柱作为实验用色谱柱。

2.2 程序升温的考察

分别考察了1)初始温度100 ℃，保持5 min，以6 ℃·min-1的速率升温至220 ℃，保持30 min；2)初始温度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升温至220 ℃，保持30 min；3)初始温度100 ℃，保持15 min，以5 ℃·min-1的速率升温至220 ℃，保持30 min。结果在第2个程序升温条件下，供试品溶液中的各主要色谱峰达到完全分离，互不干扰，分离效果明显优于其他两个升温程序，故选择其作为本法的升温程序。

2.3 采集时间的考察

采用正文拟定的色谱柱程序升温，精密量取供试品溶液1 μL注入气相色谱仪，记录90 min的色谱图，结果在50 min之后无色谱峰出现，故确定采集时间为50 min。

2.4 测定方法

2.4.1 色谱条件 色谱柱为DB-FFAP毛细管柱(柱长为30 m，内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)；程序升温：初始温度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升温至220 ℃，保持30 min；进样口温度为240 ℃；检测器温度为250 ℃。理论板数按桂皮醛峰计算应不低于50 000。

2.4.2 溶液的制备

2.4.2.1 对照品溶液的制备 取桂皮醛对照品适量，精密称定，用正己烷溶解并稀释制成质量浓度为1.0 mg·mL-1的溶液，即得。

2.4.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约10 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水200 mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度3 mL，再加正己烷2～3 mL，连接回流冷凝管，加热至微沸，并保持2 h，放冷，分取正己烷液，然后用铺有无水硫酸钠约1 g的漏斗滤过[8]，滤液置5 mL量瓶中，挥发油测定器内壁再用少量正己烷洗涤，洗液并入上述量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，测定，即得。结果见图1～2，供试品溶液的特征图谱中应有16个特征峰，其中1个峰应与参照物峰的保留时间相同，且以桂皮醛参照物峰为S峰，计算其他15个特征峰的相对保留时间，其均应在相应规定值的±3%之内。规定值分别为为：0.15(峰1)、0.32(峰2)、0.40(峰3)、0.50(峰4)、0.64(峰5)、0.71(峰6)、0.73(峰7)、0.79(峰8)、1.00(峰S)、1.11(峰9)、1.13(峰10)、1.16(峰11)、1.21(峰12)、1.34(峰13)、1.54(峰14)、1.63(峰15)。

图1 桂皮醛对照品溶液色谱图

注：1.豆蔻；2、5.荆芥穗；3、4、6、7、9、10.砂仁；S.肉桂；8、12、14、15.白术；11、13.炮姜。图2 供试品溶液色谱图

2.5 精密度试验

取同一份供试品溶液，连续测定6次，以桂皮醛峰为参照物峰，分别计算其他15个特征峰的相对保留时间。结果各特征峰的相对保留时间的RSD均小于1.0%(n=6)，表明该仪器精密度良好[9]。

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0、4、8、16、24 h，按照正文拟定的方法进行测定，以桂皮醛峰为参照物峰，分别计算其他15个特征峰的相对保留时间。结果各特征峰的相对保留时间的RSD均小于1.0%，表明该方法的稳定性良好[9]。

2.7 重复性试验

取同一份供试品6份，精密称定，按照正文拟定的供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，并进行分析测定，以桂皮醛峰为参照物峰，计算其他15个特征峰的相对保留时间。结果各特征峰的相对保留时间的RSD均小于1.0%(n=6)，表明该方法的重复性良好[9]。

3 样品测定

按照正文拟定的条件，对5个不同生产厂家的129批样品进行分析测定，结果见图3、4。

图3 5家不同生产企业样品特征图谱

注：A.济邦；B.一正；C.双药；D.天强。图4 生产企业样品特征图谱

4 讨论

A企业生产的97批次样品均未检出荆芥穗的特征峰，97批次样品中有47批次未检出豆蔻的特征峰；C企业生产的5批次样品均未检出荆芥穗和豆蔻的特征峰；D企业生产的8批次样品均未检出荆芥穗特征峰。显示部分企业存在不投或少投药材，使用劣质药材投料的违规生产行为，或者是药材的灭菌方式不合理，造成药材的挥发性成分的流失。

不同企业间样品各特征峰峰面积差异较大，企业内样品各特征峰峰面积差异不大，表明不同企业间投料药材质量差异较大，企业内批次间投料药材质量较稳定。

本实验中供试品溶液制备方法考察了乙酸乙酯超声提取、乙酸乙酯回流提取、挥发油提取器提取等方法，发现回流提取样品溶液过于黏稠，超声提取图谱峰整体性差，挥发油提取器提取挥发性成分图谱整体性好，峰数目多且分离度好，故选取挥发油提取器提取方法制备供试品溶液。

分别对女宝胶囊中肉桂、炮姜、白术、砂仁、荆芥穗、豆蔻6味药材的挥发油提取液和相应的阴性对照挥发油提取液及相应的对照品溶液进行气相图谱测定，通过药材、阴性对照溶液和对照品溶液的图谱，提取出相应的药材特征峰。

文中2.4.3项下给出的供试品溶液色谱图是按照正常工艺自制小样分析得出的色谱图，具有可靠性和代表性，是符合该品种特点的特征性色谱图。

通过建立女宝胶囊的特征图谱方法，可以达到一测多评的目的，从整体上对多味药材的质量进行综合控制，并为女宝胶囊的质量评价提供可靠的依据。